close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Изучение ассоциаций молекулярно-генетических маркеров ренин – ангиотензиновой системы с формированием преэклампсии

код для вставкиСкачать
ФИО соискателя: Добродомова Ирина Сергеевна Шифр научной специальности: 03.02.07 - генетика Шифр диссертационного совета: Д 212.015.13 Название организации: Белгородский государственный университет Адрес организации: 308015, г.Белгород, ул. Победы,
На правах рукописи
Добродомова Ирина Сергеевна
ИЗУЧЕНИЕ АССОЦИАЦИЙ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ РЕНИН - АНГИОТЕНЗИНОВОЙ СИСТЕМЫ С ФОРМИРОВАНИЕМ ПРЕЭКЛАМПСИИ
03.02.07 - генетика
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Белгород - 2012
Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" Минобрнауки РФ
Научный руководитель: Чурносов Михаил Иванович
доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты: Полоников Алексей Валерьевич доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО "Курский государственный медицинский университет" Минздравсоцразвития РФ, профессор кафедры биологии, медицинской генетики и экологии
Зинченко Рена Абульфазовна доктор медицинских наук, профессор, ФГБУ "Медико-генетический
научный центр" РАМН, заведующая лабораторией генетической эпидемиологии
Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет" Минздравсоцразвития РФ
Защита диссертации состоится "___" ___________ 2012 года в "____" часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.015.13 при ФГАОУ ВПО "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85. С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГАОУ ВПО "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" Автореферат разослан "____"____________2012 г.
Ученый секретарь
совета по защите докторских и кандидатских диссертаций, доктор биологических наук Кочкаров В.И. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Преэклампсия - это осложнение беременности, возникающее во второй ее половине и характеризующееся появлением отеков, протеинурии, артериальной гипертензии, а также глубокими расстройствами функции сосудистой системы, гемостаза, иммунитета, гемодинамики и микроциркуляции, развитием фетоплацентарной недостаточности, нарушений функции почек, печени, легких [Сидорова И.С.,2003 ; Hayashi M. et al, 2007]. Частота преэклампсии по данным литературы составляет 8-16% среди всех беременных [Савельева Г.М., 2004]. В стационарах высокого риска она равна 30% и более [Чернуха Е.А. 2005]. Среди причин материнской смертности 20-25% случаев приходится на долю преэклампсии [Айламазян Э.К.,2003, Чернуха Е.А.,2005, Шифман Е.М.,2002; Lain K.Y.,2008]. Перинатальная смертность при тяжелых формах преэклампсии достигает 9,3-19,8 % [Савельева Г.М.,2004]. По данным ВОЗ преэклампсия является основной причиной наступления преждевременных родов, развития фетоплацентарной недостаточности, преждевременной отслойки нормально расположенной плаценты, задержки внутриутробного развития плода, рождения детей с низкой массой тела [Серов В.Н.,2004; Benyo D.F. et al.,2008; Dekker G.A. et al.,2008].
В патогенезе преэклампсии важная роль отводится сосудистым реакциям, в основе которых лежит генерализованный спазм сосудов, обуславливающий ишемические и гипоксические изменения в тканях с нарушением их функций [Harpel P.C. et.al., 2006; Hubel C.A.,2007]. Одной из систем, участвующих в реализации сосудистых реакций в организме является ренин-ангиотензиновая система [Заморский М.А. и др.,2002]. При длительной активации ренин-ангиотензиновой системы наблюдается спазм и повышение общего периферического сопротивления сосудов, гипоперфузия органов и тканей, задержка жидкости, увеличение объема циркулирующей крови, повышение чувствительности миокарда к токсическому влиянию катехоламинов, ремоделирование миокарда и сосудов, уменьшение отношения просвета сосуда к толщине его стенки, развитие миокардиального и периваскулярного фиброза [Атаджанов Т.В.,2008]. К настоящему времени выявлены ассоциации различных генетических полиморфизмов с преэклампсией [Faisel F. et al.,2004; Roberts M.,2001; Arngrimsson R. et al.,2005; Chappell S. et al., 2006; Esplin et al.,2001;Liston W.A.et al.,2002; N. Yamada et al.,2000; Bobst S.M. et al., 2005; Wilson M.L. et al.,2003; Pegoraro et al.,2003.; Ruiz-Quezada et al.,2004]. Среди генетических маркеров большое внимание уделяется изучению влияния генов ренин-ангиотензиновой системы на развитие преэклампсии [Мозговая Е.В. и др., 2004; Демин Г. С., 2008; Shah D.M., 2005; Collura L et al.,2006;Сelentano A et al.,2000; Kobashi G et al.,2005; Turgay İ.,2007;Hyunah C. et al., 2007;Zafarmand et al.,2008]. Однако следует отметить, что большинство данных работ проведено за рубежом [Pridjian G.et al.,2005; Lachmeijer A. et al. 2004; Hyunah C. et al., 2007; Zafarmand et al.,2008; Hillermann R., et al.,2005; Fox C.S. et al.,2005] и при этом результаты молекулярно-генетических исследований преэклампсии, полученные разными авторами, часто различаются и не дают однозначного ответа на вопрос о патогенетической роли отдельных полиморфизмов генов ренин-ангиотензиновой системы при данном осложнении беременности.В России лишь несколько работ, выполненные в популяциях Западно-Сибирского и Северо-Западного регионов РФ [Мозговая Е.В. и др., 2004; Демин Г. С., 2008; Спиридонова М.Г. и др., 2007], посвящены изучению клинического значения генетических полиморфизмов ренин-ангиотензиновой системы при преэклампсии, что диктует необходимость проведения данных исследований в Российской Федерации.
Работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы "Научные и научно педагогические кадры инновационной России" на 2009-2013 годы (гос.контракт №02.740.11.0496 "Генетические факторы мультифакториальных заболеваний человека").
Цель и задачи исследования: изучить клиническое значение полиморфных генетических маркеров ренин-ангиотензиновой системы при преэклампсии.
В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:
1.Исследовать роль полиморфных вариантов генов ангиотензин- конвертирующего фермента (I/D ACE), ангиотензиногена (-6A/G AGT), рецептора ангиотензина II 1-го типа (-1166A/C ATIIR1), ренина (-4063C/T REN) в формировании преэклампсии.
2.Выявить ассоциации генов-кандидатов со степенью тяжести преэклампсии.
3.Проанализировать влияние генетических полиморфизмов ренин-ангиотензиновой системы на клинические и клинико-лабораторные показатели беременных.
4.Установить связи молекулярно-генетических маркеров с состоянием фетоплацентарного комплекса.
5.Оценить состояние новорожденных в зависимости от генетических факторов матерей.
Научная новизна. Впервые установлено важное клиническое значение генетических полиморфизмов ренина (-4063C/T REN), ангиотензин-конвертирующего фермента (I/D ACE), рецептора ангиотензина II 1-го типа (-1166A/C ATIIR1) при преэклампсии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ.
Определены молекулярно-генетические факторы риска развития преэклампсии и степени ее тяжести. Показаны ассоциации полиморфных маркеров I/D ACE и -4063C/T REN с клиническими и клинико-лабораторными показателями беременных. Выявлена связь генетического варианта D АСЕ с развитием нарушений фетоплацентарного комплекса.
Научно-практическое значение. Результаты проведенных исследований расширяют представления о молекулярно-генетических детерминантах преэклампсии. Генетические полиморфизмы I/D ACE и -4063C/T REN могут быть рекомендованы для выделения группы риска по развитию преэклампсии. Полиморфный маркер D ACE может применяться в практическом акушерстве для формирования среди беременных группы риска по возникновению нарушений фетоплацентарного комплекса.
Положения, выносимые на защиту:
1. Молекулярно-генетический маркер -4063C/T REN определяет риск развития преэклампсии.
2.Степень тяжести преэклампсии связана с генетическими полиморфизмами I/D ACE и -4063C/T REN.
3.Гены-кандидаты влияют на клинические и клинико-лабораторные показатели беременных.
4.Состояние фетоплацентарного комплекса ассоциировано с генетическим вариантом D ACE.
Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на: III Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2008), II международной конференции молодых ученых "Современные вопросы акушерства и гинекологии" (Москва, 2008), II международной конференции молодых ученых - медиков (Курск, 2008), I Международной дистанционной научной конференции "Инновации в медицине" (Курск, 2008), Всероссийской научной конференции "Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов" (Курск, 2008), Всероссийской научной конференции "Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы"(Белгород, 2008), XV-м Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2008), 43-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых "Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации" (Тюмень, 2009), 63-ей Итоговой научной конференции молодых ученых Ростовского государственного медицинского университета с международным участием, посвященная 70-летию СНО (МНО) (Ростов - на - Дону, 2009), 74-й Итоговой научной конференции студентов и молодых ученых "Молодежная наука и современность" (Курск, 2009), IX Окружной конференции молодых ученых "Наука и инновации XXI века" (Сургут, 2009), V Съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009), Съезде кардиологов и терапевтов ЦФО России "Традиции, современность, будущее. Инновационные подходы в диагностике, лечении и профилактике сердечно - сосудистых заболеваний" (Тверь, 2009), VI Съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону,2010), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии" (Курск, 2011). Личное участие автора. Автором лично определены цель и задачи исследования, разработаны методические подходы для их решения, сформированы клинические группы исследования, проведен анализ индивидуальных карт беременных и историй родов. Автор лично принимал участие в выполнении молекулярно-генетических исследований, проводил обработку и обобщение полученных результатов, подготовку основных публикаций по выполненной работе, написание и оформление рукописи. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, в том числе 4 в журналах из перечня ВАК Минобрнауки РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, а также выводы, практические рекомендации и список литературы. Материалы диссертации изложены на 149 страницах машинописного текста и содержат 33 таблицы и 31 рисунок. Библиографический указатель содержит 249 наименований, из которых 140 иностранных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Клиническая характеристика исследованных женщин
В соответствии с поставленными целями и задачами исследования проведен анализ результатов обследования 350 женщин: 250 беременных с преэклампсией и 100 женщин с нормальным течением беременности (контрольная группа). В исследуемые выборки включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженками Центрально-Черноземного региона России и не имеющие родства между собой. Средний возраст беременных с преэклампсией составил 27,11±6,42 лет (варьировал от 18 до 44 лет), контрольной группы - 26,50±6,36 года (варьировал от 18 до 42 лет) (р>0,05). Клинико-лабораторное обследование беременных проводилось на сроке родоразрешения на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа (руководитель - профессор В.Ф. Куликовский). Среди 350 беременных 100 пациенток было с физиологическим течением гестации и 250 женщин с беременностью, осложнённой преэклампсией: 95 беременных с преэклампсией легкой степени тяжести, 100 - с преэклампсией средней степени тяжести и 55 - с тяжелым течением преэклампсии. Степень тяжести преэклампсии оценивали по шкале Goecke в модификации Г.М. Савельевой (Савельева Г.М., 2000). Проводилась оценка уровня артериального давления до беременности и во время беременности, прибавки веса у беременных, наличие отеков и белка в моче. У каждой беременной женщины тщательно собирался анамнез. Всем беременным проводилось необходимое клинико-лабораторное обследование, включающее в себя: общий анализ крови, коагулограмму (фибриноген, протромбиновый индекс (ПТИ), активированное частичное тромбиновое время (АЧТВ), тромбиновое время (ТВ), этаноловая проба); биохимический анализ крови; общий анализ мочи; ультразвуковое исследование плода, где принималось во внимание наличие многоводия, маловодия, синдрома задержки развития плода (СЗРП); кардиотокографическое исследование (КТГ). Оценивалось состояние маточно - плацентарного и плодово - плацентарного кровотока (допплерография); проводилось гистологическое исследование плаценты. Учитывался вес и рост новорожденного, определялось состояние новорожденного по шкале Апгар. Молекулярно-генетические методы
Всем женщинам проведено типирование четырех молекулярно-генетических маркеров ренин-ангиотензиновой системы: диаллельные локусы генов ренина (-4063 С/Т REN), ангиотензин-конвертирующего фермента (I/D ACE), ангиотензиногена (-6 A/G AGT), рецептора ангиотензина II 1-го типа (-1166 A/C ATIIR1). Выбор данных систем для исследования обусловлен их возможной вовлеченностью в патогенез преэклампсии за счет способности изучаемых полиморфизмов изменять экспрессию соответствующих генов [Баранов В.С., 2000; Пестрикова Т.Ю.,2001].
Материалом для исследования послужила венозная кровь в объеме 8-9 мл, взятая из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови производили в пробирки с консервантом, содержащим 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0). Выделение геномной ДНК из периферической крови проведено методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew С.G., 1985).
Анализ всех локусов осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. ПЦР проводилась на амплификаторах "Терцик-МС4" ("ДНК-технология") и IQ5 (Bio-Rad) с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы "Силекс-М" и олигонуклеотидных праймеров, синтезированных фирмой "Синтол".
Генотипирование ДНК-маркеров производилось методами анализа полиморфизма длин амплифицируемых фрагментов (I/D ACE) и полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (-4063 С/Т REN, -6 A/G AGT, -1166 A/C ATIIR1) продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции производства ООО "Сибэнзим" (Новосибирск). Визуализация фореграмм осуществлялась в темном боксе с трансиллюминатором фирмы UVP (Швеция).
Статистические методы
Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы "STATISTICA 6.0". Определение фенотипических и генных частот проводили стандартными методами (Животовский, 1983). Для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому, исходя из равновесия Харди-Вайнберга, использован критерий c2 (Вейр, 1995). Ассоциации аллелей и генотипов изученных ДНК-маркеров с качественными признаками преэклампсии ( степени тяжести преэклампсии, наличие отеков, состояние кровотока в системе мать-плацента-плод, морфологические характеристики плаценты, наличие гипоксии у плода, синдрома задержки развития плода, маловодия, многоводия) оценивали с помощью анализа таблиц сопряженности 2×2 с расчетом критерия χ2 с поправкой Йетса на непрерывность и отношения шансов (ОR) с 95% доверительным интервалом (Schlesselman J., 1982). При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони (Реброва О.Ю., 2006).
При изучении взаимосвязей генетических полиморфизмов с патогенетически значимыми количественными признаками преэклампсии (уровень артериального давления, протеинурии и протеинемии, содержание фибриногена, показатель активированного частичного тромбинового времени и др.), вначале оценивали характер распределения этих признаков с использованием критерия Шапиро-Уилка (Реброва О.Ю., 2006). Получено, что распределение всех исследуемых количественных признаков не соответствовало закону нормального распределения и поэтому для их описания применяли медиану (Mе), и интерквартильный размах (Q25-Q75), а для сравнительного анализа - критерий Манна-Уитни с использованием поправки Бонферрони (Реброва О.Ю., 2006). Результаты исследования и их обсуждение
1. Исследование роли генетических полиморфизмов в формировании преэклампсии
Изучение частот генотипов исследуемых генетических маркеров показало, что для всех рассматриваемых локусов в популяционной выборке и в группе беременных с преэклампсией эмпирическое распределение генотипов соответствует теоретически ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (р>0,05). Уровень аллельного разнообразия по изученным локусам варьировал от Н0=0,31 (для локуса -1166 А/С ATIIR1) до Н0=0,51 (для локуса I/D АСЕ) в группе здоровых беременных и от Н0=0,39 (для локуса -1166 А/С ATIIR1) до Н0=0,53 (I/D АСЕ) среди беременных с преэклампсией. Установлены молекулярно-генетические маркеры ренин-ангиотензиновой системы, являющиеся факторами риска развития преэклампсии у беременных (табл. 1) - данными маркерами являются аллель -4063Т REN (OR=1,77; p=0,007) и генотип -4063 СТ REN (OR=1,95; р=0,009, с учетом поправки Бонферрони; рcor=0,027 ). Протективным фактором развития преэклампсии служит молекулярно-генетический маркер -4063СС REN (OR=0,47; р=0,003; рcor=0,01). Исследование особенностей генетической "конституции" беременных с преэклампсией различной степени тяжести выявило следующее. Во-первых, среди женщин с преэклампсией 1-ой степени тяжести, наблюдается наибольшая частота генотипа -4063CT REN (55,91%), что более чем в 1,5 раза превышает аналогичный показатель контрольной группы (35,71%; χ2=7,06; OR=2,28; 95%CI 1,23-4,27; p=0,009; p cor=0,027). Кроме того, индивидуумы этой группы отличаются и высокой концентрацией аллеля -4063 T REN (33,33%) в сравнении с контрольной группой (19,90%; χ2=8,18; OR=2,03; 95%CI 1,23-3,29; p=0,005). Во-вторых, отличительными особенностями генетических характеристик беременных с преэклампсией 2-ой степени тяжести, является наименьшая концентрация генотипа II ACE (11,00%) и наибольшая частота аллеля -4063 T REN (28,79%) в сравнении с женщинами контрольной группы (25,00%; χ2= 5,73; OR=0,37; 95%CI 1,18-6,29; p=0,017, pcor=0,051 и 19,90%; χ2= 3,76; OR=1,63; 95%CI 1,01-2,67; p=0,05, соответственно). В-третьих, при преэклампсии 3-ей степени тяжести, у беременных регистрируется минимальная частота генотипа II (7,27%) и максимальное распространение аллеля D ACE (62,73%) по сравнению с беременными без преэклампсии (25,00%; χ2=6,21; OR=0,24; 95%CI 1,29-15,39; p=0,01; p cor=0,03 и 49,50%; χ2=4,48; OR=1,72; 95%CI 1,04-2,84; p=0,03), соответственно.
Таблица 1
Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров I/D АСЕ, -4063C/T REN, -6 A/G AGT и -1166 А/С ATIIR1 в исследуемых группах женщин
Гены
Аллели, генотипыБеременные с преэклампсиейБеременные без преэклампсии
OR(95%CI)
χ2,pn=250n=100n%n%I/D ACED28456,809949,500,75(0,53-1,05)
χ2=2,79 p=0,10I21643,2010150,50DD7630,402424,000,72(0,41-1,27)
χ2=1,14 p=0,29ID13252,805151,000,93(0,57-1,52)
χ2=0,04 p=0,85II4216,802525,001,65(0,91-2,30)
χ2=2,60 p=0,11-6 А/G AGT-6 A27455,4710251,000,84(0,59-1,1)
χ2=0,97 p=0,33-6 G22044,539849,00-6 AA8835,632727,000,67(0,39-1,15)
χ2=2,02 p=0,16-6 AG9839,674848,001,40(0,86-2,30)
χ2=1,70 p=0,19-6 GG6124,702525,000,98(0,56-1,75)
χ2=0,01 p=1,00-4063 С/Т REN-4063 C34069,3916080,001,77(1,17-2,68)
χ2=7,49 p=0,007-4063 T15030,614020,00-4063 CC10643,276262,000,47(0,28-0,77)
χ2=9,24 p=0,003-4063 CT12852,243636,001,95(1,17-3,23)
χ2=6,88 p=0,009-4063 TT114,4922,002,30(0,47-5,29)
χ2=0,62 p=0,43-1166А/С ATIIR1-1166 А36372,6015175,501,16(0,78-1,73)
χ2=0,48p=0,49-1166 С13727,404924,50-1166 АА13252,806060,000,75(0,45-1,23)
χ2=1,22 p=0,27-1166 АС9939,603131,001,46(0,87-2,47)
χ2=1,91 p=0,17-1166 СС197,699,000,83(0,34-2,07)
χ2=0,05 p=0,83 Обращает на себя внимание, факт увеличения концентрации аллеля D ACE (рис.1) и снижение частоты генотипа II ACE у беременных с преэклампсией с возрастанием степени тяжести данного патологического состояния. Распространение аллеля D ACE изменялось с 51,05% у беременных с преэклампсией 1-ой степени тяжести до 62,73% у индивидуумов с преэклампсией 3-ей степени тяжести (χ2=4,48; p=0,03), а распределение генотипа II ACE уменьшалось с 28,42% у беременных с преэклампсией 1-ой степени тяжести до 7,27% среди женщин с преэклампсией 3-ей степени тяжести (χ2=6,21;p=0,01).
Рис. 1. Распределение аллеля D ACE среди беременных без преэклампсии и с преэклампсией различной степени тяжести
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о важном патогенетическом значении генетических маркеров I/D ACE, -4063C/T REN в формировании и степени выраженности преэклампсии. Эти данные согласуются с функциональным значением вышеуказанных полиморфизмов. Согласно данным литературы аллели D ACE и -4063T REN являются высокопродуктивными [Shah D. M.,2005; Turgay İ.,2007; Hyunah C. et al., 2007] и могут обуславливать ухудшение течения преэклампсии [Mozgovaia et al.,2002]. 2. Изучение влияния молекулярно-генетических маркеров на клинические и клинико-лабораторные показатели у беременных Повышение артериального давления является одним из ведущих симптомов преэклампсии [Адашева Т.В.,2004]. Проведен анализ показателей АД в зависимости от генетических полиморфизмов ренин-ангиотензиновой системы. Уровень артериального давления рассматривался как до беременности так и во время беременности.
Выявлены ассоциации молекулярно-генетических маркеров I/D АСЕ и -4063C/T REN с уровнем артериального давления среди беременных с преэклампсией. У беременных, имеющих в генотипе высокопродуктивный аллель D (генотипы DD и ID), уровень систолического артериального давления (медиана - 140 мм.рт.ст., нижний квартиль -130 мм.рт. ст., верхний квартиль - 150 мм.рт.ст.), диастолического артериального давления (медиана - 90 мм.рт.ст., нижний квартиль -80 мм.рт.ст., верхний квартиль - 100 мм.рт.ст.) среднего артериального давления (медиана - 106,7 мм.рт.ст., нижний квартиль -100,0 мм.рт.ст., верхний квартиль - 113,3 мм.рт.ст.) статистически достоверно выше аналогичных показателей индивидуумов с низкопродуктивным генотипом II по этому локусу: медиана систолического артериального давления равна 140 мм.рт.ст., интерквартильный размах -130-140 мм.рт.ст., р=0,02; диастолического артериального давления - 80 мм.рт.ст., интерквартильный размах -75-90 мм.рт.ст., р=0,01; среднего артериального давления - 103,3мм.рт.ст., интерквартильный размах -100,0-106,7 мм.рт.ст., р=0,006).
Также в группе беременных с преэклампсией с генотипами -4063ТТ и -4063 СТ REN уровень систолического артериального давления (медиана - 140 мм.рт.ст., нижний процентиль (Q10) -130,0 мм.рт.ст., верхний процентиль (Q90) - 160,0 мм.рт.ст.) и среднего артериального давления (медиана - 106,7 мм.рт.ст., нижний квартиль -103,3 мм.рт.ст., верхний квартиль - 113,3 мм.рт.ст.) статистически значимо выше соответствующих показателей индивидуумов с генотипом -4063 СС REN (медиана - 140,0 мм.рт.ст., интерпроцентильный размах (Q10-Q90) -130,0-155,0 мм.рт.ст.; р=0,03 и медиана - 103,3 мм.рт.ст., интерквартильный размах -100,0-113,3 мм.рт.ст.; р=0,04,соответственно) (рис.2). Рис.2. Ассоциации полиморфизма -4063C/T REN с уровнем среднего артериального давления у беременных с преэклампсией
Следует отметить отсутствие статистически достоверных взаимосвязей генов-кандидатов с уровнем артериального давления у беременных без преэклампсии. Среди 350 обследуемых у 101 беременной отеков не было (28,86%), у 91 женщины отеки отмечались только на голенях или наблюдалась патологическая прибавка массы тела (26%), у 128- на голенях и передней брюшной стенке (36,57%) и у 30 индивидуумов зарегистрированы генерализованные отеки (8,57%). Установлено, что у беременных с отеками на голенях и передней брюшной стенке, а также с генерализованными отеками отмечается наибольшая частота аллеля D АСЕ (60,94% и 65,00%, соответственно) по сравнению с группой контроля (49,50%; χ2=5,53; OR=1,52; 95%CI 1,08-2,35; p=0,02 и χ2=3,86; OR=1,89; 95%CI 1,01-3,60; p=0,05, соответственно). Следует отметить, что у беременных с генерализованными отеками зарегистрирована максимальная концентрация аллеля D (65,00%). В результате проведенного исследования, выявлено, что генетический маркер I/D АСЕ ассоциирован с уровнем протеинемии, протеинурии, содержанием фибриногена и показателем АЧТВ у беременных. Индивидуумы, с генотипом DD отличаются более низким содержанием белка в плазме крови (медиана - 63,5 г/л, нижний квартиль - 58,0 г/л; верхний квартиль - 68,0 г/л) по сравнению с беременными с генотипом II АСЕ (медиана - 67,9 г/л; интерквартильный размах 62,0 - 71,0 г/л; р=0,003, pcor=0,009). Также установлено, что у беременных с генотипом DD АСЕ наблюдаются и более выраженные проявления синдрома гиперкоагуляции (повышение уровня фибриногена и снижение АЧТВ). Так, уровень фибриногена, среди женщин с этим генотипическим вариантом, составляет - 4,8 г/л (нижний квартиль - 3,95 г/л, верхний квартиль - 5,70 г/л), что статистически достоверно больше аналогичного показателя индивидуумов с генотипом II (медиана - 4,0 г/л, интерквартильный размах - 3,6-4,2 г/л; p=0,00002; pcor=0,00006) (рис.3), а показатель АЧТВ у женщин с генотипом DD ( медиана - 33,0 с, нижний квартиль - 28,0 с, верхний квартиль - 36,0 с) меньше по сравнению с беременными, имеющими генотип II (медиана -35,0 с, интерквартильный размах 32,0 -38,0 с; p=0,001; pcor=0,003). В основе выявленных ассоциаций I/D полиморфизма АСЕ с отдельными клинико-лабораторными характеристиками могут лежать следующие медико-биологические механизмы. Под действием ангиотензин-конвертирующего фермента (и, соответственно, локуса его детерминирующего), осуществляется конверсия ангиотензина I в ангиотензин II, который является сильнейшим вазоконстриктором [Елисеева Ю.Е.,2001]. Согласно литературным данным [Лимборская С.А. и др., 2002; Глотов О.С. и др.,2007] у здоровых лиц с DD генотипом по локусу I/D АСЕ определяется максимальный уровень ангиотензин-конвертирующего фермента крови, у людей с II генотипом уровень ангиотензин - конвертирующего фермента вдвое ниже, а у гетерозигот уровень данного фермента в крови промежуточный.
Рис. 3. Ассоциации I/D полиморфизма АСЕ с уровнем фибриногена у беременных
Вазоконстрикция является одним из ведущих механизмов развития преэклампсии [Гомазаков О.А.,2003; Pirskanen M.M. et al.,2001]. При этом более выраженная вазоконстрикция (характерна для индивидуумов с генетическим маркером D АСЕ) будет обуславливать и более выраженные фенотипические эффекты неблагоприятного течения беременности и в том числе при преэклампсии (наиболее выраженная гипопротеинемия, гиперпротеинурия, проявления синдрома гиперкоагуляции).
3. Анализ связей генетических вариантов с состоянием фетоплацентарного комплекса
При анализе ассоциаций генетических полиморфизмов ренин-ангиотензиновой системы с морфологическими характеристиками плаценты у родильниц установлено, что у женщин, имеющих плаценту в стадии декомпенсации, аллель D ACE имеет достоверно более высокую концентрацию -66,39% по сравнению с индивидуумами, имеющими плаценту в стадии компенсации (51,72%; χ2= 5,74; OR=1,84; 95%CI 1,11-3,07; p=0,017).
Выявлено, что молекулярно-генетическим маркером, обуславливающим нарушения маточно-плацентарного и фето-плацентарного кровотока, является D ACE: у женщин с нарушением кровотока в системе мать-плацента-плод отмечается наибольшая частота аллеля D ACE (61,38%), по сравнению с группой контроля (50,0%; χ2=8,42; OR=1,59; 95%CI 1,16-2,18; p=0,005). В исследуемой группе беременных (n=350), нормальный тип КТГ встречался у 115 женщин (32,86%) , а патологические типы КТГ наблюдались у 235 индивидуумов (67,14%). Получено, что частота генотипа ID ACE (57,45%) является наибольшей, а концентрация генотипа II АСЕ (14,04%) в 2 раза ниже у беременных с патологическими типами КТГ, по сравнению индивидуумами, имеющими нормальный тип КТГ (41,74%, χ2=7,02; OR=1,88; 95%CI 1,17-3,04 p=0,009; pcor=0,027 и 29,56%, χ2=11,04; OR=0,39; 95%CI 0,22-0,69; p=0,002; pcor=0,006, соответственно). Также у женщин с патологическими типами КТГконцентрация аллеля -1166 C ATIIR1 (28,94%), достоверно выше по сравнению с контрольной группой (21,74%; χ2=3,74; OR=1,47; 95%CI 1,01-2,16; p=0,05) (рис. 4). Рис.4.Распределение аллеля -1166 C ATIIR1 среди беременных с различными типами КТГ
Согласно литературным данным, клиническими признаками фетоплацентарной недостаточности являются многоводие, маловодие, СЗРП [Савельева Г.М.,1999; Игнатко И.В.,2006]. В обследуемой нами группе (n=350) у 21 (6%) беременной наблюдался синдром задержки развития плода, у 49 (14%) -маловодие, у 71 (20,29%) -многоводие, у 14 (4%) женщин регистрировались сочетание СЗРП и маловодия и у 25 (7,14%) - сочетание СЗРП и многоводия. У 26 (7,43%) беременных отсутствовали клинические признаки патологии фетоплацентарного комплекса, и эти индивидуумы были включены в группу контроля. У остальных исследуемых (n=144; 41,14%) присутствовали признаки угрозы прерывания беременности и внутриутробного инфицирования плода, поэтому при обработке данных они нами не учитывались. Установлено, что у беременных с наличием синдрома задержки развития плода наблюдается наибольшая концентрации аллеля D АСЕ (71,43%), тогда как в группе контроля этот показатель составил- 38,46% (χ2=8,86; OR=4,0; 95%CI 1,54-10,56; p=0,04) (рис.5). В группе беременных с маловодием, частота аллеля D гена АСЕ составила 60,20% , что статистически значимо превышает соответствующий показатель у беременных без клинических проявлений нарушений фето- плацентарного комплекса (38,46%; χ2=5,60; OR=2,42; 95%CI 1,15-5,12; p=0,02). Выявлено, что у индивидуумов с сочетанием СЗРП и маловодия частота аллеля D АСЕ составила 64,29% (χ2=3,89; OR=2,88; 95%CI 1,01-8,39; p=0,05), а в группе беременных с сочетанием СЗРП и многоводия концентрация аллеля D АСЕ равна 70,0% (χ2=8,98; OR=3,73; 95%CI 1,52-9,3 ; p=0,003).
4. Генетические полиморфизмы и состояние новорожденного
При анализе ассоциаций инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ с состоянием новорожденного, установлено, что у родильниц, имеющих генотип DD вес новорожденного (медиана-3280 гр.; нижний квартиль-2835 гр.; верхний квартиль-3689 гр.) статистически достоверно меньше по сравнению с женщинами, имеющими генотип II (медиана -3470 гр.; интерквартильный размах- 3240-3720 гр.; p= 0,009; pcor=0,027) . Аналогичная тенденция наблюдается и у родильниц, имевших в данную беременность преэклампсию: у женщин, с генотипом DD вес новорожденных (медиана-3280 гр.; нижний квартиль-2825 гр.; верхний квартиль-3645 гр.) меньше, чем у индивидуумов с генотипом II (медиана -3475 гр.; интерквартильный размах- 3270-3660 гр.; p=0,01; pcor=0,03). Следует отметить, что эти данные согласуются с ранее полученными нами результатами об ассоциации генетического маркера I/D АСЕ с нарушением кровотока в системе мать-плацента-плод, гипоксией плода, СЗРП в данную беременность. Факторами риска развития этих патологических состояний также являются генотип DD и аллель D.
ВЫВОДЫ
1.Генетические полиморфизмы ренин-ангиотензиновой системы (I/D ACE, -4063C/T REN, -1166A/C ATIIR1) ассоциированы с возникновением преэклампсии, ее степенью тяжести, клиническими проявлениями, развитием нарушений фетоплацентарного комплекса и состоянием новорожденного.
2.Генетическими маркерами повышенного риска развития преэклампсии являются -4063 T REN (OR=1,77; р=0,007), -4063 CT REN (OR=1,95; р=0,03), а протективным фактором возникновения преэклампсии служит -4063 CС REN (OR=0,47; р=0,01).
3.Развитие преэклампсии 1-ой степени тяжести ассоциировано с -4063 CT REN (OR=2,28) и -4063 T REN (OR=2,03); формирование преэклампсии 2-ой степени тяжести связано с генетическими вариантами -4063 T REN (OR=1,63) и II ACE (OR=0,37), и преэклампсию 3-ей степени тяжести маркируют D ACE (OR=1,72) и II ACE (OR=0,24).
4.Показатели артериального давления у беременных с преэклампсией, имеющих генотипы DD и ID по I/D полиморфизму АСЕ, -4063 TТ и -4063 СТ по полиморфизму -4063C/T REN, являются наибольшими. Беременные с генотипом DD АСЕ отличаются низким содержанием белка в плазме крови, повышенным уровнем фибриногена и снижением активированного частичного тромбинового времени, а аллель D АСЕ связан с развитием отеков.
5.Генетический вариант D АСЕ ассоциирован с формированием декомпенсированного состояния плаценты (OR=1,84), развитием нарушений маточно-плацентарно-плодового кровотока (OR=1,59), возникновением маловодия, синдрома задержки развития плода и многоводия (OR=2,42-4,00), рождением детей с низкой массой тела. Развитие гипоксии плода связано с маркерами ID ACE (OR=1,88), II АСЕ (OR=0,39) и -1166 C ATIIR1(OR=1,47).
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1.При прегравидарной подготовке женщин с целью формирования группы риска по развитию преэклампсии и прогнозирования ее степени тяжести рекомендуется проводить молекулярно-генетическое тестирование локусов -4063C/T REN и I/D ACE.
2.При обследовании беременных рекомендуется использовать в качестве маркеров развития повышенного артериального давления генотипы DD и ID по I/D полиморфизму АСЕ, -4063 ТТ и -4063 СТ по полиморфизму -4063 С/T REN, а маркером возникновения гипопротеинемии и синдрома гиперкоагуляции может являться генотип DD ACE.
3.При оценке состояния фетоплацентарного комплекса следует учитывать повышенный риск формирования декомпенсированного состояния плаценты, развития нарушений маточно-плацентарно-плодового кровотока, возникновения маловодия, синдрома задержки развития плода и многоводия у женщин с генетическим вариантом D ACE. Генетические полиморфизмы I/D ACE и -1166A/C ATIIR1 рекомендуется использовать в качестве маркеров развития гипоксии у плода.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
АД ср - среднее артериальное давление АЧТВ - активированное частичное тромбиновое время
КТГ- кардиотокография
СЗРП- синдром задержки развития плода
СПИСОК РАБОТ,
ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1.Самойлова (Добродомова) И.С. Особенности течения беременности и родов у пациенток с легкими формами гестоза / И. С. Самойлова, М.И Чурносов // Материалы II международной научной конференции молодых ученых-медиков.- Курск, 2008.- Том I.- С.181-182.
2.Решетников Е.А. Гены вазоактивных гормонов и течение беременности / Е.А.Решетников, Л.Ю.Акулова, И.С.Самойлова (Добродомова) // Материалы I Международной дистационной научной конференции "Инновации в медицине".- Курск, 2008.- С. 212-213.
3.Самойлова (Добродомова) И.С. Состояние гемостаза у пациенток с легкими формами гестоза/ И. С.Самойлова, М.И. Чурносов // Материалы конференции "Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов".- Курск, 2008.- Часть I.- С. 290-291.
4.Самойлова (Добродомова) И.С. Оценка течения родов и состояние новорожденных у пациенток с легкими формами гестоза / И.С. Самойлова // Вестник РГМУ.-2008.-№2 (61).- С.169-170. 5.Самойлова (Добродомова) И.С. Состояние плаценты у женщин с легкими формами гестоза / И.С. Самойлова, М.И. Чурносов // XV Российский национальный конгресс "Человек и лекарство".- Москва, 2008.- С. 470-471.
6.Самойлова (Добродомова) И.С.Анализ состояния фетоплацентарного комплекса у женщин с отеками беременных и нефропатией легкой степени / И.С. Самойлова, М.И. Чурносов // Вестник РГМУ.-2008.-№3 (62).- С.123. 7.Самойлова (Добродомова) И.С. Изучение роли генов "сосудистых реакций" в формировании гипертонии при гестозе / И.С. Самойлова, А.В.Елыкова, Т.И. Якунченко // Материалы III международной конференции молодых ученых "Современные вопросы акушерства и гинекологии". - Москва, 2009; спец. выпуск, - С. 113.
8.Изучение роли кандидатных генов в формировании осложнений беременности / Е. А.Решетников, А.В. Елыкова, И.С. Самойлова (Добродомова), Л.Ю. Акулова, Т.И. Якунченко. // Материалы V Съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров.- Москва, 2009.-Часть I. С. 487.
9.Полиморфизм генов-кандидатов и эхокардиографические показатели у беременных в норме и при гестозе / Е. А Решетников, А.В. Елыкова, И.С. Добродомова, Л.Ю. Акулова, Т.И. Якунченко, М.И. Чурносов // Вестник РУДН. Серия " Медицина".- 2009.-№4.- С.223-224. 10.Решетников Е.А. Ассоциации молекулярно-генетических маркеров с уровнем артериального давления у беременных / Е.А. Решетников, Л.Ю Акулова, И.С. Самойлова (Добродомова), Т.И. Якунченко. // Материалы съезда кардиологов и терапевтов ЦФО России "Традиции, современность, будущее. Инновационные подходы в диагностике, лечении и профилактике сердечно-сосудистых заболеваний".- Тверь, 2009.- С.88-90.
11.Решетников Е.А. Полиморфизм генов ADD1, ANP, ACE у беременных Белгородской области / Е.А. Решетников, Л.Ю.Акулова, И.С. Самойлова(Добродомова), М.И. Чурносов // Материалы IX окружной конференции молодых ученых "Наука и инновация XXI века".- Сургут, 2009.- Том I.- С. 85-87.
12.Добродомова И.С. Инсерционно-делеционный полиморфизм гена ангиотензин-конвертирующего фермента и клинические проявления фетоплацентарной недостаточности / И.С. Добродомова // Материалы 63-ей Итоговой научной конференции молодых ученых Ростовского государственного медицинского университета с международным участием, посвященная 70-летию СНО (МНО). - Ростов-на-Дону, 2009.- С.18.13.Добродомова И.С. К вопросу о роли генетических маркеров в регуляции плазменного гемостаза / И.С. Добродомова // Материалы 43-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых "Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации".- Тюмень, 2009.-Часть I.- С.69-70.
14.Добродомова И.С. Влияние полиморфизма гена ACE на уровень артериального давления и протеинурию при гестозе / И.С. Добродомова // Материалы 74-й итоговой научной межвузовской конференции студентов и молодых ученых " Молодежная наука и современность.-Курск, 2009.-С.58-59.
15.Полиморфизм генов вазоактивных гормонов и изменения морфофункциональных характеристик сердечно-сосудистой системы у женщин при возникновении беременности / М.И.Чурносов, Л.Ю. Акулова, Е.А. Решетников, И.С.Добродомова, А.В.Елыкова //Материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков.-Ростов-на-Дону, 2010.- С.193.
16.Добродомова И.С. Нарушение транспортной функции плаценты и генетический полиморфизм ренин-ангиотензиновой системы / И.С. Добродомова, М.И. Чурносов, Ю.В. Колесников // Материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков. -Ростов-на-Дону, 2010.- С.56.
17.Изучение роли индекса массы тела в характере ассоциаций генетических полиморфизмов вазоактивных гормонов с показателями артериального давления у женщин в конце беременности / Е.А. Решетников, Л.Ю. Акулова, И.С. Добродомова, С.П. Пахомов, И.Н. Сорокина, И.С. Полякова, И.В. Батлуцкая. // Научные ведомости БелГУ. Серия "Медицина. Фармация". - 2011. - №4 (99), выпуск 13. - С. 153-159.
18.Чурносов М.И. Влияние полиморфизмов генов вазоактивных гормонов на формирование уровня артериального давления и эхокардиографические показатели у женщин при беременности / М.И. Чурносов, Е.А. Решетников, И.С. Добродомова, Л.Ю. Акулова // Материалы II-ой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии".- Курск, 2011.- С.115-116.
4
Документ
Категория
Медицинские науки
Просмотров
133
Размер файла
342 Кб
Теги
кандидатская
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа