close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Прогностическое значение исследования полиморфизма гена второй фазы детоксикации NAT2 и перекисного метаболизма при хронической обструктивной болезни легких

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
НОВИКОВА Наталия Евгеньевна
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА ВТОРОЙ
ФАЗЫ ДЕТОКСИКАЦИИ NAT2 И ПЕРЕКИСНОГО
МЕТАБОЛИЗМА ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ
ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ
14.01.04 – Внутренние болезни
АВТОРЕФЕРАТ
на соискание учёной степени
кандидата медицинских наук
АСТРАХАНЬ – 2015
1
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном
учреждении высшего профессионального образования
«Астраханский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
Научный руководитель: КУДРЯШЕВА Ирина Александровна,
доктор медицинских наук, доцент
Официальные оппоненты:
КОСМАЧЕВА Елена Дмитриевна, доктор медицинских наук,
профессор, ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский
университет» Минздрава России, кафедра терапии №1 ФПК и
ППС, заведующая кафедрой
ШАПОВАЛОВА Татьяна Германовна, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет» Минздрава России, кафедра терапии педиатрического и стоматологического факультетов, профессор кафедры
Ведущая организация:
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего
профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Защита состоится «18» декабря 2015 г. в 14 часов на заседании совета Д 208.005.01 по защите диссертаций на соискание
учѐной степени кандидата наук при ГБОУ ВПО «Астраханский
государственный медицинский университет» Минздрава России
(414000, Россия, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на
сайте http:agma.astranet.ru ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России
Автореферат разослан «____»__________________2015 г.
Учѐный секретарь
диссертационного совета,
к.м.н., доцент
Л.В. Заклякова
2
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) – распространѐнное заболевание
системы дыхания, являющееся одной из основных причин
нетрудоспособности, инвалидности, значительно снижающее
качество жизни пациентов и занимающее четвѐртое место
среди причин смерти в промышленно развитых странах. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения,
ежегодно от ХОБЛ погибают около 3х миллионов человек.
(А.И. Синопальников, А.В. Воробьев, 2007).
Разработка современных достоверных методов, позволяющих прогнозировать особенности течения ХОБЛ, является одной из актуальных задач пульмонологии. Перспективными в этом плане считаются исследования, посвященные
изучению вклада генетических маркеров в развитие и прогрессирование ХОБЛ. Для выяснения роли конкретных генов,
задействованных в развитии ХОБЛ, в современной генетике
многофакторных заболеваний широко используется метод,
основанный на исследовании ассоциации полиморфных вариантов генов, продукты которых потенциально задействованы в развитии и регуляции тех или иных звеньев патогенеза
заболевания (В.С. Баранов, 2009). Важными факторами, определяющими течение и прогноз заболевания, являются полиморфизм гена второй фазы детоксикации ксенобиотиков и
уровни продуктов перекисного окисления липидов, белков. В
доступной нам литературе нет работ, в которых целенаправленно рассматривается клинико-диагностическое и прогностическое значение полиморфизма гена второй фазы детоксикации, что открывает новые перспективы для проведения
исследования. Работы, посвящѐнные данной проблеме, отличаются констатацией лишь отдельных параметров.
Цель исследования. Оптимизировать прогноз особенностей течения хронической обструктивной болезни лег-
3
ких у лиц русской национальности, проживающих на территории Астраханской области, на основе изучения ассоциации
аллельных вариантов гена второй фазы детоксикации NAT2 и
продуктов перекисного метаболизма липидов, белков и антиоксидантной защиты.
Задачи исследования
1. Проанализировать и оценить вклад частоты аллельных вариантов гена второй фазы детоксикации NAT2 в развитие хронической обструктивной болезни легких в сопоставлении с соматически здоровыми лицами русской национальности Астраханской области
2. Провести комплексный анализ ассоциации аллельных вариантов гена 2-й фазы системы детоксикации NAT2 у
больных хронической обструктивной болезнью легких в зависимости от пола, фактора курения, степени тяжести и длительностью обострения заболевания
3. Провести анализ частоты полиморфных аллелей гена второй фазы системы детоксикации NAT2 с уровнем показателей перекисного метаболизма белков, липидов и антиоксидантной системы, С-реактивного протеина у больных хронической обструктивной болезнью легких
4. Оценить вклад частоты полиморфных аллелей гена
второй фазы системы детоксикации NAT2 на влияние частоты рецидивов и характер обострения хронической обструктивной болезни легких
5. Провести анализ ассоциации полиморфизма гена
второй фазы детоксикации NAT2 у больных хронической обструктивной болезнью легких с гемодинамическими типами
микроциркуляции, наличием ишемической болезни сердца и
артериальной гипертензии у больных ХОБЛ.
Научная новизна исследования
Впервые с привлечением современных методов исследования изучена связь полиморфных вариантов гена вто-
4
рой фазы детоксикации NAT2 у больных ХОБЛ русской национальности, проживающих на территории Астраханской
области, с формированием заболевания. Проведен комплексный анализ ассоциации аллельных вариантов гена 2-й фазы
системы детоксикации NAT2 у больных ХОБЛ в зависимости
от пола, фактора курения, показателей спирометрии, степени
тяжести и длительности обострения заболевания. Впервые
проанализированы частоты полиморфных аллелей гена второй фазы системы детоксикации NAT2 с уровнем показателей перекисного метаболизма белков, липидов и антиоксидантной системы, С-реактивного протеина у больных ХОБЛ.
Впервые оценено влияние полиморфных аллелей гена второй
фазы системы детоксикации NAT2 на частоту рецидивов и
характер обострения хронической обструктивной болезни
легких. У больных ХОБЛ выявлены ассоциации характера
распределения полиморфизма гена второй фазы системы детоксикации NAT2 с показателями, характеризующими состояние сердечно-сосудистой системы и различными типами
микроциркуляции.
Практическая значимость работы
Проведенное комплексное исследование по изучению
уровня продуктов перекисного оксиления липидов, белков,
антиоксидантной защиты, полиморфизма гена второй фазы
системы детоксикации NAT2, состояния сердечнососудистой системы с оценкой периферической гемодинамики у больных ХОБЛ позволяет формировать группы риска по
развитию сердечно-сосудистой патологии у больных ХОБЛ,
что в свою очередь обеспечивает своевременное проведение
адекватных профилактических мероприятий и, тем самым,
уменьшает количество госпитализаций (частота госпитализаций по поводу сердечно-сосудистых заболеваний у пациентов
ХОБЛ выше, чем при обострении самой ХОБЛ).
Анализ генетического полиморфизма гена второй фазы детоксикации NAT2 можно рекомендовать в качестве про-
5
гностического теста для оценки риска развития и течения
хронической обструктивной болезни легких.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Не обнаружена связь полиморфных вариантов гена
второй фазы детоксикации NAT2 с риском развития ХОБЛ
русской национальности, проживающих на территории Астраханской области.
2. Полиморфные варианты гена 2-й фазы системы детоксикации NAT2 у больных ХОБЛ определяют риск формирования тяжелой степени тяжести и бронхитической формы
ХОБЛ. Различия между мужчинами и женщинами, возрастом, наличия табакокурения в группе больных хронической
обструктивной болезнью легких и практически здоровых лиц
по частоте генотипов и аллелей гена второй фазы детоксикации NAT2 не обнаружены. Показатели спирографии у больных ХОБЛ с различным генотипом полиморфного локуса гена второй фазы детоксикации NAT2 свидетельствует о достоверно более низких значениях ОФВ1, индекса Тиффно и
мгновенных объемных скоростях выдоха (МОС).
3. Полиморфные варианты генотипов и аллелей гена
2-й фазы системы детоксикации NAT2 ассоциированы с
уровнем малонового диальдегида, карбонильных групп, ТБКактивных продуктов, супероксиддисмутазы и С-реактивного
протеина в крови у больных хронической обструктивной болезнью легких.
4. Обнаружен вклад частоты полиморфных аллелей
гена второй фазы системы детоксикации NAT2 в частоту рецидивов и характер обострения хронической обструктивной
болезни легких.
5. Низкий показатель микроциркуляции у больных
хронической обструктивной болезни легких ассоциируется с
носительством генотипа FF гена второй фазы системы детоксикации NAT2.
6
Апробация диссертации
Основные положения диссертации опубликованы в
Астраханском медицинском журнале (2012); Кубанском научном медицинском вестнике (2012, 2013); электронном научном журнале «Современные проблемы науки и образования» (2013). Материалы диссертации представлены на Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2012), Московском международном форуме кардиологов (Москва, 2013), в
учебном пособии (2013).
Связь с планом научных исследований
Диссертация выполнена в соответствии с планом НИР
ГБОУ ВПО Астраханский ГМУ Минздрава России в рамках
комплексно-целевой программы «Хроническая обструктивная болезнь легких: генетические, иммунологические и
функциональные критерии прогнозирования течения заболевания и эффективности проводимой терапии». Номер государственной регистрации №01201174980 – ЦМТИС г. Москва.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 8 работ, из
них 4 – в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК
Министерства образования и науки РФ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 134 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, 4 глав собственных
исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 73 отечественных и 58 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована
18 таблицами и 15 рисунками.
7
Внедрение результатов работы
В практику работы ГБУЗ АО «ГКБ №4 имени В.И.
Ленина» г. Астрахани внедрено проведение комплексного
генетического и иммуноферментного исследования у больных хронической обструктивной болезнью легких с целью
раннего прогнозирования формирования хронической обструктивной болезни легких. Теоретические положения диссертации используются в учебном процессе, в лекционном
курсе и на практических занятиях со студентами, врачамиинтернами и клиническими ординаторами на кафедре медицинской реабилитации ГБОУ ВПО Астраханский ГМУ Минздрава России.
Личный вклад автора
Основной вклад соискателя заключается в планировании, организации и проведении исследований по всем разделам диссертации, в оформлении цели и задач, определении
объѐма и формировании методов исследования, обработке
первичных данных, накоплении клинического материала,
статистической обработке результатов, а также в анализе
обобщѐнных материалов и подготовке публикаций, написании диссертации.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исходя из цели и задач исследования, было обследовано
120 человек, из них 90 пациентов с ХОБЛ и 30 практически здоровых лиц Астраханского региона в качестве контрольной группы. Все пациенты были госпитализированы в связи с обострением ХОБЛ в течение 2011-2013 гг. Диагноз ХОБЛ и стадии заболевания устанавливался по рекомендациям, представленным
программой «Глобальной стратегии диагностики, лечения и
профилактики хронической обструктивной болезни лѐгких».
8
Средний возраст обследованных больных составил
62,9 1,1 (10,4) года. По половому признаку преобладали мужчины – 64 (71,1%), женщин было – 26 (28,9%). Средняя длительность заболевания – 17,5 0,9 года. У мужчин средняя длительность заболевания была достоверно (р<0,05) выше, чем у
женщин (18,8 1,1 против 14,3 1,5 лет, соответственно). Доля
курящих составила 87,8% (79 человек). Средний индекс курения
составил 32,6 2 пачка-лет. У мужчин средний индекс курения
был достоверно выше (р<0,01), чем у женщин (37,6 2 пачка-лет
против 12,2 2,1 пачка-лет, соответственно). Из всех обследованных больных 5 больных отмечали в анамнезе длительное
воздействие производственных поллютантов (цементная и
строительная пыль, газоэлектросварочный аэрозоль, стекловолокно).
Анализ полиморфизма длины полученных рестрикционных фрагментов осуществляли с помощью вертикального горизонтального электрофореза в 7,5 % полиакриламидном геле. Конечная детекция осуществлялась в ультрафиолетовом свете на
трансиллюминаторе «Macrovue» («Рharmacia LKB», Великобритания) и фотографировали системе видео-гель-документации
(«Vilber Lourmat»).
Для количественного определения содержания ТБКактивных продуктов и карбонильных производных в сыворотке
крови использовали диагностические наборы «ТБК-АГАТ»
фирмы «Биоконт», г. Москва, РФ. Определение активности супероксиддисмутазы (СОД) в сыворотке крови производилось с
использованием коммерческих диагностических наборов «SOD
kit» фирмы «Randox Laboratories LTD», Великобритания.
Определение уровня малонового диальдегида (МДА) –
одного из конечных продуктов перекисного окисления липидов
проводилось по методу K. Jagi в модификации M. Uchiyama, M.
Mihara. Определение уровня СРП производили с применением
диагностического набора «CRP (HS) Wide Range HTI» фирмы
«High Technology Inc.», США. Каталожный № HTI-С7568-100.
Исследование кожной микроциркуляции проводилось
методом лазерной допплеровской флоуметрии с помощью ла-
9
зерного анализатора микроциркуляции крови «ЛАКК-02» в одноканальной модификации.
Статистическая обработка данных выполнена с помощью электронных таблиц «Microsoft Excel», и пакета прикладных программ «Statistica for Windows» v. 6.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
На первом этапе исследования была определена частота встречаемости полиморфизма гена второй фазы детоксикации NAT2 в группе больных ХОБЛ и у соматически здоровых лиц (табл. 1).
Таблица 1
Распределение частот аллелей гена NAT2 у соматически
здоровых и больных ХОБЛ (абс/частота)
Генотип/аллель
S/S
S/F
F/F
S
F
Соматически
здоровые
(n=30)
15 (50%)
9 (30%)
6 (20%)
27 (67,5%)
13 (32,5%)
Больные
ХОБЛ (n=90)
54 (60%)
31 (34,4%)
5 (5,6%)
164 67,2%)
80 (32,8%)
2
p
1,37
0,422
0,22
0,635
Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей гена NAT2 между выборками больных ХОБЛ и соматически
здоровыми лицами не выявил статистически значимых различий. Наблюдаемое распределение частот генотипов не отличалось от теоретически ожидаемого по уравнению ХардиВайнберга. У больных ХОБЛ и практически здоровых лиц
жителей г. Астрахани преобладал гомозиготный генотип S/S.
Различия между больными ХОБЛ и практически здоровыми
лицами по частоте генотипов и аллелей были статистически
не значимы (χ2=1,37, df=2, р=0,422 и χ2=0,22, df=1, р=0,635
соответственно). Данные проведенного исследования свидетельствуют об отсутствии ассоциации полиморфизма гена
10
второй фазы детоксикации NAT2 с риском развития ХОБЛ у
лиц русской национальности Астраханского региона.
Нарушения со стороны фазы детоксикации организма
могут оказывать влияние на течение ХОБЛ. Представляет
интерес изучение вклада гена второй фазы детоксикации
NAT2 в формирование характера течения ХОБЛ. Статистически значимые различия выявлены при сравнении частот генотипов и аллелей гена NAT2 между подгруппами больных с
различной степенью тяжести ХОБЛ и соматически здоровыми лицами. Частоты аллелей S и F для II стадии ХОБЛ составили 27 (54%) и 23 (46%); для III стадии заболевания – 59
(76,2%) и 35 (43,8%); для IV стадии – 53 (68,9%) и 33 (31,1%);
для контроля – 27 (67,5%) и 13 (32,5%). Частоты генотипов
S/S, S/F и F/F в этих группах для II стадии ХОБЛ составили 2
(8%), 23 (92%), 0; для III стадии – 24 (47,8%), 11 (46,8%), 2
(5,4%); для 4 стадии – 8 (28,6%), 17 (60,7%), 3 (10,7%); для
контрольной группы – 15 (50%), 9 (30%), 6 (20%). При второй
степени ХОБЛ не обнаружен генотип F/F, в отличие от других стадий и группы контроля.
Следующий этап работы заключался в обнаружении
распределения генотипов и аллелей полиморфного локуса
гена NAT2 в зависимости от формы заболевания. Обнаружено статистически значимое увеличение лиц-носителей генотипов S/F, F/F и аллеля S среди больных ХОБЛ с бронхитической формой заболевания по сравнению с эмфизематозной.
Показатель отношения шансов, определяющий риск
развития бронхитической формы ХОБЛ, у носителей генотипов S/F, F/F составил 8,65, 95% доверительный интервал
1,14-67,71 (χ2=4,06, df=1, p=0,041), а у носителей аллеля S –
8,09, 95% доверительный интервал 1,11-59,65 (χ2=4,19, df=1,
p=0,038). Анализ распределения генотипов и аллелей полиморфного локуса гена NAT2 в зависимости от возраста манифестации ХОБЛ не выявил статистически значимых различий ( 2=4,87, df=2, р=0,069).
11
На следующем этапе работы нами определена частота
встречаемости полиморфизма распределения генотипов и аллелей полиморфного локуса гена NAT2 в зависимости от пола. Частоты генотипов и аллелей у мужчин больных ХОБЛ
составили: S/S – 45 (50%), S/F – 25 (26,1%), F/F – 15 (13,9%),
у женщин S/S – 25 (26,1%), S/F – 15 (13,9%), F/F – 45 (50%).
Частоты аллелей в группе больных мужчин ХОБЛ составили: S – 164 (67,2%), F – 80 (32,8%), а у женщин S – 124
(64,2%), F – 54 (31,8%). Различия между мужчинами и женщинами в группе больных ХОБЛ по частоте генотипов и аллелей были статистически не значимы (χ2=0,19, df=2, р=0,899
и χ2=2,51, df=1, р=0,116 соответственно). Различия между
мужчинами и женщинами в группе больных ХОБЛ и практически здоровых лиц по частоте генотипов и аллелей были
статистически не значимы (χ2=0,32, df=2, р=0,799 и χ2=0,01,
df=1, р=0,896 соответственно)
Проведенный анализ показателей спирографии у
больных с различным генотипом полиморфного локуса гена
второй фазы детоксикации NAT2 свидетельствует о достоверно более низких значениях ОФВ1, индекса Тиффно и
мгновенных объемных скоростях выдоха (МОС), измеренных
в точках выдоха 25, 50 и 75% ЖЕЛ и характеризующих состояние крупных, средних и мелких бронхов, в группе пациентов с генотипами S/F и F/F.
Мы изучили частоту генотипов и аллелей гена NAT2 в
зависимости от продолжительности обострения ХОБЛ. В связи с этим пациенты ХОБЛ в зависимости от длительности
обострения были распределены на 2 группы. Первую группу
составили 25 больных с обострением ХОБЛ 7-10 дней. Вторую группу составили 23 человека с продолжительностью
периода обострения 15 и более дней. Все больные получали
одинаковое лечение, согласно стандартам по лечению больных ХОБЛ.
Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей по
гену NAT2 между выборками больных ХОБЛ не выявил ста-
12
тистически значимых различий (p>0,05). Частоты аллелей S и
F составили: 63,4% и 36,6% – в 1 группе, 64,8% и 35,2% – во
2 группе больных. Частоты генотипов S/S, S/F и F/F составили: 42, 1%, 41,3% и 16,7% – в 1 группе больных, 50,1%, 12,3%
и 37,6% – во 2 группе.
В результате исследования полиморфных вариантов
генотипов и аллелей гена NAT2 системы детоксикации ксенобиотиков были выявлены неслучайные ассоциации «функционально неблагоприятных» генотипов с развитием длительного обострения ХОБЛ.
Представляет интерес изучение вклада вторичного
продукта перекисного окисления липидов – малонового диальдегида – наряду с геном второй фазы детоксикации в
формирование характера течения ХОБЛ (табл. 2).
Таблица 2
Уровень малонового диальдегида в крови у больных ХОБЛ с
различным генотипом по полиморфизму гена NAT2
Показатель
МДА,
моль/л
Достоверность
различий
Практически здоровые
S/S (n=9)
S/F (n=21)
1
3,16
0,48
p1-2=0,001
2
2,27
0,45
Больные ХОБЛ
S/S
S/F
(n=34)
(n=51)
1
2
7,34
4,80
1,09
1,06
p1-2=0,001
p1-3=0,020
p2-3=0,756
F/F
(n=5)
3
5,16
0,90
Уровень МДА в крови у практически здоровых лиц
при генотипе S/S по полиморфизму локуса гена второй фазы
детоксикации NAT2 встречался у 9 доноров и составил
3,16 0,48 моль/л. Генотип S/F среди практически здоровых
лиц встречался у 21 донора, при этом уровень МДА составил
2,27 0,45 моль/л. Различия в уровне МДА у практически здоровых лиц были статистически значимы (p=0,001).
13
Представляет интерес изучение вклада продуктов перекисного окисления липидов – карбонильных групп – наряду с геном второй фазы детоксикации в формирование характера течения ХОБЛ (табл. 3).
Таблица 3
Уровень карбонильных групп (M SD) в крови
у практически здоровых лиц и больных ХОБЛ с различным
генотипом и аллелям по полиморфизму гена NAT2
Показатель
Карбонильные
группы,
ед.опт.пл./мл
Достоверность
различий
Практически здоровые
S/S
S/F
(n=9)
(n=21)
1
2
5,86
6,02
0,48
0,45
Больные ХОБЛ
p1-2=0,001
p1-2=0,001
p1-3=0,020
p2-3=0,046
S/S
(n=34)
1
10,14
1,09
S/F
(n=51)
2
12,77
1,06
F/F
(n=5)
3
15,15
0,90
Уровень карбонильных групп в крови у практически
здоровых лиц при генотипе S/S по полиморфизму локуса гена
второй фазы детоксикации NAT2 встречался у 9 доноров и
составил 5,86 0,48 ед. опт.пл/мл. Генотип S/F среди практически здоровых лиц встречался у 21 донора, при этом уровень карбонильных групп составил 6,02 0,45 ед. опт. пл/мл.
Различия в уровне карбонильных групп у практически здоровых лиц были статистически незначимы (p=0,001).
У больных ХОБЛ достоверно (p=0,001, p=0,020) высокий уровень карбонильных групп обнаруживался при генотипе F/F и составил 15,15 0,90 ед. опт.пл. л/мл. Уровень карбонильных групп у больных ХОБЛ при генотипе S/F и S/S статистически значимо не различался (p=0,756).
Накопление большого количества вторичных продуктов перекисного окисления липидов у больных ХОБЛ и выявление неслучайных ассоциаций «функционально неблаго-
14
приятных» генотипов второй фазы детоксикации NAT2 требует изучения вклада эндогенных антиоксидантов (супероксиддисмутазы и ТБК-активных продуктов) в ответ организма
на интоксикацию.
Таблица 4
Уровень супероксиддисмутазы (M SD) в крови
у практически здоровых лиц и больных ХОБЛ с различным
генотипом по полиморфизму гена NAT2
Показатель
СОД
(у.е./мл)
Достоверность
различий
Практически здоровые
S/S
S/F
(n=9)
(n=21)
1
2
23,18
21,11
0,44
0,22
p1-2=0,001
Больные ХОБЛ
S/S
S/F
(n=34)
(n=51)
1
2
17,76
20,61
0,12
1,01
p1-2=0,001
p1-3=0,020
p2-3=0,756
F/F
(n=5)
3
13,11
0,22
Уровень суперокиддисмутазы в крови у практически
здоровых лиц при генотипе S/S по полиморфизму локуса гена
второй фазы детоксикации NAT2 встречался у 9 доноров и
составил 23,18 0,44 у.е./мл. Генотип S/F у практически здоровых лиц встречался у 21 донора, при этом уровень супероксиддисмутазы составил 21,11 0,22 у.е./мл. Различия в
уровне супероксиддисмутазы у практически здоровых лиц
были статистически значимы (p=0,001).
Как видно из таблицы 4, уровень СОД у больных
ХОБЛ при генотипе S/S составил 17,76 0,12 у.е./мл, при S/F
– 20,61 1,01 у.е./мл, при F/F –13,11 0,22 у.е./мл.
Генотип S/S по полиморфизму локуса гена второй фазы детоксикации NAT2 среди практически здоровых лиц
встречался у 9 доноров, при этом уровень ТБК-активных
продуктов составил 2,18 0,2 мкмоль/л (табл. 5). Генотип S/F
среди практически здоровых лиц встречался у 21 донора, при
этом уровень ТБК-активных продуктов составил 1,8 0,02
15
мкмоль/л. Различия в уровне ТБК-активных продуктов у
практически здоровых лиц были статистически значимы
(p=0,001).
Таблица 5
Уровень ТБК-активных продуктов (M SD) в крови
у практически здоровых лиц и больных ХОБЛ с различным
генотипом по полиморфизму гена NAT2
Показатель
ТБКактивные
продукты
(мкмоль/л)
Достоверность различий
Практически здоровые
S/S (n=9)
S/F
(n=21)
1
2
2,18
1,8
0,2
0,02
Больные ХОБЛ
p1-2=0,001
p1-2=0,001
p1-3=0,030
p2-3=0,665
S/S
(n=34)
1
17,76
1,24
S/F
(n=51)
2
8,88
1,12
F/F (n=5)
3
13,52
0,21
Уровень ТБК-активных продуктов у больных ХОБЛ
при генотипе S/S составил 17,76 1,24 мкмоль/л, при S/F –
8,88 1,12 мкмоль/л, при F/F – 13,52 0,21 мкмоль/л.
Таким образом, в условиях активации воспалительных
реакций при ХОБЛ наблюдается интенсификация процессов
свободнорадикального окисления, как липидов, так и белков.
Степень выраженности ответа и вклада продуктов перекисного окисления липидов наряду с геном второй фазы детоксикации NAT2 в формирование и характера течения ХОБЛ, в
свою очередь, отображает тяжесть течения ХОБЛ, что может
являться диагностическим и прогностическим критерием течения заболевания.
При проведении корреляционного анализа нами была
выявлена зависимость средней силы, однако статистически
16
значимая, между частотой обострений ХОБЛ и уровнем малонового диальдегида и карбонильных групп (r=0,48 и r=0,52;
р=0,001). Также были выявлены сильная взаимосвязь между
уровнем малонового диальдегида и ОФВ1 (r=-0,62; p=0,001) и
слабой силы взаимосвязь между малоновым диальдегидом и
SaO2 (r=-0,38; р<0,001). Была выявлена отрицательная зависимость средней силы между уровнем каталазы и частотой
обострений ХОБЛ (r=0,46; p=0,001). Данные корреляционного анализа свидетельствуют, что чем выше частота обострений и выраженность обструкции, тем обнаруживается больший уровень конечного продукта малонового диальдегида и
карбонильных групп.
Таблица 6
Распределение частот генотипов и аллелей гена NAT2 у
больных ХОБЛ с разной частотой обострения (абс/частота)
Генотипы
или
аллели
S/S
S/F
F/F
S
Частота
обострений 1 раз
в год
и реже
(n=22)
20/90,9
2/9,1
–
39/93,2
6/6,8
Частота
обострений 2
раза в
год
(n=36)
21/58,3
14/39
1/2,7
51/77,8
18/22,2
Частота
обострений 3 раза
в год и
более
(n=32)
26/81,25
4/12,5
2/6,25
51/72,7
12/16,1
F
Достоверность
p1-2=0,052,
p1-3=0,352,
p2-3=0,362,
2
p1-2=0,055,
p1-3=0,199,
p2-3=0,604,
2
=3,79, df=1
=0,86, df=1
2
=0,83, df=1
2
=3,67, df=1
=1,65, df=1
2
=0,27, df=1
2
Среди обследованных больных ХОБЛ частота обострения болезни в год до 1 раза была у 22 человек (24,4%), 2
раза в год – у 36 пациентов (40,0%), 3 раза и больше в год – у
32 человек (35,6%). Распределение частот генотипов и аллелей гена NAT2 у больных ХОБЛ с разной частотой обострения болезни представлено в таблице 6.
17
Отмечена лишь тенденция к увеличению лицносителей генотипов S/S и выявления аллеля S среди больных ХОБЛ с часто рецидивирующим течением заболевания.
Статистически значимые различия выявлены при
сравнении частот генотипов и аллелей гена NAT2 между подгруппами больных с различной частотой обострения ХОБЛ и
соматически здоровыми лицами. Частоты аллелей S и F составили: 39/93,2% и 6/6,8% в группе больных ХОБЛ с частотой обострения 1 раз в год и реже; 51/77,8% и 18/22,2% – с
частотой обострения 2 раза в год; 51/72,7% и 12/16,1% – с
частотой обострения 3 раза в год.
Частота встречаемости генотипов S/S, S/F и F/F в этих
группах составила 20/90,9%, 2/9,1% и 0 при частоте обострения 1 раз в год и реже; с частотой обострения 2 раза в год –
21/58,3%, 14/39% и 1/2,7%; с частотой обострения 3 раза в
год – 26/81,25%, 4/12,5% и 2/6,25% соответственно. В группе
больных ХОБЛ с частотой обострения 1 раз в год и реже
ХОБЛ не обнаружен генотип F/F в отличие от других групп.
В нашем исследовании мы попытались оценить клинико-диагностическое и прогностическое значение показателей уровня С-реактивного протеина у больных ХОБЛ. С этой
целью было выполнено определение в динамике количественного содержания СРП в сыворотке крови у 90 пациентов.
Среди практически здоровых лиц генотип S/S по полиморфизму локуса гена второй фазы детоксикации NAT2 встречался у 9 доноров, при этом уровень СРП в крови составил
2,01 0,23 мкг/мл. Генотип S/F среди практически здоровых
лиц встречался у 21 донора, при этом уровень СРП составил
1,98 0,24 мкг/мл. Различия в уровне СРП у практически здоровых лиц были статистически не значимы (p=0,08). Уровень
СРП у больных ХОБЛ при генотипе S/S гена второй фазы
детоксикации NAT2 составил 7,66 1,44 мкг/мл, при S/F –
4,80 1,06 мкг/мл, при F/F – 8,22 0,40 мкг/мл.
Изменение микрогемодинамики является важнейшим
звеном патогенеза как бронхолегочных, так и сердечно18
сосудистых заболеваний. Выявлены статистически значимые
различия в распределении гемодинамических типов микроциркуляции у больных ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания ( 2=31,1, df=8, р=0,0001). С увеличением стадии заболевания возрастало количество лиц, имеющих патологические гемодинамические типы микроциркуляции. Стазический
гемодинамический тип встречался только у лиц с III и IV степенью тяжести ХОБЛ.
При наличии у больных ХОБЛ АГ и ИБС выявлялись
более выраженные нарушения микроциркуляции, характерные для таких неблагоприятных гемодинамических типов,
как застойный и стазический. В целом, различия в распределении гемодинамических типов микроциркуляции у больных
ХОБЛ в зависимости наличия сердечно-сосудистых заболеваний были статистически значимыми ( 2=26,5, df=12,
р=0,009).
Наличие как при артериальной гипертензии, при ишемической болезни сердца, так и при ХОБЛ неспецифического
воспаления низкой градации, может способствовать взаимоотягощению этих патологий и являться пусковым фактором
на пути формирования каждого заболевания.
Таблица 7
Распределение частот аллелей полиморфного локуса гена
второй фазы детоксикации NAT2 у больных ХОБЛ в зависимости от наличия артериальной гипертензии (абс/частота)
Аллели
S
F
Больные ХОБЛ
без АГ (n=53)
90/88,7%
16/11,3%
Больные ХОБЛ с
АГ (n=37)
62/75,5%
14/24,3%
Достоверность
p=0,034,
2
=4,32, df=1
Согласно результатам проведенного анализа, выявлены статистически значимые различия в распределении частот
генотипов по гену второй фазы детоксикации NAT2 у больных ХОБЛ с наличием ишемической болезни сердца и артериальной гипертензии. Пациенты с артериальной гипертонии
19
и ишемической болезни сердца и без них были сопоставимы
по стадии и форме ХОБЛ. Обнаружено статистически значимое увеличение лиц-носителей аллеля S среди больных
ХОБЛ при наличии артериальной гипертензии (табл. 7).
Не выявлено статистически значимых различий в распределении генотипов по полиморфизму гена второй фазы
детоксикации NAT2 между больными ХОБЛ с ассоциированной артериальной гипертензией и группой практически
здоровых лиц. У больных ХОБЛ с артериальной гипертензией частота генотипов составила: S/S – 20 (54,1%), S/F – 16
(43,2%), F/F – 1 (2,7%), у практически здоровых: S/S – 18
(60%), S/F – 11 (36,4%), F/F – 1 (3,3%) ( 2=0,3, df=2, р=0,869).
В настоящей работе не обнаружено ассоциации полиморфизма гена второй фазы детоксикации NAT2 со степенью
артериальной гипертензии у больных ХОБЛ. Вместе с тем, у
больных ХОБЛ, имеющих генотип S/F, отмечены достоверно
более высокие средние показатели диастолического артериального давления 95,2 7,9 мм рт.ст., чем у носителей других
генотипов (90,6 8,7 мм рт.ст., р=0,031). Различий в распределении генотипов по полиморфизму гена второй фазы детоксикации NAT2 у больных ХОБЛ в зависимости от наличия
или отсутствия ишемической болезни сердца не было.
Таким образом, полиморфизм гена второй фазы детоксикации NAT2 может выступать в качестве одного из генетических маркеров риска развития артериальной гипертензии у больных ХОБЛ.
ВЫВОДЫ
1. Не обнаружена связь полиморфных вариантов гена
второй фазы детоксикации NAT2 с риском развития хронической обструктивной болезнью легких русской национальности, проживающих на территории Астраханской области.
2. Полиморфные варианты гена 2-й фазы системы детоксикации NAT2 у больных хронической обструктивной бо-
20
лезнью легких определяют риск формирования тяжелой степени тяжести и бронхитической формы хронической обструктивной болезни легких. Различия между мужчинами и
женщинами, возрастом пациентов, наличия табакокурения в
группе больных хронической обструктивной болезнью легких и практически здоровых лиц по частоте генотипов и аллелей гена второй фазы детоксикации NAT 2 не обнаружены.
Показатели спирографии у больных хронической обструктивной болезнью легких с различным генотипом полиморфного локуса гена второй фазы детоксикации NAT2 свидетельствует о достоверно более низких значениях ОФВ1, индекса Тиффно и мгновенных объемных скоростях выдоха
(МОС).
3. Полиморфные варианты гена 2-й фазы системы детоксикации NAT2 ассоциированы с уровнем малонового диальдегида, карбонильных групп, ТБК-активных продуктов,
супероксиддисмутазы и С-реактивного протеина в крови у
больных хронической обструктивной болезнью легких.
4. Обнаружен вклад частоты полиморфных аллелей
гена второй фазы системы детоксикации NAT 2 в частоту рецидидов и характер обострения хронической обструктивной
болезни легких.
5. Характер и степень выраженности нарушений микроциркуляции зависят от стадии ХОБЛ и ассоциированной
сердечно-сосудистой патологии. У больных ХОБЛ, имеющих
tt генотип гена второй фазы системы детоксикации NAT2,
определяется достоверно более низкий показатель микроциркуляции.
У больных ХОБЛ, имеющих генотип S/F, отмечены
достоверно более высокие средние показатели диастолического артериального давления 95,2 7,9 мм рт.ст., чем у носителей других генотипов (90,6 8,7 мм рт.ст., р=0,031).
21
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. В обследование больных ХОБЛ целесообразно
включать динамическое исследование уровня малонового
диальдегида в крови, состояния периферической гемодинамики по данным лазерной допплеровской флоуметрии для
объективизации тяжести состояния пациентов.
2. Типирование полиморфных вариантов гена второй
фазы системы детоксикации NAT2 позволяет выявить среди
пациентов с ХОБЛ группы больных с предрасположенностью
к более тяжелому течению заболевания.
Список работ по теме диссертации, опубликованных
в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ
1. Окислительный стресс при хронической обструктивной
болезни лѐгких / Н.Е. Новикова, И.А. Кудряшева, А.Х. Ахминеева // Астраханский медицинский журнал. - 2012. - Т.7, №3. С. 87-90.
2. Роль полиморфизма гена второй фазы детоксикации NAT2
в формировании хронической обструктивной болезни лѐгких и
особенностях еѐ течения / Н.Е. Новикова, И.А. Кудряшева //
Кубанский научный медицинский вестник. - 2012. - №4. - С.178180.
3. Клинико-диагностическое значение исследования перекисного окисления липидов, белков и антиоксидантной защиты
при хронической обструктивной болезни лѐгких с различным
генотипом гена NAT2 / Н.Е. Новикова, И.А. Кудряшева // Кубанский научный медицинский вестник. - 2013. - №1. - С.133135.
4. Микрососудистая реактивность при хронической обструктивной болезни легких в сочетании с сердечно-сосудистой патологией / Н.Е. Новикова, И.А. Кудряшева, А.Х. Ахминеева //
Современные проблемы науки и образования. – 2013. – №3;
URL: http://www.science-education.ru/109-9260.
22
Список остальных работ по теме диссертации
5. Содержание малонового альдегида при хронической обструктивной болезни лѐгких / Н.Е. Новикова, И.А. Кудряшева
// Сборник материалов VII Национального конгресса терапевтов, Москва. - 2012. - С.144-145.
6. Анализ ассоциации полиморфизма гена NAT2 с развитием
хронической обструктивной болезни лѐгких / Н.Е. Новикова,
И.А. Кудряшева // Сборник материалов VII Национального конгресса терапевтов, Москва. - 2012. - С.145-146.
7. Роль генетических факторов на течение хронической обструктивной болезни лѐгких / Н.Е. Новикова, И.А. Кудряшева,
Т.А. Уклистая // Учебное пособие. Астрахань: Изд. АГМА,
2013.- 47 с..
8. Генетический анализ полиморфизма гена второй фазы детоксикации NAT 2 у больных ХОБЛ с наличием ишемической
болезни сердца и артериальной гипертонии / Н.Е. Новикова,
И.А. Кудряшева // Научно-практический рецензируемый медицинский журнал «Кардиоваскулярная терапия и профилактика»
г. Москва 2013. - Специальный выпуск. - С.130.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ
ЖЕЛ
МДА
МОС
(25,50,75)
ОФВ1
СОД
СРП
ТБК
ХОБЛ
NAT2
SaO2
артериальная гипертензия
жизненная емкость легких
малоновый диальдегид
мгновенная объемная скорость на уровне
25%, 50%, 75% ЖЕЛ
объем форсированного выдоха за 1 секунду
супероксиддисмутаза
С-реактивный протеин
тиобарбитуровая кислота
хроническая обструктивная болезнь лѐгких
ген второй фазы детоксикации
сатурация артериальной крови кислородом
23
НОВИКОВА НАТАЛИЯ ЕВГЕНЬЕВНА
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА ВТОРОЙ
ФАЗЫ ДЕТОКСИКАЦИИ NAT2 И ПЕРЕКИСНОГО
МЕТАБОЛИЗМА ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ
ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ
14.01.04 – внутренние болезни
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Подписано в печать _______2015г.
Тираж 100 экз. Заказ № ______
Издательство ГБОУ ВПО «Астраханский государственный
медицинский университет» Минздрава России
414000 г. Астрахань, ул. Бакинская, 121
24
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа