close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

FR2518754A1

код для вставкиСкачать
 [loading]
«
Click the Minesoft logo at anytime to completely reset the Document
Explorer.
[1][(4)__Full Text.......]
Discovered items are automatically translated into English so that you
can easily identify them.<br/><br/>If you would like to see them in
the original text, please use this button to switch between the two
options . Discoveries: ([2]Submit) English
Click to view (and print) basic analytics showing the makeup of
discovered items in this publication. [help.png]
[3][_] (85/ 202)
You can use the refine box to refine the discovered items in the
sections below.<br/>Simply type what you are looking for, any items
that do not match will be temporarily hidden. [4]____________________
[5][_]
Molecule
(21/ 83)
[6][_]
G-AMINOBUTYRic acid
(23)
[7][_]
water
(22)
[8][_]
DES
(5)
[9][_]
tris-citrate
(5)
[10][_]
hydrochloric acid
(5)
[11][_]
diazepam
(4)
[12][_]
sucrose
(3)
[13][_]
suspen
(2)
[14][_]
dihydroalprenolol
(2)
[15][_]
Chromat
(1)
[16][_]
tritium
(1)
[17][_]
sodium chloride
(1)
[18][_]
NaCl
(1)
[19][_]
KCl
(1)
[20][_]
CaCl2
(1)
[21][_]
MgSO4
(1)
[22][_]
paration
(1)
[23][_]
tri-citrate
(1)
[24][_]
Ca2+
(1)
[25][_]
calcium chloride
(1)
[26][_]
isoguvacine
(1)
[27][_]
Physical
(51/ 81)
[28][_]
20 minutes
(6)
[29][_]
pH = 7,1
(5)
[30][_]
10 ml
(5)
[31][_]
30 minutes
(4)
[32][_]
de 800-1100 g
(3)
[33][_]
10 minutes
(3)
[34][_]
5 mg
(3)
[35][_]
15 minutes
(2)
[36][_]
de 10 l
(2)
[37][_]
900 l
(2)
[38][_]
500 l
(2)
[39][_]
de 0,9 ml
(2)
[40][_]
de 0,1 ml
(2)
[41][_]
2 nM
(2)
[42][_]
pH = 8,0
(2)
[43][_]
8 to 20 minutes
(1)
[44][_]
800 to 1100 g
(1)
[45][_]
18,000 to 22,000 g
(1)
[46][_]
10 to 20 minutes
(1)
[47][_]
7000 to 9000 g
(1)
[48][_]
5 to 15 minutes
(1)
[49][_]
35,000 to 45,000 g
(1)
[50][_]
20 to 30 minutes
(1)
[51][_]
pH of 6 to 8
(1)
[52][_]
10112 mole
(1)
[53][_]
de 18000-22000 g
(1)
[54][_]
9000 g
(1)
[55][_]
de 1000 g
(1)
[56][_]
de 8000 g
(1)
[57][_]
0,7435 g
(1)
[58][_]
0,0186 g
(1)
[59][_]
0,0144 g
(1)
[60][_]
0,012 g
(1)
[61][_]
1 g
(1)
[62][_]
1 mg
(1)
[63][_]
de 750 l
(1)
[64][_]
250 l
(1)
[65][_]
de 500 l
(1)
[66][_]
750 l
(1)
[67][_]
de 100 l
(1)
[68][_]
0,2 g
(1)
[69][_]
3 ml
(1)
[70][_]
17 ml
(1)
[71][_]
pH 4
(1)
[72][_]
10 l
(1)
[73][_]
de 10 ml
(1)
[74][_]
de 2,5 ml
(1)
[75][_]
5 moles
(1)
[76][_]
pH = 7,4
(1)
[77][_]
250 nM
(1)
[78][_]
1 ml
(1)
[79][_]
Gene Or Protein
(4/ 20)
[80][_]
Etre
(14)
[81][_]
EST A
(3)
[82][_]
Adre
(2)
[83][_]
DANS
(1)
[84][_]
Generic
(5/ 12)
[85][_]
BENZODIAZEPINES
(4)
[86][_]
radioactive
(3)
[87][_]
salt
(2)
[88][_]
acid
(2)
[89][_]
amine
(1)
[90][_]
Organism
(2/ 4)
[91][_]
animal
(2)
[92][_]
rat
(2)
[93][_]
Substituent
(1/ 1)
[94][_]
amino
(1)
[95][_]
Disease
(1/ 1)
[96][_]
Rupture
(1)
Export to file:
Export Document and discoveries to Excel
Export Document and discoveries to PDF
Images Mosaic View
Publication
_________________________________________________________________
Number FR2518754A1
Family ID 23452598
Probable Assignee Mta Koezponti Kemiai Kutato In
Publication Year 1983
Title
_________________________________________________________________
EN Title The invention relates to a process for the preparation of
stable receptor preparations suitable for determining the...
FR Title PROCEDE ET PREPARATION POUR LE DOSAGE DE LA QUANTITE DE
SUBSTANCES QUI SE FIXENT SUR DES RECEPTEURS CEREBRAUX ET PROCEDE POUR
LA PRODUCTION DE LADITE PREPARATION
Abstract
_________________________________________________________________
The invention relates to a process for the preparation of stable
receptor preparations suitable for determining the amount of
substances which bind to brain receptors by centrifuging, for 8 to 20
minutes, a homogenate of the brain or part thereof, which has been
prepared with an aqueous solution of a water-soluble inert material,
at an acceleration of 800 to 1100 g and removing the substance which
binds to brain receptors in the preparation from the supernatant
liquid, which latter is carried out in such a way that the supernatant
liquid is centrifuged at an acceleration of 18,000 to 22,000 g for 10
to 20 minutes, the resulting solid substance is homogenised anew in
distilled water, the homogenate is, where appropriate after freezing
and thawing, centrifuged at an acceleration of 7000 to 9000 g for 5 to
15 minutes, the supernatant liquid is removed and centrifuged at an
acceleration of 35,000 to 45,000 g for 20 to 30 minutes, the resulting
solid substance is washed with an aqueous buffer solution with a pH of
6 to 8, and finally a suspension of the solid substance is freeze
dried.
PROCEDE ET PREPARATION POUR LE DOSAGE DE LA QUANTITE DE SUBSTANCES QUI
SE FIXENT SUR DES RECEPTEURS CEREBRAUX ET PROCEDE POUR LA PRODUCTION
DE LADITE PREPARATION.
LA PREPARATION DE RECEPTEURS EST OBTENUE PAR CENTRIFUGATION D'UN
HOMOGENEISAT DE CERVELLE DONT LE SURNAGEANT EST ENSUITE CENTRIFUGE A
18000-22000G POUR DONNER UNE SUBSTANCE SOLIDE QUI EST A NOUVEAU
HOMOGENEISEE, L'HOMOGENEISAT ETANT EVENTUELLEMENT CONGELE ET
DECONGELE, PUIS CENTRIFUGE A 7000-9000G, POUR RECUEILLIR UN SURNAGEANT
QUI EST CENTRIFUGE A 35000-45000G POUR DONNER UNE SUBSTANCE SOLIDE QUI
EST LAVEE A L'AIDE D'UNE SOLUTION TAMPON DANS LAQUELLE ELLE EST MISE
EN SUSPENSION, PUIS LYOPHILISEE.
APPLICATION DE LADITE PREPARATION DE RECEPTEURS AU DOSAGE QUANTITATIF
DE SUBSTANCES QUI SE FIXENT SUR DES RECEPTEURS CEREBRAUX
(PRINCIPALEMENT DES BENZODIAZEPINES, DES SUBSTANCES B-BLOQUANTES
ADRENERGIQUES ET DE L'G-AMINOBUTYRic acid).
Description
_________________________________________________________________
La presente invention est relative a un procede et a une preparation
pour le dosage de la quantite de substances qui se fixent sur des
recepteurs cerebraux (principalement des benzodiazepines, des
substances ss-bloquantes adre- nergiques et de l'acide y-aminobutyric
acid). La presente invention est egalement relative a la production de
la preparation destinee a etre utilisee dans ce dosage.
En therapeutique, il est frequemment necessaire dans des buts
diagnostiques et/ou therapeutiques de doser la quantite des substances
qui se fixent sur des recepteurs cerebraux, qui sont presentes dans
les fluides corporels.
C'est ainsi par exemple que l'on peut tirer des conclusions concernant
certaines ancephaloses, de la teneur du liquide spinal en acide
y-aminobutyric acid.
L'on sait egalement que les fluides corporels contiennent
habituellement la substance a doser a une concen tration tres faible
(de l'ordre de 10 a 10112 mole), en sorte que la mesure de leur
quantite requiert des methodes speciales, tres sensibles.
Des methodes appropriees par spectrometrie de masse, par
chromatographie en phase liquide de forte puissance et par
fluorometrie par echange d'ions,pour le dosage de la teneur en acide
y-aminobutyric acid, sont decrites dans les publications suivantes: J.
Chromat. 118, 395 (1976), Brain
Res. 167, 297 (1979) et Anal. Biochemistry 101, 349 (1980).
Bien que les methodes qui viennent d'etre enumerees soient
suffisamment sensibles, elles presentent l'inconvenient commun de ne
pas permettre l'utilisation directe de l'echantillon biologique a
examiner, lors de la mesure, mais ne permettent son utilisation
qu'apres une preparation compliquee de l'echantillon (purification
comprenant plusieurs etapes, preparation d'un derive, etc.).
Pour la mise en oeuvre du test des radio-recepteurs qui a ete
developpe recemment pour le dosage de la teneur en acide
y-aminobutyric acid /J. Neurochem. 28, 1121 (1977),
Brain Res. 182, 99 (1980), Clinica Chimica Acta 109, 77 (1981)7 il
n'est pas necessaire de soumettre le fluide corporel a examiner a un
traitement prealable. L'inconvenient de ce test reside cependant en ce
que la suspension de recepteurs necessaire pour realiser l'examen doit
etre fraicnement preparee chaque fois, par les methodes connues, a
partir de cervelles d'animaux experimentaux. Dans ce but, il est
necessaire d'entretenir une animalerie et un laboratoire biochi mique
special, ce dont ne disposent generalement pas les hopitaux et les
cliniques.Il est donc necessaire de pouvoir disposer d'une preparation
de recepteurs qui puisse se cunser- ver a l'etat sec pendant un temps
illimite et puisse etre utilisee de facon fiable pour le dosage de la
quantite de substances qui se fixent sur des recepteurs cerebraux.
La production d'une preparation de recepteurs seche, qui puisse se
conserver indefiniment et qui soit d'ur. maniement simple, est decrite
dans la Demande de Brevet allemand publiee avant examen nO 29 02 071.
Selon le procede connu decrit dans cette Demande de Brevet, la
preparation de recepteurs est produite en homogeneisant du- tissu
encephalique animal avec une solution aqueuse d'une substance neutre,
hydrosoluble, avantageusement du sucrose, et en lyophilisant 1
'homogeneisat.
L'inconvenient de la preparation de recepteurs connue reside cependant
en ce qu'elle ne peut etre utilisee que pour le dosage de la
benzodiazepines et que, de plus, elle ne convient pas -pour la mesure
separee des differents types de benzodiazepines. Le dosage de la
quantite d'autres substances qui se fixent sur des recepteurs
cerebraux, par exemple d'acide y-aminobutyric acid et de ss-bloquants
adre nergiquesntest pas possible avec la preparation de recepteurs
connue.
Au cours de ses recherches, la Demanderesse a observe que ce defaut
peut etre attribue au fait que la preparation de recepteurs connue
contient la majeure partie des recepteurs cerebraux sous une forme
inactivee par des substances endogenes. En eliminant completement les
substances endogenes inactivantes, les sites des recepteurs cerebraux
peuvent etre liberes et la preparation peut ainsi doser chaque
substance qui peut se combiner a des recepteurs cerebraux.
La presente invention a en consequence pour objet un procede de
production d'une preparation de recepteurs stables,qui convient au
dosage de la quantite de substances qui se fixent sur des recepteurs
cerebraux. Conformement d l'invention, on centrifuge un homogeneisat
de cerveau ou d'une partie de cerveau preparee avec une solution
aqueuse d'une substance hydrosoluble inerte, a une vitesse de 800-1100
g, pendant 8 a 20 minutes, on separe le surnageant et on centrifuge
pendant 10 a 20 minutes a une vitesse de 18 000 - 22 000 g, on
homogeneise a nouveau la substance solide ainsi obtenue, dans de
l'water distillee, on congele l'homogeneisat, si on le desire, et on
le decongele, puis on centrifuge pendant 5 a 15 minutes a une vitesse
de 7000-9000. g, on separe le surnageant et on centrifuge pendant 20 a
30 minutes a une vitesse de 35 000 A 45 000 g, puis on lave au moins
une fois la substance solide obtenue avec une solution tampon aqueuse
a pH compris entre 6 et 8, on congele et on decongele au moins une
fois, si on le desire, pendant le lavage, une suspension obtenue a
partir de la substance solide et du liquide de lavage, et on
lyophilise enfin la suspension.
L'on obtient par ce procede, une preparation de recepteurs solide,
stable, de conservation illimitee, qui contient tous les sites des
recepteurs cerebraux a Petant actif et qui convient d'une facon
generale pour le dosage de la quantite de toutes les substances qui
peuvent se combiner avec les recepteurs-cerebraux, dans le test des
radio-recepteurs.
L'on a avantage a utiliser comme substance de depart une cervelle
d'animal (de rat, de boeuf, de volaille, etc.) a partir de laquelle un
homogeneisat de cervelle est prepare de la maniere decrite dans la
Demande de Brevet allemand publiee avant examen nO 29 02 071. L'on
ajoute avantageusement du sucrose en tant que substance inerte,
hydroso luble, au milieu aqueux. La premiere centrifugation realisee a
une vitesse de 800-1100 g permet la separation du precipite grossier
d'homogeneisat de cervelle ou d'une partie de cervelle; le surnageant
contient l'element de ase de la preparation de recepteurs.Cet element
de base de la preparation de recepteurs est separe du surnageant avec
des noyaux de cellules et des mytoc-hondries, a l'etat impur, par la
deuxieme etape de centrifugation realisee a une vitesse de 18000-22000
g. L'element de base de lapreparationderecep teurs contient, dans
cette- etape, la majorite predominante des sites de recepteurs actifs
encore a l'etat inactive par les substances endogenes Cette substance
solide est alors a nouveau homogeneisee dans de l'water distillee.
Puis les membranes cellulaires se rompent et les substances endogenes
qui bloquent les sites des recepteurs actifs passent dans le milieu
aqueux. La nouvelle homogeneisation a avantageusement lieu dans de
l'water distillee froide (a 4-100C).Pour realiser la nouvelle
homogeneisation d'une partie en poids de substance solide on utilise
avantageusement au moins 15 parties en poids d'water distillee. En
general on elimine d'autant plus efficacement les substances endogenes
bloquantes des sites recepteurs actifs que l'on utilise plus d'water
distillee pour la nouvelle homogeneisation. La limite superieure de la
water distillee est essentiellement determinee par un point de vue
economique. Pour homogeneiser une partie en poids de substance
solide,. on utilise generalement de 10 a 20 parties en poids d'water
distillee.
Pour accelerer la rupture des membranes cellulaires, on peut, si on le
desire, congeler et decongeler l'homogeneisat qui contient l'water
distillee.
Les noyaux cellulaires et les mytochondries qui ne contiennent pas de
sites recepteurs actifs et dont la presence influencerait de facon
desavantageuse les proprietes (par exemple la filtrabilite) de la
preparation de recepteurs sont elimines de l'homogeneisat qui contient
l'water distillee, par la premiere centrifugation realisee a une
vitesse de 7000 A 9000 g. L'element debase de la preparation est
separe du surnageant par la centrifugation suivante realisee a une
vitesse de 35 000 A 45 000 g, et cet element de base de la preparation
est alors lave au moins une fois avec une solution tampon aqueuse dont
le pH est compris entre 6 et 8 -avantageusement avec une solution
tampon tris-citrate (pH = 7,1)-.Le rendement de la purification peut
etre augmente en congelant et decongelant au moins une fois, pendant
le lavage, la suspension obtenue a partir du liquide de lavage et de
la substance solide. Lorsqu'on lave une seule fois, le liquide de
lavage est elimine et la substance solide obtenue est mise en
suspension dans une solution tampon aqueuse en quantite connue et a
teneur en salt connue. Cette suspension est lyophilisee. Lorsque la
substance solide est lavee a plusieurs reprises, la suspension formee
directement avec le dernier liquide de lavage est lyophilisee; la
quantite et la teneur en salt du liquide de lavage (solution tampon)
doivent naturellement egalement etre connues en pareil cas.
La preparation de recepteurs solide, stable, obtenue de cette maniere,
peut etre utilisee comme suit pour le dosage de la quantite de
substances qui se fixent sur des recepteurs cerebraux
On ajoute a la solution aqueuse qui contient la substance a examiner
marquee par un isotope radioactif (habituellement par du tritium), la
suspension de la preparation de recepteurs obtenue au moyen d'une
solution tampon aqueuse a pH compris entre 6 et 8 ou d'water
distillee. Le melange est incube, puis la substance solide est separee
par filtration, lavee avec de la solution tampon et la radioactivite
de la substance solide est determinee.On ajoute alors a la preparation
de recepteurs qui porte la substance a examiner marquee par un isotope
radioactif, une quantite connue de substance a examiner non
radioactive, on incube le melange, on separe la substance solide par
filtration, on lave a l'aide d'une solution tampon et on mesure a
nouveau la radioactivite. Cette derniere operatipn est repetee a
plusieurs reprises avec differentes quantites connues d'une substance
a examiner non radioactive. Sur la base des resultats de mesures, on
etablit une droite de calibrage concentration/radioactivitd (on
designe par "concentration" la concentration de la substance a
examiner non radioactive).
La quantite de substance a examiner presente dans le fluide corporel
(par exemple dans le liquide spinal) est dosee a l'aide des droites de
calibrage precitees en ajoutant a la preparation de recepteurs qui
porte la substance a examiner, marquee par un isotope radioactif, une
quantite connue de fluide corporel, en incubant le melange, en
separant la substance solide par filtration, en lavant celle-ci et en
mesurant sa radioactivite et en lisant sur les droites de calibrage la
concentration correspondant a la valeur mesuree.
Outre les dispositions qui precedent, l'invention comprend encore
d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va
suivre.
L'invention sera mieux comprise a l'aide du complement de description
qui va suivre, que se refere a des exemples de production de
preparations de recepteurs et de dosage a l'aide de ces preparations.
il doit etre bien entendu, toutefois, que ces exemples de production
de preparations de recepteurs et de dosage a l'aide de ces
preparations, sont donnes uniquement a titre d'illustration de l'objet
de l'invention, dont ils ne constituent en aucune maniere une
limitation.
EXEMPLE 1
Production d'une preparation de recepteurs
On decapite des rats males ae souche CFY. On preleve immediatement
leur cervelle et on la lave avec une solution physiologique glacee de
sodium chloride. La partie de la cervelle denommee "calotte" et la
partie occipitale de la cervelle ont ete enlevees et on a forme un
homogeneisat a partir du residu avec une solution aqueuse 0,32 molaire
de sucrose dont le volume est 15 fois celui du residu. L'homogeneisat
est centrifuge pendant 10 minutes a une vitesse de 1000 g, puis le
surnageant est separe et centrifuge pen- dant 10 minutes a une vitesse
de 20 000 g.La substance solide qui se separe est a nouveau
homogeneisee dans de l'water distillee froide (d + 40C) qui represente
15 fois le volume de la substance solide, puis l'homogeneisat est
centrifuge pendant 10 minutes a une vitesse de 8000 g. Le surnageant
est separe et centrifuge pendant 20 minutes a une vitesse de 40 000 g.
La substance solide obtenue est homogeneisee dans 50 fois son volume
d'une solution tampon 50 millimolaire de tris-citrate (a pH = 7,1) et
la suspension est a nouveau centrifugee a une vitesse de 40 000 g.
La derniere etape de lavage est repetee. La substance solide est alors
mise en suspension dans de la solution tampon qui represente 10 fois
son volume et elle est congelee et maintenue pendant 10 heures a -
200C. La suspension est decongelee, diluee jusqu'S 5 fois son volume a
l'aide d'water distillee et a nouveau centrifugee d une vitesse de 40
000 g. Ce cycle congelation-decongelation-centrifugation est repete 3
fois.
Apres la derniere decongelation, la suspension est divisee en
plusieurs parties, congelee et lyophilisee. On obtient une preparation
de recepteurs pulverulente qui est delayee avec de la solution tampon
ou de l'water distillee avant d'etre utilisee (pour la mesure). La
preparation de recepteurs pulverulente peut etre stockee-pendant des
annees sans modification.
EXEMPLE 2
Etablissement de la courbe de calibrage pour le test des
radio-recepteurs.
Pour etablir la courbe de calibrage on utilise des solutions ou des
suspensions presentant la composition suivante
Solution I.a: 0,7435 g NaCl, 0,0186 g KCl, 0,0144 g CaCl2,
0,012 g MgSO4 dissous dans 10 ml d'water bidis tillee.
Solution I.b: 1 g de serumalbumine de boeuf dissous dans
10 ml de solution I.a.
Solution II.a: 1 mg d'acide y-aminobutyric acid dissous dans
1000 iil de solution V.
Solution II.b: melange de 10 l de solution II.a et de
10 ml de solution V.
Solution II.c: melange de 100 iil de solution II.b et de
900 l de solution V.
Solution II.d: melange de 750 l de solution II.c et de
250 l de solution V.
Solution II.e: melange de 500 l de solution II.c et de
500 iil de solution V.
Solution II.f: melange de 250 iil de solution II.c et de
750 l de solution V.
Solution II.g: melange de 100 l de solution II.c et de
900 l de solution V.
Suspension III: 0,2 g de preparation de recepteurs produite suivant
l'exemple 1 sont mis en suspension dans 3 ml d'water bidistillee, puis
ia suspen sion est diluee par 17 ml de solution V.
Solution IV: solution d'acide 3H-y-aminobutyric acid presentant une
activite de 40 nCi/500 iil (solvant: solu tion aqueuse d'hydrochloric
acid a pH 4).
Solution V: solution tampon tris-citrate 50 millimolaire
(pH = 7,1) (a) Determination de la capacite defixationtotale (valeur
de Cc)
On melange successivement les solutions ou les suspen sions suivantes
500 l de solution IV,
10 l de solution I.b,
10 ijl de solution Vet
500 l de suspension III.
Le melange est incube durant 20 minutes a 40C, puis la substance
solide est filtree sur un filtre Micropore en fibres de verre du type
Whatman GF/C. La substance solide est delayee avec 10 ml de solution
de mesure par scintillation en phase liquide, de composition connue,
la suspens ion est abandonnee pendant 1 heure au refrigera teur, puis
secouee et la radioactivite de la suspension est determinee. La valeur
de radioactivite ainsi obtenue est designee par C c ceci represente la
quantite totale d'acide y-aminobutyric acid pouvant entre fixee par la
pre paration.
(b) Abaissement de la teneur en acide y-aminobutyric acid mar que par
un isotope radioactif par de l'acide y-aminobutyric acid non
radioactif less than determination des valeurs Cx
L'on procede comme decrit dans le paragraphe (a) mais au lieu de 10 ml
de solution V on utilise successive ment chaque fois 10 ml de solution
II.c, II.d, II.e,
II.f et II.g, respectivement. Les valeurs de radioacti vite mesurees
sont designees par Cx (c) Determination de la quantite d'acide
y-aminobutyric acid non specifiquement fixee (valeur i)
On procede comme decrit dans le paragraphe (a) ci-dessus, mais on
utilise a la place de 10 l de solution V, 10 iil de solution II.a.Dans
ce cas la quantite totale de l'acide 3H-y-aminobutyric acid
specifiquement fixee est abaissee par l'acide y-aminobutyric acid non
radioactif de la preparation. On obtient le facteur de correction qui
caracterise la acid3H-y-amine- butyrique qui ne se fixe pas
specifiquement a la prepa ration, par la mesure de la radioactivite de
l'dchan- tillon. Ce facteur de correction (valeur Cb) est deduit des
valeurs C c et Cx lors de l'etablissement des droites de calibrage.
Les resultats des mesures sont reunis dans le tableau I qui va suivre.
TABLEAU I
Designation Concentration de Impulsions de C - Cb de la l'acidy-amino-
comptage/ c b solution butyrique inactif minute Cx - Cb nM
II.a 105 160
II.c 10 2049 2,15
II.d 7,5- 2367 1,84
II.e 5,0 278D 1,55
II.f 2,5 3284 1,30
II.g 1,0 3754 1,13
V. - 4221 1,00
Si on represente les valeurs C -C /C -C en fonction de la
concentration de l'acide y-aminobutyric acid inactif, on obtient la
droite de calibrage.
Pour determiner la concentration en acide y-aminobutyric acid du
fluide corporel, on ajoute au melange 10 iil de fluide corporel a la
place de 10 iil de solution tampon (solution V) ou de solution d'acide
y-aminobutyric acid inactif de concentration connue, puis on mesure la
radioactivite de la preparation et on lit sur la droite de calibrage
la concentration en acide y-aminobutyric acid qui correspond a la
radioactivite mesuree.
EXEMPLE 3
Dosage de la quantite d'autres substances qui se fixent specifiquement
sur des recepteurs cerebraux 3.1 Dosage du 3H-diazepam
On met en suspension 5 mg de la preparation de recepteurs lyophilisee
produite conformement a l'exemple 1, dans un melange de 0,9 ml de
solution tampon aqueuse tris-citrate
(pH = 7,1) et de 0,1 ml d'water bidistillee. On ajoute a la suspension
2 nM de 3H-diazepam, on incube pendant 30 minu tes a 40C, puis on
filtre la substance solide sur un filtre Micropore en fibres de verre
de type Whatman GF/C et on lave a 8 reprises a l'aide de 2,5 ml de
solution tampon tri-citrate glacee. La radioactivite est mesuree comme
indique dans l'exemple 2.On determine ainsi la capacite totale de
fixation (Cc) de la preparation. La droite de calibrage est etablie a
l'aide de la methode de diminution decrite a l'exemple 2 et la
quantite de
3H-diazepam fixee de facon non specifique (facteur de correction Cb)
est determinee comme dans l'exemple 2.
3.2 Determination du 3H-diazepam dependant de l'acide y-
aminobutyric acid
On procede comme decrit a l'exemple 3.1 en ajoutant cepen dant encore
au melange d'incubation 2 X 10 5 moles d'acide y-aminobutyric acid.
3.3 Determination de l'acide 3H-y-aminobutyric acid dependant du Ca2+
On met en suspension 5 mg de la preparation de recepteurs lyophilisee
obtenue conformement a l'exemple 1, dans un melange de 0,9 ml de
solution tampon tris-HCl (pH = 7,4) et de 0,1 ml d'water bidistillee.
On ajoute a la suspension
250 nM de calcium chloride, 40 ssM d'isoguvacine et
5,4 FM d'acide 3H-y-aminobutyric acid. Le melange est incube pendant
30 minutes a la temperature ambiante, puis la substance solide est
filtree et lavee a la temperature ambiante a l'aide d'une solution
tampon tris-HCl (pH =
7,4).La radioactivite est mesuree comme dans l'exemple 2 le facteur de
correction (Cb) est determine comme decrit a l'exemple 2 3.4 Dosage du
3H-dihydroalprenolol
On met en suspension 5 mg de la preparation de recepteurs lyophilisee
obtenue conformement a l'exemple 1, dans un
1 ml de solution tampon tris-HCl (pH = 8,0). On ajoute a la suspension
2 nM de 3H-dihydroalprenolol, on incube pendant 30 minutes a la
temperature ambiante, puis on filtre la substance solide et on la lave
a la temperature ambiante a l'aide d'une solution tampon tris-HCl (pH
= 8,0)
La radioactivite est mesuree comme decrit a l'exemple 2 le facteur de
correction (Cb) est determine selon la methode decrite a l'exemple 2.
La quantite (Cc - Cb) de 3H-ligands fixee de facon specifique est
indiquee dans le tableau II ci-dessous.
TABLEAU II
Numero d'exemple 3H-ligand fixe de facon specifique fMole/ml fMole/ml
3.1 - 111
3.2 231
3.3 22
3.4 19
3.4 19
Ainsi que cela ressort de ce qui precede, l'inven- tion ne se limite
nullement a ceux de ses modes de mise en oeuvre, de realisation et
d'application qui viennent d'etre decrits de facon plus explicite;
elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir a
l'esprit du technicien en la matiere, sans s'ecarter du cadre, ni de
la portee, de la presente invention.
Claims
_________________________________________________________________
REVENDICATIONS
1) Procede de production d'une preparation de recepteurs stable, qui
convient au dosage de la quantite de substances qui se fixent sur des
recepteurs cerebraux, dans lequel un homogeneisat de cervelle ou d'une
partie de cervelle prepare avec une solution aqueuse d'une substance
hydrosoluble inerte, est centrifuge pendant 8 a 20 minutes a une
vitesse de 800-1100 g et l'element de base de la preparation est
separe du surnageant, lequel procede est caracterise en ce que le
surnageant est centrifuge a une vitesse de 18 000 A 22 000 g pendant
10 a 20 minutes, la substance solide ainsi obtenue est homogeneisee
nouveau dans de l'water distillee, l'homogeneisat est congele et
decongele, si on le desire, puis centrifuge pendant 5 a 15 minutes a
une vitesse de 7 000 A 9 000 g, le surnageant est separe, centrifuge
pendant 20 a 30 minutes a une vitesse de 35 00( greater than A 45 000
g, la substance solide obtenue est lavee au moins une fois a l'aide a
d'une solution tampon aqueuse dont le pH est compris entre 6 et 8, la
suspension constituee par la substance solide et liteau de lavage est,
si on le desire, congelee et decongelee au moins une fois pendant le
lavage et enfin la suspension est lyophilisee d'une maniere connue.
2) Procede selon la revendication 1, caracterise en ce que la nouvelle
homogeneisation est realisee dans de l'water distillee a une
temperature comprise entre 4 et 100C.
3) Procede selon la revendication 1 ou la revendication 2, caracterise
en ce que l'on utilise 10 a 20 parties en volume d'water distillee
pour une partie en volume de substance solide, pour la nouvelle
homogeneisation.
4) Procede selon la revendication 1, caracterise en ce que l'on
utilise pour le lavage une solution tampon de tris-citrate- a pH =
7,1.
5) Preparation de recepteurs caracterisee en ce qu'elle est preparee
en mettant en oeuvre le procede selon l'une quelconque des
revendications 1 a 4.
6) Procede de dosage de la quantite de substances qui se fixent sur
des recepteurs cerebraux, au moyen d'un test de radio-recepteurs connu
en lui-meme, caracterise en ce que l'on met en oeuvre pour le test une
preparation de recepteurs constituee par une substance preparee
conformement a l'une quelconque des revendications 1 a 4.
7) Procede selon la revendication 6, caracterise en ce que l'on dose
la quantite d'acide y-aminobutyric acid presente dans le liquide
spinal.
? ?
Display vertical position markers.<br/><br/>This option will display
the relative positions of currently selected key terms within the full
document length.<br/><br/>You can then click the markers to jump to
general locations within the document, or to specific discoveries if
you know whereabouts in the document they occur. [99][_]
Open a preview window.<br/><br/>This window will provide a preview of
any discovery (or vertical marker) when you mouse over
it.<br/><br/>The preview window is draggable so you may place it
wherever you like on the page. [100][_]
[static.png]
[close.png]
Discovery Preview
(Mouse over discovery items)
[textmine.svg] textmine Discovery
« Previous
Multiple Definitions ()
Next »
Enlarge Image (BUTTON) ChemSpider (BUTTON) PubChem (BUTTON) Close
(BUTTON) X
(BUTTON) Close
(BUTTON) X
TextMine: Publication Composition
FR2518754
(BUTTON) Print/ Download (BUTTON) Close
1. Welcome to TextMine.
The TextMine service has been carefully designed to help you
investigate, understand, assess and make discoveries within patent
publications, quickly, easily and efficiently.
This tour will quickly guide you through the main features.
Please use the "Next" button in each case to move to the next step
of the tour (or you can use [Esc] to quit early if you don't want
to finish the tour).
2. The main menu (on the left) contains features that will help you
delve into the patent and better understand the publication.
The main feature being the list of found items (seperated into
colour coded categories).
3. Click the Minesoft logo at any time to reset TextMine to it's
initial (start) state.
4. You can select which part of the document you'd like to view by
using the pull down menu here.
You can select "Full Text" to view the entire document.
5. For non-latin languages, (in most cases) full text translations
are available, you can toggle them on and off here.
You can also toggle the inline discovery translations between
English and their original language.
6. The pie chart icon will open a basic statistical breakdown of the
publication.
7. The sort icon allows you to sort the listed categories based on
the number of instances found.
Click to toggle between ascending and descending.
8. You can use the refine box to refine the discovered items in the
sections below.
Simply type what you are looking for, any items that do not match
will be temporarily hidden.
9. The publication has been analysed and we have identified items
within it that fit into these categories.
The specific items found are listed within the category headings.
Click the section header to open that section and view all the
identitfied items in that section.
If you click the checkbox all items in that section will be
highlighted in the publication (to the right).
The best thing to do is to experiment by opening the sections and
selecting and unselecting checkboxes.
10. The main output window contains the publication full text (or part
thereof if selected).
11. The Tools section contains tools to help you navigate the
"discovered" (highlighted) items of interest.
The arrows and counter let you move through the highlighted items
in order.
12. Other tools include a "Preview" option [ [preview.png] ] and the
ability to mark the relative locations of highlighted items by
using the "Marker" option [ [marker.png] ].
Try these out to best understand how they work, and to discover if
they are of use to you.
13. Items selected from the menu on the left will be highlighted in
the main publication section (here in the middle of the screen).
Click them for further information and insights (including
chemical structure diagrams where available).
14. Please experiment with TextMine - you cannot make any permanent
changes or break anything and once your session is closed (you've
log out) all your activity is destroyed.
Please contact Minesoft Customer Support if you have any questions
or queries at: [email protected]
[101]____________________
[102]____________________
[103]____________________
[104]____________________
[105]____________________
[106]____________________
[107]____________________
[108]____________________
[109]____________________
[110]____________________
[BUTTON Input] (not implemented)_____ [BUTTON Input] (not
implemented)_____
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
37 Кб
Теги
fr2518754a1
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа