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[5][_]
Molecule
(300/ 837)
[6][_]
BLEOMYCIN
(60)
[7][_]
copper
(55)
[8][_]
water
(45)
[9][_]
nitrogen
(34)
[10][_]
methanol
(34)
[11][_]
carbon
(25)
[12][_]
BPA
(25)
[13][_]
hydrochloric acid
(20)
[14][_]
chloroform
(17)
[15][_]
acetic acid
(13)
[16][_]
hydrogen
(12)
[17][_]
IPA
(11)
[18][_]
sodium chloride
(10)
[19][_]
bleomycin B2
(10)
[20][_]
n-propylamine
(10)
[21][_]
XAD-2
(8)
[22][_]
phosphate
(8)
[23][_]
trihydrochloride
(8)
[24][_]
sulphur
(7)
[25][_]
BAPP
(7)
[26][_]
sodium hydroxide
(7)
[27][_]
EDTA
(7)
[28][_]
sodium sulfate
(7)
[29][_]
sodium
(7)
[30][_]
KBr
(7)
[31][_]
oxygen
(6)
[32][_]
dicyclohexylcarbodiimide
(6)
[33][_]
OH
(6)
[34][_]
Na+
(6)
[35][_]
sodium acetate
(6)
[36][_]
bleomycinic acid
(6)
[37][_]
copper chelate
(5)
[38][_]
(CH2)3
(5)
[39][_]
-NH-X
(5)
[40][_]
acetonitrile
(5)
[41][_]
acetone
(5)
[42][_]
dimethylformamide
(4)
[43][_]
TCA
(4)
[44][_]
alanine
(4)
[45][_]
formic acid
(4)
[46][_]
(3-tert-butoxycarbonylaminopropyl)-(3-aminopropyl)methylamine
(4)
[47][_]
ADP
(3)
[48][_]
triethylamine
(3)
[49][_]
N-methanol
(3)
[50][_]
p-chlorophenylethylamine
(3)
[51][_]
3-piperidinopropylamine
(3)
[52][_]
N-methylaminopropylamine
(3)
[53][_]
benzaldehyde
(3)
[54][_]
chloride
(3)
[55][_]
HOBT
(3)
[56][_]
-NH-(CH2)3
(2)
[57][_]
diphenyl phosphorazidate
(2)
[58][_]
1-hydroxybenzotriazole
(2)
[59][_]
N-methylmorpholine
(2)
[60][_]
ammonium acetate
(2)
[61][_]
sulfate
(2)
[62][_]
acetate
(2)
[63][_]
trichloroacetic acid
(2)
[64][_]
copper acetate
(2)
[65][_]
2-aminoethylamine
(2)
[66][_]
3-aminopropylamine
(2)
[67][_]
2-(piperidino)ethylamine
(2)
[68][_]
3-(morpholino)propylamine
(2)
[69][_]
butylaminopropylamine
(2)
[70][_]
benzylaminopropylamine
(2)
[71][_]
1-phenylethylaminopropylamine
(2)
[72][_]
naphthylamine
(2)
[73][_]
ammonium methanol
(2)
[74][_]
bleomycin A2
(2)
[75][_]
IPA 3
(2)
[76][_]
sodium cyanoborohydride
(2)
[77][_]
heavy water
(2)
[78][_]
dioxan
(2)
[79][_]
NaBH3CN
(2)
[80][_]
trifluoroacetic acid
(2)
[81][_]
DES
(1)
[82][_]
CF
(1)
[83][_]
20-methylcholanthrene
(1)
[84][_]
N-methyl-N-[3-(cycloundecanylmethylamino)propyl]amine
(1)
[85][_]
norbornene
(1)
[86][_]
Abrevia
(1)
[87][_]
5-methoxyindol
(1)
[88][_]
H2N-X
(1)
[89][_]
oxybenzotriazole
(1)
[90][_]
3z-N-ethyl-5-phenylisooxazoliumsulfonate
(1)
[91][_]
perchlorate
(1)
[92][_]
N-tert-butyl-5-methyl-isooxazolium
(1)
[93][_]
N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline
(1)
[94][_]
di-p-nitro sulfite
(1)
[95][_]
tri-p-nitrophenyl phosphite
(1)
[96][_]
p-nitrophenyl trichloroacetate
(1)
[97][_]
1-ethyl-3-(3-di-methylaminopropyl)carbodiimide
(1)
[98][_]
1-cyclohexyl-3-(2-morpholinoethyl)carbodiimide
(1)
[99][_]
dip-tolylcarbodiimide
(1)
[100][_]
diisopropylcarbodiimide
(1)
[101][_]
DEPC
(1)
[102][_]
p-nitrophenol
(1)
[103][_]
o,p-dinitrophenol
(1)
[104][_]
pentachlorophenol
(1)
[105][_]
2,4,5-trichlorophenol
(1)
[106][_]
pentafluorophenol
(1)
[107][_]
N-hydroxysuccinimide
(1)
[108][_]
N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide
(1)
[109][_]
dimethylacetamide
(1)
[110][_]
disodium
(1)
[111][_]
bleomycin hydrochloride
(1)
[112][_]
sulfuric acid
(1)
[113][_]
tartrate
(1)
[114][_]
citrate
(1)
[115][_]
maleate
(1)
[116][_]
lactate
(1)
[117][_]
R-H
(1)
[118][_]
X-NH2
(1)
[119][_]
L-threonine
(1)
[120][_]
2'-(2-aminoethyl)-2,4'-bithiazole-4-carboxylic acid
(1)
[121][_]
methylamine
(1)
[122][_]
ethylamine
(1)
[123][_]
isopropylamine
(1)
[124][_]
n-butylamine
(1)
[125][_]
isobutylamine
(1)
[126][_]
tert-butylamine
(1)
[127][_]
n-pentylamine
(1)
[128][_]
3-methylbutylamine
(1)
[129][_]
n-heptylamine
(1)
[130][_]
3-methylpentylamine
(1)
[131][_]
n-hexylamine
(1)
[132][_]
1,5-dimethylhexylamine
(1)
[133][_]
isohexylamine
(1)
[134][_]
n-octylamine
(1)
[135][_]
n-decylamine
(1)
[136][_]
laurylamine
(1)
[137][_]
myristylamine
(1)
[138][_]
cetylamine
(1)
[139][_]
stearylamine
(1)
[140][_]
4-aminobutylamine
(1)
[141][_]
6-aminohexylamine
(1)
[142][_]
12-aminododecylamine
(1)
[143][_]
4-amino-4-methyl-1-dimethylpentylamine
(1)
[144][_]
2,2,2-trifluoroethylamine
(1)
[145][_]
2,2,2-trichloroethylamine
(1)
[146][_]
2,2-difluoroethylamine
(1)
[147][_]
2,2-dichloroethylamine
(1)
[148][_]
benzylamine
(1)
[149][_]
diphenylmethylamine
(1)
[150][_]
2-phenylethylamine
(1)
[151][_]
2,2-diphenylethylamine
(1)
[152][_]
1-phenylethylamine
(1)
[153][_]
1,2-diphenylethylamine
(1)
[154][_]
3-phenylpropylamine
(1)
[155][_]
2-phenylisopropylamine
(1)
[156][_]
1,3-diphenylpropylamine
(1)
[157][_]
3,3-diphenyl-propylamine
(1)
[158][_]
4-phenylbutylamine
(1)
[159][_]
4,4-diphenylbutylamine
(1)
[160][_]
chlorobenzylamine
(1)
[161][_]
dichlorobenzylamine
(1)
[162][_]
bromobenzylamine
(1)
[163][_]
methoxybenzylamine
(1)
[164][_]
ethoxybenzylamine
(1)
[165][_]
methylenedioxybenzylamine
(1)
[166][_]
propoxybenzylamine
(1)
[167][_]
p-methoxyphenylethylamine
(1)
[168][_]
p-benzyloxybenzylamine
(1)
[169][_]
furylmethylamine
(1)
[170][_]
2-furylethylamine
(1)
[171][_]
2-thiazolylmethylamine
(1)
[172][_]
2-pyrazolylmethylamine
(1)
[173][_]
2-imidazolylmethylamine
(1)
[174][_]
4-imidazolylmethylamine
(1)
[175][_]
2-thienylmethylamine
(1)
[176][_]
2-pyridylmethylamine
(1)
[177][_]
3-pyridylmethylamine
(1)
[178][_]
4-pyridylmethylamine
(1)
[179][_]
indolylmethylamine
(1)
[180][_]
indolylethylamine
(1)
[181][_]
4-methoxyindolylmethylamine
(1)
[182][_]
2-pyrimidylmethylamine
(1)
[183][_]
2-pyrimidylethylamine
(1)
[184][_]
4-pyrimidylmethylamine
(1)
[185][_]
4-pyrimidylethylamine
(1)
[186][_]
2-piperidylmethylamine
(1)
[187][_]
3-piperidylmethylamine
(1)
[188][_]
piperidylmethyl-amine
(1)
[189][_]
2-(2-piperidyl)ethylamine
(1)
[190][_]
2-(3-piperidyl)ethylamine
(1)
[191][_]
1-(3-piperidyl)ethylamine
(1)
[192][_]
1-(4-piperidyl)ethylamine
(1)
[193][_]
2-piperazylmethylamine
(1)
[194][_]
2-(2-piperazylethyl)amine
(1)
[195][_]
2-(morpholino)ethylamine
(1)
[196][_]
2-morpholinylmethylamine
(1)
[197][_]
3-morpholinylmethylamine
(1)
[198][_]
2-(morpholinyl)ethylamine
(1)
[199][_]
3-(morpholinyl)propylamine
(1)
[200][_]
dimethylaminoethylamine
(1)
[201][_]
diethylaminoethylamine
(1)
[202][_]
dipropylaminoethylamine
(1)
[203][_]
propylaminoethylamine
(1)
[204][_]
dimethylaminopropylamine
(1)
[205][_]
diethylaminopropylamine
(1)
[206][_]
dipropylaminopropylamine
(1)
[207][_]
propylaminopropylamine
(1)
[208][_]
dibutylaminopropylamine
(1)
[209][_]
2-phenylethylaminopropylamine
(1)
[210][_]
3-phenylpropylaminopropylamine
(1)
[211][_]
4-phenylbutylaminopropylamine
(1)
[212][_]
methylaminoethylaminopropylamine
(1)
[213][_]
ethylaminopropylaminopropylamine
(1)
[214][_]
propylaminopropylaminopropylamine
(1)
[215][_]
N-(butylaminopropyl)-N-methylaminopropylamine
(1)
[216][_]
dibutylaminopropylaminopropylamine
(1)
[217][_]
pentylaminopropylaminopropylamine
(1)
[218][_]
ethylaminobutylaminopropylamine
(1)
[219][_]
propylaminobutylaminopropylamine
(1)
[220][_]
butylaminopropylaminobutylamine
(1)
[221][_]
benzylaminoethylaminoethylamine
(1)
[222][_]
benzylaminoethylaminopropylamine
(1)
[223][_]
benzylaminopropylaminopropylamine
(1)
[224][_]
benzylaminobutylaminopropylamine
(1)
[225][_]
phenylethylaminopropylamino-propylamine
(1)
[226][_]
N-(phenylethylaminopropyl)-N-methylaminopropylamine
(1)
[227][_]
N-(chlorobenzylaminopropyl)-N-methylaminopropylamine
(1)
[228][_]
dibenzylaminopropyl-N,N-diethylaminopropylamine
(1)
[229][_]
dibenzylaminopropyl-N-methyl-N-benzylaminopropylamine
(1)
[230][_]
2-thiazolylamine
(1)
[231][_]
3-thiazolylamine
(1)
[232][_]
4-thiazolylamine
(1)
[233][_]
N-benzyl-4-piperidylamine
(1)
[234][_]
N-phenylethyl-4-piperidylamine
(1)
[235][_]
N-benzyl-3-piperidylamine
(1)
[236][_]
N-benzyl-2-piperidylamine
(1)
[237][_]
2-dimethylaminoethylamine
(1)
[238][_]
2-diethylaminoethylamine
(1)
[239][_]
3-dimethylaminopropylamine
(1)
[240][_]
3-diethylaminopropylamine
(1)
[241][_]
3-(3-butylaminopropylamino)-propylamine
(1)
[242][_]
3-(2-hydroxypropylamino)propylamine
(1)
[243][_]
2-aminopropylamine
(1)
[244][_]
3-(6-aminohexylamino)propylamine
(1)
[245][_]
3-trimethylaminopropylamine
(1)
[246][_]
3-(3-aminopropylamino)propylamine
(1)
[247][_]
3-pyrrolidinylpropylamine
(1)
[248][_]
3-piperazinylpropylamine
(1)
[249][_]
(3-pyrrolidinylpropylamino)propylamine
(1)
[250][_]
3-(3-piperidinylpropylamino)-propylamine
(1)
[251][_]
3-(3-morpholinylpropylamino)propylamine
(1)
[252][_]
3-(3-hydroxypropylamino)propylamine
(1)
[253][_]
3-(3-methoxypropylamino)-propylamine
(1)
[254][_]
p-aminomethylbenzylamine
(1)
[255][_]
2-cyclopentylaminoethylamine
(1)
[256][_]
3-cyclohexylaminopropylamine
(1)
[257][_]
4-cyclohexylaminobutylamine
(1)
[258][_]
cycloheptylaminopropylamine
(1)
[259][_]
3-cyclooctylaminopropylamine
(1)
[260][_]
3-[N-methyl-3-N-(cyclooctylmethylaminopropyl)amino]propylamine
(1)
[261][_]
3-cyclodecanylmethylaminopropylamine
(1)
[262][_]
3-[N-methyl-N-[3-(2-p-chlorophenylethylamino)-propyl]amino]propylamine
(1)
[263][_]
aminopropyl-7-amino-7-propylamine
(1)
[264][_]
amino-7-propylamine
(1)
[265][_]
3-(dibenzylamino)7-amino-7-propylamine
(1)
[266][_]
3A,N-dimethyl-N-(N,N-dimethyl-N-(3-cyclooctyl-methylaminopropyl)amino)
-propyl-7-amino-7-propylamine
(1)
[267][_]
4-(3-cyclooctylmethylaminopropyl)piperidyl-7-propylamine
(1)
[268][_]
NH2-(CH2)3
(1)
[269][_]
Y-(CH2)3
(1)
[270][_]
acetyl chloride
(1)
[271][_]
acetic anhydride
(1)
[272][_]
2-mercaptopyrimidine
(1)
[273][_]
N-carbethoxyphthalimide
(1)
[274][_]
MTBA
(1)
[275][_]
mannitol
(1)
[276][_]
methanol ammonium acetate
(1)
[277][_]
DMF
(1)
[278][_]
3-N-(3'-cyclooctylmethylamino)propyl-N-methylaminopropylamine
(1)
[279][_]
3-aminopropyldimethylamine
(1)
[280][_]
3-(N,N-dimethylamino)propyl-7-dibenzylamine
(1)
[281][_]
(3-bromopropyl)phthalimide
(1)
[282][_]
phthalic acid
(1)
[283][_]
3-[N-(3-aminopropyl)-N,N-dimethylamino]propyldibenzylamine
trihydrochloride
(1)
[284][_]
t-3-N-(3-aminopropyl)-N-trihydrochloride
(1)
[285][_]
dibenzylamine
(1)
[286][_]
3-aminopropyldiethylamine
(1)
[287][_]
bis(3-aminopropyl)-methylamine
(1)
[288][_]
4,6-dimethyl-2-tert-butoxycarbonyl-thiopyrimidine
(1)
[289][_]
N-{3-[N-(3-aminopropyl)-N-methylamino]propyl}cyclooctylamine
(1)
[290][_]
3-p-cyanobenzylamine
(1)
[291][_]
p-cyanobenzaldehyde
(1)
[292][_]
p-chlorophenylacetaldehyde
(1)
[293][_]
3,4-dibenzyloxy-benzaldehyde
(1)
[294][_]
bis(3,4-dibenzyloxybenzylamino)propane
(1)
[295][_]
dichloromethane
(1)
[296][_]
potassium acetate
(1)
[297][_]
phosphorus pentoxide
(1)
[298][_]
1,64-o,81-dibenzylamine
(1)
[299][_]
1,77-o,30-octylmethylamine
(1)
[300][_]
ammonia
(1)
[301][_]
ninhydrin
(1)
[302][_]
ammonium
(1)
[303][_]
ammonia acetate
(1)
[304][_]
-NH
(1)
[305][_]
H2
(1)
[306][_]
Substituent
(352/ 817)
[307][_]
AMINO
(72)
[308][_]
AMIDO
(57)
[309][_]
PHENyl
(51)
[310][_]
propylamino
(26)
[311][_]
propyl
(24)
[312][_]
aminopropyl
(22)
[313][_]
phenylethyl
(22)
[314][_]
benzyl
(18)
[315][_]
phenylethylamino
(15)
[316][_]
N-methyl
(13)
[317][_]
hydroxyl
(11)
[318][_]
carboxyl
(11)
[319][_]
naphthyl
(10)
[320][_]
p-dibenzyloxy-benzyl
(10)
[321][_]
INDOLyl
(9)
[322][_]
THIAZOLyl
(8)
[323][_]
benzyloxy
(8)
[324][_]
PIPERAZINyl
(7)
[325][_]
amino-propylamino
(7)
[326][_]
N-PHENYL
(6)
[327][_]
ethyl
(6)
[328][_]
methyl
(5)
[329][_]
isopropyl
(4)
[330][_]
cyano
(4)
[331][_]
propylamino-(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]
(4)
[332][_]
3-[N-methyl-N-benzyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]
(4)
[333][_]
methylamino
(3)
[334][_]
N,N-dimethyl
(3)
[335][_]
N,N-diethyl
(3)
[336][_]
1-phenylethylaminopropylamino
(3)
[337][_]
1-phenylethylaminopropyl
(3)
[338][_]
propylamino-(amido)N-[octyl]
(3)
[339][_]
3-[N,N-dimethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]
(3)
[340][_]
n-propyl
(2)
[341][_]
n-butyl
(2)
[342][_]
isobutyl
(2)
[343][_]
n-pentyl
(2)
[344][_]
3-methylbutyl
(2)
[345][_]
3-methylpentyl
(2)
[346][_]
n-hexyl
(2)
[347][_]
1,5-dimethylhexyl
(2)
[348][_]
2-phenylethyl
(2)
[349][_]
2,2-diphenylethyl
(2)
[350][_]
1-phenylethyl
(2)
[351][_]
3-phenylpropyl
(2)
[352][_]
furylmethyl
(2)
[353][_]
3-indolylmethyl
(2)
[354][_]
piperidino
(2)
[355][_]
morpholino
(2)
[356][_]
butyl
(2)
[357][_]
bromobenzylaminopropyl
(2)
[358][_]
N-(chlorophenylethylaminopropyl)
(2)
[359][_]
piperidyl
(2)
[360][_]
phenoxy
(2)
[361][_]
butylaminopropylamino
(2)
[362][_]
n-butylaminopropylaminopropylamino
(2)
[363][_]
di-n-butylaminopropyl
(2)
[364][_]
n-butylaminopropylaminopropyl
(2)
[365][_]
N-methyl-N-benzyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropyl
(2)
[366][_]
N-methyl-N-(cyclooctylmethylamino-propyl)aminopropylamino
(2)
[367][_]
N-methyl-N-(cyanobenzylaminopropyl)aminopropylamino
(2)
[368][_]
4-Guanidinobutylamino
(2)
[369][_]
3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)amino]propylamino
(2)
[370][_]
3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)aminopropyl]amino
(2)
[371][_]
3-[N-methyl-N-[3-(2-(p-chlorophenyl)ethyl)aminopropyl]amino]
(2)
[372][_]
propylamino-(amido)N-[n-octyl]
(2)
[373][_]
(amido)N-[octyl]
(2)
[374][_]
3-[N-methyl-N-[3-(p-cyanobenzylamino)propyl]amino]propylamino
(2)
[375][_]
dibenzyloxybenzyl
(2)
[376][_]
cyanophenyl
(2)
[377][_]
dibenzyloxyphenyl
(2)
[378][_]
3-(3-n-butylaminopropylamino)
(2)
[379][_]
3-((S)-1'-phenylethylamino)propyl
(2)
[380][_]
(3-aminopropyl)-N-methylamino-7-propyl
(2)
[381][_]
3-amino
(2)
[382][_]
N-(3-aminopropyl)
(2)
[383][_]
N-AMIDO
(1)
[384][_]
demethyl
(1)
[385][_]
2,3-diamino
(1)
[386][_]
tert-butyl
(1)
[387][_]
neopentyl
(1)
[388][_]
n-heptyl
(1)
[389][_]
isohexyl
(1)
[390][_]
n-octyl
(1)
[391][_]
n-decyl
(1)
[392][_]
lauryl
(1)
[393][_]
myristyl
(1)
[394][_]
cetyl
(1)
[395][_]
stearyl
(1)
[396][_]
2-aminoethyl
(1)
[397][_]
3-aminopropyl
(1)
[398][_]
4-aminobutyl
(1)
[399][_]
6-aminohexyl
(1)
[400][_]
12-aminododecyl
(1)
[401][_]
4-amino-4-methyl-1-dimethylpentyl
(1)
[402][_]
2,2,2-trifluoroethyl
(1)
[403][_]
2,2,2-trichloroethyl
(1)
[404][_]
2,2-difluoroethyl
(1)
[405][_]
2,2-dichloroethyl
(1)
[406][_]
diphenylmethyl
(1)
[407][_]
1,2-diphenylethyl
(1)
[408][_]
2-phenylisopropyl
(1)
[409][_]
1,3-diphenylpropyl
(1)
[410][_]
3,3-diphenylpropyl
(1)
[411][_]
4-phenylbutyl
(1)
[412][_]
4,4-diphenylbutyl
(1)
[413][_]
chlorobenzyl
(1)
[414][_]
dichlorobenzyl
(1)
[415][_]
bromobenzyl
(1)
[416][_]
methoxybenzyl
(1)
[417][_]
dimethoxybenzyl
(1)
[418][_]
ethoxybenzyl
(1)
[419][_]
methylenedioxybenzyl
(1)
[420][_]
propoxybenzyl
(1)
[421][_]
p-chlorophenylethyl
(1)
[422][_]
p-methoxyphenylethyl
(1)
[423][_]
p-benzyloxybenzyl
(1)
[424][_]
2-furylethyl
(1)
[425][_]
2-thiazolylmethyl
(1)
[426][_]
2-pyrazolylmethyl
(1)
[427][_]
2-imidazolylmethyl
(1)
[428][_]
4-imidazolylmethyl
(1)
[429][_]
2-thienylmethyl
(1)
[430][_]
2-pyridylmethyl
(1)
[431][_]
3-pyridylmethyl
(1)
[432][_]
4-pyridylmethyl
(1)
[433][_]
2-(3-indolyl)ethyl
(1)
[434][_]
2-pyrimidylmethyl
(1)
[435][_]
2-pyrimidylethyl
(1)
[436][_]
4-pyrimidylmethyl
(1)
[437][_]
4-pyrimidylethyl
(1)
[438][_]
2-piperidylmethyl
(1)
[439][_]
3-piperidylmethyl
(1)
[440][_]
4-piperidylmethyl
(1)
[441][_]
2-(2-piperidyl)-ethyl
(1)
[442][_]
2-(3-piperidyl)ethyl
(1)
[443][_]
2-(4-piperidyl)ethyl
(1)
[444][_]
1-(2-piperidyl)ethyl
(1)
[445][_]
3-piperidyl
(1)
[446][_]
1-(4-piperidyl)
(1)
[447][_]
2-(2-piperazylethyl)
(1)
[448][_]
morpholinyl
(1)
[449][_]
3-(morpholinyl)propyl
(1)
[450][_]
dipropylaminoethyl
(1)
[451][_]
dibutylaminopropylamino
(1)
[452][_]
N-(phenylethylaminopropyl)
(1)
[453][_]
N-(chlorobenzylaminopropyl)
(1)
[454][_]
dibenzylaminopropyl
(1)
[455][_]
dibenzylaminopropyl-N-methyl-N-benzylaminopropyl
(1)
[456][_]
2-thiazolyl
(1)
[457][_]
3-thiazolyl
(1)
[458][_]
4-thiazolyl
(1)
[459][_]
benzyl-4-piperidyl
(1)
[460][_]
N-phenylethyl-4-piperidyl
(1)
[461][_]
N-benzyl-3-pipEridyl
(1)
[462][_]
N-benzyl-2-piperidyl
(1)
[463][_]
phenylene
(1)
[464][_]
methoxy
(1)
[465][_]
ethoxy
(1)
[466][_]
propoxy
(1)
[467][_]
butoxy
(1)
[468][_]
2-aminoethylamino
(1)
[469][_]
2-dimethylaminoethylamino
(1)
[470][_]
2-diethylaminoethyl-triylaminopropylamino
(1)
[471][_]
3-diethylaminopropylamino
(1)
[472][_]
3-(3-butyl-aminopropylamino)-propylamino
(1)
[473][_]
3-(2-oxypropylamino)propyl
(1)
[474][_]
3-piperidinopropylamino
(1)
[475][_]
3-(1-phenylethylamino)propyl-amino
(1)
[476][_]
2-aminopropylamino
(1)
[477][_]
3-methylaminopropylamino
(1)
[478][_]
3-butylaminopropylamino
(1)
[479][_]
6-aminohexylamino
(1)
[480][_]
3-(3-dimethylaminopropylamino)propyl-amino
(1)
[481][_]
3-(3-aminopropylamino)-propylamino
(1)
[482][_]
3-pyrrolidinylpropylamino
(1)
[483][_]
3-piperidinylpropylamino
(1)
[484][_]
3-morpholinopropylamino
(1)
[485][_]
3-piperazinylpropylamino
(1)
[486][_]
3-aminopropylpiperazinyl
(1)
[487][_]
3-(3-pyrrolidinylpropylamino)propylamino
(1)
[488][_]
3-(3-piperidinylpropylamino)propylamino
(1)
[489][_]
3-(3-morpholinylpropylamino)-propylamino
(1)
[490][_]
3-(3-oxypropylamino)propylamino
(1)
[491][_]
3-(3-methoxypropylamino)propylamino
(1)
[492][_]
3-benzylaminopropylamino
(1)
[493][_]
m-aminomethylbenzylamino
(1)
[494][_]
p-aminomethylbenzylamino
(1)
[495][_]
2-cyclopentylaminoethylamino
(1)
[496][_]
3-cyclohexylaminopropylamino
(1)
[497][_]
4-cyclohexylaminobutylamino
(1)
[498][_]
cycloheptylaminopropylamino
(1)
[499][_]
3-cyclooctylaminopropylamino
(1)
[500][_]
3-[N-methyl-N-(3-cyclooctylmethyl-aminopropyl)amino]propylamino
(1)
[501][_]
3-cyclodecanylmethylaminopropylamino
(1)
[502][_]
3-{N-methyl-N-[3-(2-p-chlorophenylethylamino)propyl]amino}propylamino
(1)
[503][_]
N-[3-(p-cyanobenzylamino)propyl]amino
(1)
[504][_]
amino-2-propylamino
(1)
[505][_]
N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino
(1)
[506][_]
N,N-dimethyl-N-(3-dibenzylaminopropyl-N-(3-dibenzylaminopropyl))amino
(1)
[507][_]
N-dimethyl
(1)
[508][_]
3-(N,N-dimethyl-N-(3-cyclooctylmethylaminopropyl)amino)propyl-7-amino
(1)
[509][_]
4-[3-(cyclooctylmethylamino)propyl]piperidyl
(1)
[510][_]
3'-(n-butylaminopropyl)aminopropylamino
(1)
[511][_]
trifluoromethyl
(1)
[512][_]
cyclohexyl
(1)
[513][_]
triphenylmethyl
(1)
[514][_]
naphthylmethyl
(1)
[515][_]
dibenzylmethyl
(1)
[516][_]
chlorophenyl
(1)
[517][_]
o-chlorobenzyl
(1)
[518][_]
1-(p-chlorophenyl)-ethyl
(1)
[519][_]
o,p-dichlorobenzyl
(1)
[520][_]
p-dichlorobenzyl
(1)
[521][_]
p-bromobenzyl
(1)
[522][_]
pentafluorobenzyl
(1)
[523][_]
m-trifluoromethylbenzyl
(1)
[524][_]
p-methylbenzyl
(1)
[525][_]
p-diethylaminobenzyl
(1)
[526][_]
p-methoxybenzyl
(1)
[527][_]
o,p-dimethoxybenzyl
(1)
[528][_]
p-cyanobenzyl
(1)
[529][_]
p-phenylbenzyl
(1)
[530][_]
cyclopentylmethyl
(1)
[531][_]
cyclohexylmethyl
(1)
[532][_]
cycloheptylmethyl
(1)
[533][_]
cyclooctylmethyl
(1)
[534][_]
cycloundecanylmethyl
(1)
[535][_]
(S)-1-phenylethyl
(1)
[536][_]
diethylamino-1-methylbutyl-dibutylaminopropyl
(1)
[537][_]
1-phenylethylamino
(1)
[538][_]
N-methyl-N-benzyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropylamino
(1)
[539][_]
N-methyl-N-methyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropylamino
(1)
[540][_]
N-ethyl-N-ethyl-N-(dibenzylamino-propyl)aminopropylamino
(1)
[541][_]
2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[methyl]
(1)
[542][_]
2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[ethyl]
(1)
[543][_]
2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[isopropyl]
(1)
[544][_]
2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[benzyl]
(1)
[545][_]
2-(4'-Imidazolyl)ethylamino
(1)
[546][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2-aminoethyl]
(1)
[547][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[isopropyl]
(1)
[548][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[1',6'-dimethylheptyl]
(1)
[549][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2',2',2'-trifluoroethyl]
(1)
[550][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[octyl]
(1)
[551][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]
(1)
[552][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[lauryl]
(1)
[553][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[benzyl]
(1)
[554][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[diphenylmethyl]
(1)
[555][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[1',2'-diphenylethyl]
(1)
[556][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2-furylmethyl]
(1)
[557][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[3-pyridylmethyl]
(1)
[558][_]
4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2-thiazolylmethyl]
(1)
[559][_]
aminopropylamino-(amido)N-[isopropyl]
(1)
[560][_]
aminopropylamino-(amido)N-[benzyl]
(1)
[561][_]
aminopropylamino-(amido)N-[p-chlorobenzyl]
(1)
[562][_]
aminopropylamino-(amido)N-[stearyl]
(1)
[563][_]
aminopropylamino-(amido)N-[lauryl]
(1)
[564][_]
aminopropylamino-(amido)N-[octyl]
(1)
[565][_]
decanyl
(1)
[566][_]
1',2'-diphenyl
(1)
[567][_]
propylamino-(amido)N-[diphenylmethyl]
(1)
[568][_]
1,6-dimethyl
(1)
[569][_]
heptyl
(1)
[570][_]
butylamino
(1)
[571][_]
N-benzyl
(1)
[572][_]
piperazin-4-yl
(1)
[573][_]
4-diethylamino
(1)
[574][_]
1-methylbutyl
(1)
[575][_]
(amido)N-[isopropyl]
(1)
[576][_]
N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)amino
(1)
[577][_]
N-methyl-N-[3-(p-chlorobenzyl)aminopropylamino]propyl
(1)
[578][_]
amino-[amido]N-[1,2-diphenylethyl]
(1)
[579][_]
3-[N-methyl-N-[3-(p-chlorobenzyl)aminopropyl]amino]propyl
(1)
[580][_]
amino-(amido)-N-[1,5-dimethylhexyl]
(1)
[581][_]
N-methyl-N-[3-(2-(p-(chlorophenyl)ethyl)aminopropyl)amino]
(1)
[582][_]
2-(p-chlorophenyl)
(1)
[583][_]
N-methyl-N-[3-(2-(p-chlorobenzyl)aminopropyl)amino]
(1)
[584][_]
N-methyl-N-benzyl
(1)
[585][_]
dibenzyl
(1)
[586][_]
3-[N-methyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]50-propylamino
(1)
[587][_]
3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)]
(1)
[588][_]
propylamino-(amido)N-[benzyl]
(1)
[589][_]
3-[N,N-diethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]-propyl
(1)
[590][_]
3-[N-methyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]-propylamino
(1)
[591][_]
3-[N,N-diethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]propylamino
(1)
[592][_]
(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]
(1)
[593][_]
3-[N-methyl-N-[3-(cyclooctylmethylamino)propyl]amino]
(1)
[594][_]
3-[N-methyl-N-[3-(cyclooctylmethylamino)propyl]amino]propyl
(1)
[595][_]
amino-(amido)N-[octyl]
(1)
[596][_]
3-[N-methyl-N-[3-cyclooctylmethyl]aminopropyl]amino
(1)
[597][_]
3-[N-methyl-N-[3-(p-cyanobenzylamino)propyl]amino]
(1)
[598][_]
6-chloro
(1)
[599][_]
diethyl
(1)
[600][_]
3-(2,4-dinitrophenyl)
(1)
[601][_]
3-(salicylidene)
(1)
[602][_]
4-amino-6-carboxy-5-methyl-pyrimidin-2-yl
(1)
[603][_]
4-amino-3-hydroxy-2-methyl
(1)
[604][_]
p-hydroxyL
(1)
[605][_]
4-piperidyl
(1)
[606][_]
2-piperidyl
(1)
[607][_]
butylaminopropylaminopropylamino
(1)
[608][_]
dibenzylaminopropyl-N,N-dimethylaminopropylamino
(1)
[609][_]
dimethylaminopropylamino
(1)
[610][_]
N,N-dimethyl-N-(3-dibenzylaminopropyl)amino
(1)
[611][_]
N',N'-dibenzylaminopropyl
(1)
[612][_]
p-cyanophenyl
(1)
[613][_]
bis(3-aminopropyl)
(1)
[614][_]
S-tert-butoxycarbonyl-4,6-dimethyl
(1)
[615][_]
3-(3-n-butylaminopropylamino)propylamino
(1)
[616][_]
3-(4-n-butylaminopropylamino)propylamino
(1)
[617][_]
(amido)N-octyl
(1)
[618][_]
(amido)N-3-dibutylaminopropyl
(1)
[619][_]
3-dibutylamino-propyl
(1)
[620][_]
o,93-o,84-ethylamino
(1)
[621][_]
(Amido)N-3-dibutylamino
(1)
[622][_]
o,93-o,88-propyl
(1)
[623][_]
octyl
(1)
[624][_]
(amido)N-3-((S)-1'-phenylethylamino)propyl
(1)
[625][_]
3-N-3'-(cyclooctylamino)propyl-N-methylaminopropylamino-(amido)
(1)
[626][_]
N-3-((S)-1'-phenylethylamino)propyl
(1)
[627][_]
3-N-(3'-cyclooctylmethylamino)propyl-N-methylaminopropylamino
(1)
[628][_]
N-(3'-cyclooctylmethylamino)propyl-N-methylaminopropylamino
(1)
[629][_]
(amido)N3-(S)-1'-phenyl-amino
(1)
[630][_]
3-((S)-1'-phenylethylamino)propylamino
(1)
[631][_]
3-(3-n-butylaminopropylamino)propylamino-(amido)
(1)
[632][_]
(p-chlorophenyl)ethylamino
(1)
[633][_]
propyl-N-methylamino-propylamino-(amido)N-13-(2-(p-chlorophenyl)ethyla
mino)-propyl-N-methylaminopropyl
(1)
[634][_]
3-(3-n-butylaminopropyl)
(1)
[635][_]
N-mEthylaminopropyl
(1)
[636][_]
3-((S)-1'-phenylethylamino)-propylamino-(amido)N-[3-((S)-1'-phenylethy
l)aminopropyl]
(1)
[637][_]
3-((S)-1'-phenylethylamino)phenylamino
(1)
[638][_]
N-diethylamino
(1)
[639][_]
tert-butoxy
(1)
[640][_]
N-t-N-methyl
(1)
[641][_]
3-[N-aminopropyl]
(1)
[642][_]
N,N-dimethylamino
(1)
[643][_]
dibenzylamino
(1)
[644][_]
cyanobenzyl
(1)
[645][_]
diphenyl
(1)
[646][_]
methoxyindolyl
(1)
[647][_]
pyridyl
(1)
[648][_]
diethylamino-1-methyl-butyl
(1)
[649][_]
dibutylaminopropyl
(1)
[650][_]
N-(dibenzylaminopropyl)-aminopropylamino
(1)
[651][_]
N,N-dimethyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropylamino
(1)
[652][_]
N,N-diethyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropylamino
(1)
[653][_]
9-3-{N,N-dimethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]-amino}propylamino
(1)
[654][_]
10-3-N-methyl
(1)
[655][_]
propylamino-(amido)
(1)
[656][_]
11-3-{N,N-dimethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]-amino}propylamino
(1)
[657][_]
propylamino-(amido)N-octyl
(1)
[658][_]
7-amino
(1)
[659][_]
Physical
(159/ 269)
[660][_]
1 percent
(10)
[661][_]
200 ml
(10)
[662][_]
1 cm
(9)
[663][_]
100 ml
(9)
[664][_]
1 M
(8)
[665][_]
20 M
(7)
[666][_]
pH 4,5
(7)
[667][_]
1,0 M
(5)
[668][_]
5 percent de
(5)
[669][_]
6 N
(5)
[670][_]
800 V
(4)
[671][_]
de 1 litre
(4)
[672][_]
300 ml
(4)
[673][_]
500 ml
(4)
[674][_]
10 percent
(4)
[675][_]
6 percent
(3)
[676][_]
15 minutes
(3)
[677][_]
50 percent
(3)
[678][_]
400 ml
(3)
[679][_]
de 100 ml
(3)
[680][_]
80 percent
(3)
[681][_]
750 ml
(3)
[682][_]
50N
(2)
[683][_]
pH 6,0
(2)
[684][_]
de 5 percent
(2)
[685][_]
1 ml
(2)
[686][_]
de 50 percent
(2)
[687][_]
24 percent
(2)
[688][_]
10 ml
(2)
[689][_]
20 ml
(2)
[690][_]
de 10 g
(2)
[691][_]
350 ml
(2)
[692][_]
980 mg
(2)
[693][_]
de 92 percent
(2)
[694][_]
280 mg
(2)
[695][_]
50 ml
(2)
[696][_]
78,6 ml
(2)
[697][_]
5 N
(2)
[698][_]
LD50 was at least 13.9 mg per kg per day
(1)
[699][_]
10-day
(1)
[700][_]
pH 6
(1)
[701][_]
de 290 m
(1)
[702][_]
15 M
(1)
[703][_]
pH 7
(1)
[704][_]
60 minutes
(1)
[705][_]
800 pg
(1)
[706][_]
40 minutes
(1)
[707][_]
0,3 ml
(1)
[708][_]
de 1000 m/mg
(1)
[709][_]
10 percent de
(1)
[710][_]
45 percent
(1)
[711][_]
44 percent
(1)
[712][_]
34 percent
(1)
[713][_]
14 percent
(1)
[714][_]
de 5 mg/kg
(1)
[715][_]
1 s
(1)
[716][_]
10 mg
(1)
[717][_]
200 mg
(1)
[718][_]
200 g
(1)
[719][_]
pH 7,2
(1)
[720][_]
30 minutes
(1)
[721][_]
0,05 M
(1)
[722][_]
10 g
(1)
[723][_]
40 ml
(1)
[724][_]
55 percent
(1)
[725][_]
4M
(1)
[726][_]
3,2 g
(1)
[727][_]
2,4 equivalents
(1)
[728][_]
1,5 litre
(1)
[729][_]
0,3 M
(1)
[730][_]
8,5 g
(1)
[731][_]
83 percent
(1)
[732][_]
de 1 g
(1)
[733][_]
de 1,77 g
(1)
[734][_]
1,35 g
(1)
[735][_]
10 equivalents
(1)
[736][_]
840 mg
(1)
[737][_]
5 equivalents
(1)
[738][_]
0,72 ml
(1)
[739][_]
6 M
(1)
[740][_]
880 ms
(1)
[741][_]
de 76 percent
(1)
[742][_]
243 mM
(1)
[743][_]
880mg
(1)
[744][_]
2 percent de
(1)
[745][_]
250 ml
(1)
[746][_]
790 mg
(1)
[747][_]
de 93 percent
(1)
[748][_]
400 g
(1)
[749][_]
4 litres
(1)
[750][_]
1 litre
(1)
[751][_]
2 litres
(1)
[752][_]
5 litres
(1)
[753][_]
40 percent
(1)
[754][_]
de 600 ml
(1)
[755][_]
20 percent
(1)
[756][_]
0,2 M
(1)
[757][_]
7,1 g
(1)
[758][_]
1,0 g
(1)
[759][_]
1,71 g
(1)
[760][_]
1,31 g
(1)
[761][_]
340 ml
(1)
[762][_]
de 83 percent
(1)
[763][_]
22 ml
(1)
[764][_]
870 mg
(1)
[765][_]
1,5 g
(1)
[766][_]
de 60 g
(1)
[767][_]
de 750 ml
(1)
[768][_]
de 60 ml
(1)
[769][_]
80 ml
(1)
[770][_]
890 mg
(1)
[771][_]
5 ml
(1)
[772][_]
500 mg
(1)
[773][_]
2010 mg
(1)
[774][_]
770 mg
(1)
[775][_]
42 percent
(1)
[776][_]
8 ml
(1)
[777][_]
250 mg
(1)
[778][_]
de 10,22 g
(1)
[779][_]
12 ml
(1)
[780][_]
100 g
(1)
[781][_]
8,38 g
(1)
[782][_]
pH 12
(1)
[783][_]
26 g
(1)
[784][_]
92 percent
(1)
[785][_]
de 22,25 g
(1)
[786][_]
279 ml
(1)
[787][_]
43,7 g
(1)
[788][_]
180 ml
(1)
[789][_]
150 g
(1)
[790][_]
53 g
(1)
[791][_]
de 83 g
(1)
[792][_]
1/3 equivalent
(1)
[793][_]
60 g
(1)
[794][_]
130 ml
(1)
[795][_]
69 g
(1)
[796][_]
2 equivalents
(1)
[797][_]
30 ml
(1)
[798][_]
pH 13,5
(1)
[799][_]
66 g
(1)
[800][_]
71 percent
(1)
[801][_]
51 percent
(1)
[802][_]
de 14,90 g
(1)
[803][_]
77,30 g
(1)
[804][_]
4 equivalents
(1)
[805][_]
5,0 g
(1)
[806][_]
de 1200 ml
(1)
[807][_]
31,43 g
(1)
[808][_]
de 30 minutes
(1)
[809][_]
26,30 g
(1)
[810][_]
2000 ml
(1)
[811][_]
75 ml
(1)
[812][_]
4 percent
(1)
[813][_]
2 percent
(1)
[814][_]
pH 13
(1)
[815][_]
21,08 g
(1)
[816][_]
46,2 percent
(1)
[817][_]
60 MHz
(1)
[818][_]
6 minutes
(1)
[819][_]
Generic
(57/ 256)
[820][_]
ALKyl
(43)
[821][_]
salts
(36)
[822][_]
amine
(34)
[823][_]
halogen
(20)
[824][_]
acid
(13)
[825][_]
alkoxy
(10)
[826][_]
AMINOALKyl
(7)
[827][_]
HETEROcyclic
(7)
[828][_]
halogenophenyl
(6)
[829][_]
cycloalkyl
(6)
[830][_]
lower alkyl
(5)
[831][_]
aliphatic
(5)
[832][_]
alkylene
(5)
[833][_]
esters
(4)
[834][_]
aldehyde
(4)
[835][_]
Silica Gel
(4)
[836][_]
halo
(2)
[837][_]
amide
(2)
[838][_]
N-methyl-N-(halogenophenylethylaminopropyl)aminopropyl
(2)
[839][_]
peptides
(2)
[840][_]
3-aminopropyl-ester
(2)
[841][_]
anions
(2)
[842][_]
1-18C alkyl
(1)
[843][_]
1-12C aminoalkyl
(1)
[844][_]
5 or 6 membered heterocycle
(1)
[845][_]
lower alkoxy
(1)
[846][_]
N-(phenyl-lower alkyl)piperazino
(1)
[847][_]
mono- or di-(lower alkyl)amino
(1)
[848][_]
halophenyl
(1)
[849][_]
bleomycins
(1)
[850][_]
glycopeptide
(1)
[851][_]
N,N-dimethyl-N-/3-(N,N-dimethyl-N-(3-dibenzylaminopropyl)amino)propyl
(1)
[852][_]
3-/4-(3-dibenzylaminopropyl)piperidyl
(1)
[853][_]
benzyl-halogen
(1)
[854][_]
N-(halogeno-benzylaminopropyl)aminopropylamino
(1)
[855][_]
N-methyl-N-(halogenophenylethylaminopropyl)
(1)
[856][_]
3-acetylaminopropyl-ester
(1)
[857][_]
3-p-toluenesulfonylaminopropyl-ester
(1)
[858][_]
3-(3,5-dimethyl-3-oxocyclohexene-1-yl)aminopropyl-ester
(1)
[859][_]
3-(tert-butoxycarbonyl)aminopropyl-ester
(1)
[860][_]
inorganic acid
(1)
[861][_]
ether
(1)
[862][_]
3-/N-methyl-N-(3-aminopropyl)amino
(1)
[863][_]
methyl-N-/3-(cycloundecanylmethylamino)propyl-7-amino
(1)
[864][_]
N,N-dimethyl-N-/3-(dibenzylamino)propyl
(1)
[865][_]
3-aminopropyl-N,N-dialkylamine
(1)
[866][_]
3-halogeno-propyl-amine
(1)
[867][_]
monoacyl
(1)
[868][_]
acyl
(1)
[869][_]
sugars
(1)
[870][_]
N-/2-(p-chlorophenyl)ethyl
(1)
[871][_]
halide
(1)
[872][_]
1-/N-(3-tert-butoxycarbonylaminopropyl)-N-methylamino
(1)
[873][_]
trihalogeno
(1)
[874][_]
N-halogenophenyl
(1)
[875][_]
(halogenobenzyl-aminopropyl)aminopropylamino
(1)
[876][_]
N-methyl-N-(halogenophenylethylaminopropyl)aminopropylamino
(1)
[877][_]
Gene Or Protein
(15/ 105)
[878][_]
DPEP
(52)
[879][_]
Etre
(25)
[880][_]
La Protein
(4)
[881][_]
MDD
(4)
[882][_]
LEURS
(3)
[883][_]
Cou
(3)
[884][_]
TFEA
(3)
[885][_]
Proteins
(3)
[886][_]
DANS
(2)
[887][_]
Grou
(1)
[888][_]
XAD
(1)
[889][_]
Phosphate 1
(1)
[890][_]
CDF1
(1)
[891][_]
AD-2
(1)
[892][_]
FMP
(1)
[893][_]
Disease
(4/ 12)
[894][_]
Cancer
(9)
[895][_]
Pulmonary Fibrosis
(1)
[896][_]
TSes
(1)
[897][_]
Tic
(1)
[898][_]
Organism
(9/ 12)
[899][_]
rat
(2)
[900][_]
Mycobacterium smegmatis
(2)
[901][_]
Fusarium
(2)
[902][_]
mice
(1)
[903][_]
Streptomyces verticillus
(1)
[904][_]
Bacillus subtilis
(1)
[905][_]
Mycobacterium
(1)
[906][_]
Bacillus
(1)
[907][_]
trieres
(1)
[908][_]
Polymer
(2/ 10)
[909][_]
Sephadex
(6)
[910][_]
Avicel
(4)
[911][_]
Chemical Role
(4/ 10)
[912][_]
antibiotic
(5)
[913][_]
ANTICANCER AGENTS
(2)
[914][_]
excipient
(2)
[915][_]
adjuvant
(1)
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Images Mosaic View
Publication
_________________________________________________________________
Number FR2519637A1
Family ID 1903376
Probable Assignee Nippon Kayaku Kk
Publication Year 1983
Title
_________________________________________________________________
FR Title BLEOMYCINES SUBSTITUEES SUR L'nitrogen DU GROUPE AMIDO, LEURS
salts, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEURS APPLICATIONS
THERAPEUTIQUES
EN Title N-AMIDO SUBSTD. BLEOMYCIN DERIVS. - USEFUL AS ANTICANCER
AGENTS WITH HIGHER RESISTANCE TO ENZYMATIC DEGRADATION
Abstract
_________________________________________________________________
L'INVENTION A NOTAMMENT POUR OBJET DES BLEOMYCINES CARCINOSTATIQUES
INTERESSANTES SUBSTITUEES SUR L'nitrogen DU GROUPE AMIDO OU UN DE
LEURS salts REPRESENTES PAR LA FORMULE SUIVANTE:
(CF DESSIN DANS BOPI)
DANS LAQUELLE BM REPRESENTE UN FRAGMENT DE SQUELETTE DE BLEOmycin; X
REPRESENTE UN GROUPE ALKyl DE 1 A 18 ATOMES DE carbon; UN GROUPE
AMINOALKyl DE 1 A 12 ATOMES DE carbon; UN GROUPE ALKyl INFERIEUR
PORTANT UN halogen, UN GROUPE PHENyl, INDOLyl, UN GROUPE HETEROcyclic
A CINQ OU SIX CHAINONS, OU UN GROUPE (ALKYLE INFERIEUR)-AMINO (LE
GROUPE ALKYLE PEUT PORTER UN GROUPE SUBSTITUANT) COMME SUBSTITUANT; UN
GROUPE naphthyl, UN GROUPE THIAZOLyl; OU UN GROUPE N-PHENYL(ALKYLE
INFERIEUR)-PIPERAZINyl; ET R REPRESENTE UN RESTE AMINO TERMINAL DE LA
BLEOmycin.
Substd. bleomycin derivs. of formula (I) and their salts when R
contains a basic gp. are new. BM is the residue of bleomycin. X is
1-18C alkyl; 1-12C aminoalkyl; lower alkyl substd. by 1-3 halo, 1-2
phenyl, an indolyl or a 5 or 6 membered heterocycle contg. oxygen,
sulphur or nitrogen, and the phenyl and indolyl gps. can themselves be
substd. by halo or lower alkoxy; -X1-lower alkyl; naphthyl; thiazolyl
or N-(phenyl-lower alkyl)piperazino. R is the terminal amino residue
of a bleomycin. X1 is -NX2X3 or -NX2X3X4. X2 is H, lower alkyl or
benzyl. X3 is lower alkyl; opt. substd. by phenyl or by mono- or
di-(lower alkyl)amino, opt. substd. by phenyl or halophenyl. X4 is
lower alkyl opt.substd. by phenyl. (I) are useful as anticancer agents
and are more resistant to enzymatic degradation than natural
bleomycins. In mice the subcutaneous LD50 was at least 13.9 mg per kg
per day (over a 10-day test period) and the cpds. have a reduced
tendency to induce pulmonary fibrosis.
Description
_________________________________________________________________
La presente invention concerne de nouvelles bleomycines susbtituees
sur l'nitrogen du groupe amido, leurs salts et un procede permettant
de les preparer.
Les bleomycines sont une famille de substances antibiotic
carcinostatiques decouverte en l966 par Umezawa, l'un des inventeurs
de la presente invention, et ses collaborateurs rJournal of
Antibiotics, 19A,page 200 (1966)/.
Elle est produite par Streptomyces verticillus, un Actinomycete, et
c'est un glycopeptide hydrosoluble basique capable de chelater
facilement un atome de copper divalent. Dans une culture ordinaire, 16
elements de la famille des bles- mycines sont produits et sont chacun
isoles [par exemple,
Umezawa et coll., Journal of Antibiotics, 19A, page 210 (1966)~7.Parmi
ces bleomycines, A1, A2, AS, B2 et demethyl
A2 sont actuellement largement utilisees sous la forme de melanges
exempts de copper (qu'on appelera ci-apres complexes de bleomycin)
dans les domaines cliniques de la therapie du cancer; plus
particulierement, elles sont utilisees avec succes dans le traitement
du carcinome a cellules squameuses comme application principale, le
cancer de la peau, le cancer de la te te et du cou, le cancer du
poumon et le lymphome malin. Diverses bleomycines sont egalement
decrites dans le brevet des Etats-Unis d'AmErique n 3 922 262 et le
brevet des Etats-Unis d'Amerique Re 30 451.
Les bleomycines sont generalement produites sous la forme contenant du
copper dans la fermentation ordinaire. La forme exempte de copper est
obtenue en eliminant le copper de la forme contenant du copper. Le
terme ' bleomycin ", tel qu'il est utilise dans le present
memoire,englcbe a la fois la forme contenant du copper et la forme
exempte de copper, sauf indication contraire.
Les bleomycines sont representees par la formule generale (II): dans
laquelle R est un reste amine terminal de bleomycin; et le copper
chelate est omis dans le cas de la forme contenant du copper.
Cependant, on a constate que les bleomycines etaient inactivees par
l'action d'une enzyme d'inactivation de la bleomycin [qu'on designera
ci-apres plus brievement par enxyme d'inactivation; Umezawa et coll.,
Journal of
Antibiotics, volume 27, page 419 (1974) ]. On a encore cons tatF que
les bleomycines etaient relativement moins inacti tSes dans la peau et
le poumon ou elles deploient une grande activite, tandis qu'elles sont
facilement inactivees dans l'estomac ou elles sont supposees ne pas
avoir d'action et que ce phenomene d'inactivation est moins marque
dans le carcinome a cellules squameuses de la souris que dans le
sarcome de la souris, tous deux etant induits par le
20-methylcholanthrene CUmezawa et coll.Journal of Antibiotics,
Volume 25, page 409 (1972), Volume 27, page 419 (1974)c/.
En outre, on a constate que l'action d'inactivation de bleomycin se
manifestait en cas de carcinome a cellules squameuses de la tete et du
cou des etres humains, en particulier ceux du type a faible
differentiation contre lesquels les bleomycines sont supposees ne pas
etre si efficaces g Mueller et coll., Cancer, Volume 40, page 2787
(1977) J.
Comme on le comprendra d'apres les documents ci-dessus, les
bleomycines sont incapables d'exercer une ac tivite suffisante contre
les carcinomes contenant une enzyme d'inactivation de la bleomycin de
grande activite. C'est une des raisons de la necessite d'ameliorer
davantage les bleomycines. La Demanderesse envisage que s'il est
possible de decouvrir un derive de bleomycin difficilement sensible a
une inactivation enzymatique, il deviendrait possible de traiter plus
efficacement, par exemple, le cancer de la tete et du cou, le cancer
de l'oesophage, le cancer du poumon et lescarcinomes a cellules
squameuses dans d'autres regions et de traiter des adenocarcinomes
tels que le cancer de l'estomac qui ne sont pas sensibles au
traitement par des bleomycines classiques.De ce point de vue, la
Demanderesse a effectue des recherches poussees qui ont abouti a la
decouverte que les bleomycines etaient inactivees a un moindre degre
lorsqu'un substituant (-X) est introduit sur l'atome d'nitrogen de la
liaison amide de la structuramide partielle, le 2,3-diamino?ropanamide
des bleomycines. La presente invention est basee sur cette decouverte.
La presente invention se propose principalement de fournir de
nouvelles bleomycines qui sont difficilement inactivees par l'enzyme
d'inactivation et de fournir un procede pour leur preparation.
D'autres buts et avantages de l'invention ressortiront de la
description qui va suivre.
Selon la presente invention, on fournit des bleomycines substituees
sur l'nitrogen du groupe amido ou leurs salts, des intermediaires pour
leur preparation, et un procede pour leur preparation, lesdites
bleomycines substituees sur l'nitrogen du groupe amido etant
representees par la formule generale: dans laquelle BM represente un
fragment de squelette de bleomycin;X represente (1) un groupe alkyl de
1 a 18 atomes de carbon, (2) un groupe aminoalkyl de 1 a 12 atomes de
carbon, (3) un groupe alkyl inferieur portant comme substituant (a) de
1 a 3 atomes d'halogen, (b) 1 ou 2 groupes phenyl, (c) un groupe
indolyl, ou (d) un groupe heterocyclic a cinq ou six chainons
contenant un atome d'oxygen, de sulfur ou d'nitrogen (parmi les
groupes substituants, le groupe phenyle ou indolyle peut encore etre
substitue par un atome d'halogen ou un groupe alkoxy inferieur), (4)
un groupe X,(alkyle inferieur) th X1 represente
X2 est un atome d'hydrogen, un groupe al kyle inferieur ou benzyl, X3
est (a) un groupe alkyl inferieur, (b) un groupe phenyl(alkyle
inferieur), ou (c) un groupe mono- ou di-(alkyle inferieur)amino
(alkyle inferieur) qui peut etre substitue par un groupe phenyl ou
halogenophenyl, X4 est (a) un groupe alkyl inferieur ou (b) un groupe
phenyl(alkyle inferieur), (5) un groupe naphthyl, (6) un groupe
thiazolyl, ou (7) un groupe N-phenyl(alkyle inferieur)piperazinyl; et
R represente un reste amino terminal de la bleomycine3
Le fragment de squelette de bleomycin represente par BM est la portion
d'une molecule de bleomycin delimitee par les pointilles dans la
formule generale (II) des bleomycines et englobe aussi bien la forme
contenant du copper que la forme exempte de copper, sauf indication
contraire.Les groupes alkyl inferieurs sont des groupes al kyle'de 1 a
6 atomes de carbon, par exemple methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl,
n-butyl, isobutyl, n-pentyl, 3-methylbutyl, 3-methylpentyl et n-hexyl.
Des exemples de groupes individuels representes par X dans le formule
generale (I) sont les suivants (1) Des groupes alkyl de 1 a 18 atomes
de carbon; methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl,
tert-butyl, n-pentyl, 3-methylbutyl, neopentyl, n-heptyl,
3-methylpentyl, n-hexyl, 1,5-dimethylhexyl, isohexyl, n-octyl,
n-decyl, lauryl, myristyl, cetyl et stearyl.
(2) Des groupes aminoalkyl de 2 a 12 atomes de carbon 2-aminoethyl,
3-aminopropyl, 4-aminobutyl, 6-aminohexyl, 12-aminododecyl, et
4-amino-4-methyl-1-dimethylpentyl.
(3) Des groupes alkyl inferieurs ayant comme substituant (a) de 1 a 3
atomes d'halogen, (b) 1 ou 2 groupes phenyl, (c) un groupe indolyl, ou
(d) un groupe heterocyclic a cinq ou six chainons contenant un atome
d'oxygen, de sulfur ou d'nitrogen (parmi les groupes substituants, le
groupe phenyle ou indolyle peut encore etre substitue par un atome
d'ha halogen ou un groupe alkoxy inferieur): 2,2,2-trifluoroethyl,
2,2,2-trichloroethyl, 2,2-difluoroethyl, 2,2-dichloroethyl, benzyl,
diphenylmethyl, 2-phenylethyl, 2,2-diphenylethyl, 1-phenylethyl,
1,2-diphenylethyl, 3-phenylpropyl, 2-phenylisopropyl,
1,3-diphenylpropyl, 3,3-diphenylpropyl, 4-phenylbutyl,
4,4-diphenylbutyl, chlorobenzyl, dichlorobenzyl, bromobenzyl,
methoxybenzyl, dimethoxybenzyl, ethoxybenzyl, methylenedioxybenzyl,
propoxybenzyl, p-chlorophenylethyl, p-methoxyphenylethyl,
p-benzyloxybenzyl, furylmethyl, 2-furylethyl, 2-thiazolylmethyl,
2-pyrazolylmethyl, 2-imidazolylmethyl, 4-imidazolylmethyl,
2-thienylmethyl, 2-pyridylmethyl, 3-pyridylmethyl, 4-pyridylmethyl,
3-indolylmethyl, 2-(3-indolyl)ethyl, Smethoxy-3-indOlyl-methyl,
2-pyrimidylmethyl, 2-pyrimidylethyl, 4-pyrimidylmethyl,
4-pyrimidylethyl, 2-piperidylmethyl, 3-piperidylmethyl,
4-piperidylmethyl, 2-(2-piperidyl)-ethyl, 2-(3-piperidyl)ethyl,
2-(4-piperidyl)ethyl, 1-(2-piperidyl)ethyl, 1-(3-piperidyl-ethyle,
1-(4-piperidyl) ethyle, 2-(piperidino-ethyle, 2-piperazylmethyle,
2-(2-piperazylethyl), 2-(piperidino)ethyle, 3-piperidinopropyle,
2-(morpholino)ethyle, 3-(morpholino)propyle, 2-morpholinylmethyle,
3-morpholinylmethyle, 2-(morpholinyl-ethyle, et 3-(morpholinyl)propyl.
(4) X1-(alkyle inferieur) (ot X1 est dimethylaminoethyle,
diethylaminoethyle, dipropylaminoethyl,e, propylaminoethyle,
dimethylaminopropyle, diethylaminopropyle, dipropylaminopropyle,
propylaminopropyle, dibutylaminopropyle, butylaminopropyle,
benzylaminopropyle, 2-phe nylethylaminopropyle,
l-phenylethylaminopropyle, 3-phenylpropylaminopropyle,
4-phenylbutylaminopropyle, methylamino ethylaminopropyle,
ethylaminopropylaminopropyle, propylaminopropylaminopropyle,
butylaminopropylaminopropyle, N-(butyl aminopr?pyle)
-N-methylaminopropyle, dibutylaminopropylamino- propyle,
pentylaminopropylaminopropyle, ethylaminobutylaminopropyle,
propylaminobutylaminopropyle, ethylaminopropylaminobutyle,
butylaminopropylaminobutyle, benzylaminoethyla minoethyle,
benzylaminoethylaminopropyle, benzylaminopropylaminopropyle,
benzylaminobutylaminopropyle, phenylethylaminopropylaminopropyle,
N-(phenylethylaminopropyl)-N-methylami- norpropyle,
N-(chlorobenzylaminopropyl)-N-methylpropyle, N
(bromobenzylaminopropyl-N-methylpropyle,
N-(chlorophenylethylaminopropyl)-N-methylpropyle, benzylaminopyle-N,N
dimethylaminopropyle, dibenzylaminopropylN,N-diethylaminopropyle, et
dibenzylaminopropyl-N-methyl-N-benzylaminopropyl.
(5 greater than des groupes naphthyl: -naphthyl et 1# -naphthyl.
(6) des groupes thiazolyl: 2-thiazolyl, 3-thiazolyl et 4-thiazolyl.
(7) des groupes N-phenyle(alkyle inferieur)piperidyl: N
benzyl-4-piperidyl, N-phenylethyl-4-piperidyl, N-benzyl-3-pipEridyl et
N-benzyl-2-piperidyl.
Le reste amino terminal des bleomycines representes par R peut etre
l'un quelconque des groupes amino aliphatic substitues ou non
substitues, mais c'est generalement un groupe amino primaire aliphatic
de nature basique represente par la formule generale (III).
R2 - R1 - NH - (III) dans laquelle R1 est (1) une chaine de groupes
alkylene qui peuvent presenter un atome d'nitrogen intercale entre les
groupes alkylene de la chaine [des exemples d'un tel groupe sont ceux
representes par les formules -R12-Y1 -R13- et -R12-Y1-R13 -Y2-R14 -,
ou R12,R13 et R14 sont des groupes alkylene et Y1 et Y2 representent
chacun un groupe de formule
(ou R3 et R sont des atomes d'hydrogen ou des groupes alkyl inferieurs
qui peuvent porter des substituants) 5, (2) ou (3) un groupe
phenylene; et R2 est l'un quelconque des groupes ae nature basique g
aes exemples d'un tel groupe sont ceux representes par la formule dans
laquelle R4 est comme defini ci-dessus; R5, R6 et Rg representent
chacun un groupe alkyl inferieur qui peut porter un substituant; et R7
et R8 representent chacun un atome d'hydrogen ou un groupe alkyl de 1
a 10 atomes de carbon pouvant porter un substituant /. Le groupe
alkylene du groupe amino ci-dessus est celui ayant 1 a 8 atomes de
carbon, tel que, par exemple; bien que les groupes alkylene ayant de 2
a 4 atomes de car bone soient le plus souvent utilises.Les
substituants des groupes alkyl ci-dessus comprennent les groupes
hydroxyl, alkoxy (par exemple methoxy, ethoxy, propoxy et butoxy),
phenyl / qui peut porter un ou plusieurs substituants choisis entre
des halogens, des groupes cyano, alkyl inferieurs, benzyloxy, et des
groupes benzyloxy substitues (par exemple par un groupe alkoxy,
phenoxy ou un halogen) ], et des groupes cycloalkyl de 5 a 13 atomes
de carbon.
Des exemples des groupes amino ci-dessus compren- nent les suivants:
2-aminoethylamino, 3-aminopropylaino, 2-dimethylaminoethylamino,
2-diethylaminoethyl-triylaminopropylamino, 3-diethylaminopropylamino,
3-(3-butyl-aminopropylamino)-propylamino, 3-(2-oxypropylamino)propyl-
mino, 3-piperidinopropylamino, 3-(1-phenylethylamino)propyl-amino,
2-aminopropylamino, 3-methylaminopropylamino, 3-butylaminopropylamino,
3-(6-aminohexylamino)propyla thylaminopropylamino,
3-(3-dimethylaminopropylamino)propyl-amino,
3-(3-aminopropylamino)-propylamino, 3-[N-methyl--N
(3-aminorpropyl)amino]-propylamino, 3-pyrrolidinylpropylamino,
3-piperidinylpropylamino, 3-morpholinopropylamino,
3-piperazinylpropylamino, 3-[4-(3-aminopropylpiperazinyl
#]propylamino,3-(3-pyrrolidinylpropylamino)propylamino,
3-(3-piperidinylpropylamino)propylamino,
3-(3-morpholinylpropylamino)-propylamino,
3-(3-oxypropylamino)propylamino, 3-(3-methoxypropylamino)propylamino,
3-benzylaminopropylamino, m-aminomethylbenzylamino,
p-aminomethylbenzylamino, 2-cyclopentylaminoethylamino,
3-cyclohexylaminopropylamino, 4-cyclohexylaminobutylamino,
cycloheptylaminopropylamino, 3-cyclooctylaminopropylamino,
3-[N-methyl-N-(3-cyclooctylmethyl-aminopropyl)amino]propylamino,
3-cyclodecanylmethylaminopropylamino,
3-{N-methyl-N-[3-(2-p-chlorophenylethylamino)propyl]amino}propylamino,
3- {N-methyl -N-[3-(m,pdibenzyloxybenzyl) aminopropyl ]amino}
propylamino, 3-{Nmethyl -N-[3-(p-cyanobenzylamino)propyl]amino }
propylamino, 3-{N-methyl-N-[3-(cycloundecanylmethylamino)propyl]amine
-propylamino, 3-# N-methyl -N-bis(m,p-dibenzyloxy-benzyl)-aminopropyl
/amino-2-propylamino, 3- # N,N-dimethyl
N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino #propylamino, 3-#N,N-diethyl
-N-[3-(dibenzylaminorpopyl) ]amino# propylamino, 3-{ #N,N-dimethyl
-N-[3-(N,N-dimethyl-N-(3-dibenzylaminopropyl-N-(3-dibenzylaminopropyl)
)amino #propylamino,
3-#N,N-dimethyl-N-/3-(N,N-dimethyl-N-(3-dibenzylaminopropyl)amino)prop
yl Jamino propylamino, 3-lN,N-dimethyl
-N-[3-(N,N-dimethyl-N-(3-cyclooctylmethylaminopropyl)amino)propyl-7-am
ino#propylamino, 3-/4-(3-dibenzylaminopropyl)piperidyl ]-propylamino
et 3-#4-[3-(cyclooctylmethylamino)propyl]piperidyl # propylamino.
Comme composes avantageux, on peut citer ceux dans lesquels R est un
groupe 3-[(S)-l'-phenylethyl ]amino-propylamino ou
3'-(n-butylaminopropyl)aminopropylamino et ceux presentant un reste
amine represente par la formule (1V)
-NH-(CH2)3-A-(CH2)3-B (IV) dans laquelle R10, R10,, R11 et R11,,qui
peuvent etre iden tic ou differents,representent chacun un groupe
alkyl inferieur, benzyl ou un groupe benzyl-halogen et B represente
Eou R12 represente (1) un groupe phenyl (alkyle inferieur), (2) un
groupe phenyl (alkyle inferieur) portant sur le noyau phenyl un ou
plusieurs substituants choisis parmi (a) des halogens, (b) des groupes
alkyles inferieurs, (c) des grou pes alkoxy inferieurs, (d) un groupe
cyano, (e) un groupe trifluoromethyl, (f) un groupe benzyloxy qui peut
porter sur le noyau phenyl des substituants tels que des halogens, un
groupe alkoxy et phenoxy, (g) des groupes di(alkyle inferieur)amino,
et (h) un groupe phenyl, (3) un groupe cyclohexyl, (4) un groupe
triphenylmethyl, (5) un groupe naphthylmethyl, (6) un groupe
furylmethyl, (7) un groupe thiophenemethyle, (8) un groupe alkyl
inferieur substitue par un groupe cycloalkyl de 5 a 13 atomes de
carbon, ou (9) un groupe norbornene-2-methylei et R13 represente (1)
un stome d'hydrogen, (2) un groupe benzyl, ou (3) un groupe benzyl
portant sur le noyau phenyl un ou plusieurs halogens ou groupes
benzyloxy comme substituant /. Ces compo ses sont avantageux en raison
de leur toxicite pulmonaire relativement faible. Dans les formules
ci-dessus, les groupes alkyl inferieur comprennent les groupes methyl,
ethyl et butyl; les groupes phenyl (alkyle inferieur) comprennent les
groupes benzyl, 2-phenylethyl, 1-phenylethyl, 3-phenylpropyl,
2,2-diphenylethyl, et dibenzylmethyl;; les groupes phenyle(alkyle
inferieur) portant des substituants sur le noyau phenyl comprennent
les groupes 2-p chlorophenyl-EttyLe, pchlorobenzyle7 o-chlorobenzyl,
mchlorobenzyle, 1-(p-chlorophenyl)-ethyl, o,p-dichlorobenzyl,
m,p-dichlorobenzyl, p-bromobenzyl, p-fluorobenzyie, pentafluorobenzyl,
m-trifluoromethylbenzyl, p-methylbenzyl, p-diethylaminobenzyl,
p-methoxybenzyl, o,p-dimethoxybenzyl, m,p-dibenzyloxybenzyl,
p-cyanobenzyl et p-phenylbenzyl; et les groupes alkyl inferieurs
substitues par un groupe cycloalkyl de 5 a 11 atomes de carbon
comprennent les groupes cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl,
cycloheptylmethyl, cyclooctylmethyl, cycloundecanylmethyl et
2-cyclobexylethyle.
Des composes particulierement avantageux sont ceux representes par la
formule generale (I) dans laquelle
R est un groupe 1-phenylethylaminopropylamino, butylaminopropylamino
ou un groupe amino represente par la formule generale (V)
-NH-(CH2)3-A1-(CH2)3 B1 (V) dans laquelle A1 represente
(oh R10, et R11' representent chacun un groupe alkyle inferieur ou
benzyl et B1 represente
[ou R12, represente (1) un groupe phenyl-(alkyle inferieur) qui peut
porter sur le noyau phenyle un ou deux substituants comprenant (a) des
halogens, (b) un groupe cyano, et (c) un groupe benzyloxy, ou (2) un
groupe alkyle inferieur substitue par un groupe cycloalkyle de 5 a 13
atomes de carbon; et R13, est l'hydrogen ou un groupe benzyl qui peut
porter un ou deux groupes benzyloxy comme substituantsj.
Les combinaisons de X et R, qui presentent une toxicite pulmonaire
particulierement basse, sont les suivantes
Les bleomycines substituees sur l'nitrogen du groupe amido dans
lesquelles X est le groupe isopropyl, (S)-1-phenylethyl,
diethylamino-1-methylbutyl-dibutylaminopropyl, ou
n-butylaminopropylaminopropylamino et R est un groupe
1-phenylethylamino ou N-(alkyle
inferieur)-N-(halogeno-benzylaminopropyl)aminopropylamino; leurs
salts; les bleomycines substituees sur l'nitrogen du groupe amido dans
lesquel- les X est un groupe alkyl de 3 a 8 atomes de carbon, les
groupes 1,5-dimethylhexyl, benzyl, 1-phenylethylaminopropyl,
di-n-butylaminopropyl. n-butylaminopropylaminopropyl,
N-methyl-N-benzyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropyl, ou
N-methyl-N-(halogenophenylethylaminopropyl)aminopropyl et
R est un groupe N-methyl-N-(halogenophenylethylaminopropyl)
aminopropylaminq,
N-methyl-N-benzyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropylamino,
N-methyl-N-[bis(m,p-dibenzyloxybenzyl)-aminopropyl/aminopropylamino,
N-methyl-N-methyl-N-(dibenzylaminopropyl)aminopropylamino,
N-ethyl-N-ethyl-N-(dibenzylamino-propyl)aminopropylamino,
N-methyl-N-(cyclooctylmethylamino-propyl)aminopropylamino, ou
N-methyl-N-(cyanobenzylaminopropyl)aminopropylamino; et leurs salts.
Comme exemples des composes de la presente inven- tion, on peut citer
ceux indiques sur le Tableau I. Sur le
Tableau I, "BLM" figurant dans le nom du compose represente
"bleomycin" et le compose represente par la formule generale (I) est
designe par "nom de R (reste amino)-(amido)
N-[nom de X]-BLM".
TABLEAU 1
Compose Nom du compose Abrevia
N tion
1 2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[methyl]-BLM dH-MMA
2 2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[ethyl]-BLM dH-MEA
3 2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[isopropyl]-BLM dH-IPA
4 2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[benzyl]-BLM dH-BA
5 2-(4'-Imidazolyl)ethylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenylethyl)- dH-PEP
aminopropyl)-BLM
6 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2-aminoethyl]-BLM dH-EDA
7 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[isopropyl]-BLM dB2-IPA
8 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[1',6'-dimethylheptyl]-BLM dB2-DHA
9 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2',2',2'-trifluoroethyl]-BLM
dB2-TFEA
10 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[octyl]-BLM dB2-OCT
11 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenylethyl)amino-
dB2-PEP propyl]-BLM
12 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]-BLM
dB2-BPA
13 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[lauryl]-BLM dB2-LAA
14 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[benzyl]-BLM dB2-BA
TABLEAU 1 (Suite)
15 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[diphenylmethyl]-BLM dB2-ADPM
16 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[1',2'-diphenylethyl]-BLM dB2-DPE
17 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[ss-naphthyl]-BLM dB2-NA
18 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2-furylmethyl]-BLM dB2-FFA
19 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[3-pyridylmethyl]-BLM dB2-AMPY
20 4-Guanidinobutylamino-(amido)N-[2-thiazolylmethyl]-BLM dB2-ATZ
21 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[isopropyl]-BLM
dPEP-IPA
22 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-
dPEP-PEP phenylethyl)aminopropyl]-BLM
23 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[benzyl]-BLM
dPEP-BA
24 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[p-chlorobenzyl]-
dPEP-CBA
BLM
25 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[stearyl]-BLM
dPEP-STE
26 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[lauryl]-BLM
dPEP-LAA
27 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[octyl]-BLM
dPEP-OCT
28 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[5-methoxyindol-
dPEP-MTA
3-ylethyl]-BLM
29 3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropylamino-(amido)N-[12-aminodo-
dPEP-DAD decanyl]-BLM
TABLEAU 1 (Suite)
30 3-((S)-l'-phenylethylamino)propylamino-(amido)N-[1',2'-diphenyl-
dPEP-DPE ethyl]-BLM
31 3-((S)-l'-phenylethylamino)propylamino-(amido)N-[diphenylmethyl]-
dPEP-ADPM
BLM
32 3-((S)-l'-phenylethylamino)propylamino-(amido)N-[1,6-dimethyl-
dPEP-DHA heptyl]-BLM
33 3-((S)-l'-phenylethylamino)propylamino-(amido)N-[2-(1- dPEP-APZ
piperazinyl)ethyl]-BLM
34 3-((S)-l'-phenylethylamino)propylamino-(amido)N-[3-(di-n- dPEP-BPA
butylamino)propyl]-BLM
35 3-((S)-l'-phenylethylamino)propylamino-(amido)N-[N-benzyl- dPEP-ABP
piperazin-4-yl]-BLM
36 3-((S)-l'-phenylethylamino)propylamino-(amido)N-[4-diethylamino-
dPEP-ADP
1-methylbutyl]-BLM
37 3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)amino]propylamino- dBAPP-IPA
(amido)N-[isopropyl]-BLM
38 3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)amino]propylamino- dBAPP-BAP
(amido)N-{3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)amino]priopyl]-BLM
39 3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)aminopropyl]amino]- dMCLB2-PE
popylamino-(amido)N-[3-(S)-l'-phenylethyl)aminopropyl]-BLM
40 3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)aminopropyl]amino]- dMCLB2-OC
propylamino-(amido)N-[octyl]-BLM
TABLEAU 1 (Suite)
41 3-[N-methyl-N-[3-(p-chlorobenzyl)aminopropylamino]propyl- dMCLBZ
amino-[amido]N-[1,2-diphenylethyl]-BLM DPE
42 3-[N-methyl-N-[3-(p-chlorobenzyl)aminopropyl]amino]propyl- dMCLBZ
amino-(amido)-N-[1,5-dimethylhexyl]-BLM DHA
43 3-[N-methyl-N-[3-(2-(p-chlorophenyl)ethyl)aminopropyl]amino]-
dMCLPE propylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropyl]-BLM
PEP
44 3-[N-methyl-N-[3-(2-(p-(chlorophenyl)ethyl)aminopropyl)amino]-
dMCLPE propylamino-(amido)N-[octyl]-BLM OCT
3-[N-methyl-N-[3-(2-(p-chlorophenyl)ethyl)aminopropyl]amino]- dMCLPE45
propylamino(amido)N-[3-[N-methyl-N-[3-(2-(p-chlorophenyl)- MCLPE
ethyl)aminopropyl]amino]propyl)-BLM
46 3-[N-methyl-N-[3-(2-(p-chlorobenzyl)aminopropyl)amino]- dMCLPE
propylamino-(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]-BLM BPA
47 3-[N-methyl-N-benzyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]- dMTBZ
propylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropyl]-BLM PEP
48 3-[N-methyl-N-benzyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]- dMTBZ
propylamino-(amido)N-[octyl]-BLM OCT
3-[N-methyl-N-benzyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]- dMTBZ49
propylamino-(amido)N-[3-(N-methyl-N-benzyl-N-[3-(dibenzyl- MTBZ
amino)propyl]amino]propyl]-BLM
3-[N-methyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]50-propylamino-(amido)N-[
3-[N-methyl-N-(3-n-butylaminopropyl)]- dMTBZ aminopropyl]-BLM BAPP
TABLEAU 1 (Suite)
51 3-[N-methyl-N-benzyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]- dMTBZ
propylamino-(amido)N-[benzyl]-BLM BA
52 3-[N,N-dimethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]- dMMDBZ
propylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenyl)aminopropyl]-BLM PEP
53 3-[N,N-dimethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]- dMMDBZ
propylamino-(amido)N-[n-octyl]-BLM OCT
54 3-[N,N-dimethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]- dMMOBZ
propylamino-(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]-BLM BPA
55 3-[N,N-diethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]-propyl- dEEDBZ
amino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropyl]-BLM PEP
56 3-[N-methyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]-propylamino- dEEDBZ
(amido)N-[octyl]-BLM OCT
57 3-[N,N-diethyl-N-[3-(dibenzylamino)propyl]amino]propylamino- dEEDBZ
(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]-BLM BPA
58 3-[N-methyl-N-[3-(cyclooctylmethylamino)propyl]amino]- dMCO
propylamino-(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]-BLM BPA
59 3-[N-methyl-N-[3-(cyclooctylmethylamino)propyl]amino]propyl- dMCO
amino-(amido)N-[octyl]-BLM OCT
60 3-[N-methyl-N-[3-cyclooctylmethyl]aminopropyl]amino]
propylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenylethylamino)propyl]-BLM dMCO-PEP
61 3-[N-methyl-N-[3-(p-cyanobenzylamino)propyl]amino]- dMCNBZ
propylamino-(amido)N-[3-(di-n-butylamino)propyl]-BLM BPA
TABLEAU 1 (Suite)
62 3-[N-methyl-N-[3-(p-cyanobenzylamino)propyl]amino]propylamino-
dMCNBZ
(amido)N-[octyl]-BLM OCT
63 3-[N-methyl-N-[3-(p-cyanobenzylamino)propyl]amino]propylamino-
dMCNBZ
(amido) N-[3-((S)-l'-phenylethylamino)propyl]- PEP
64 3-[N-methyl-N-[3-bis(m,p-dibenzyloxybenzyl)aminopropyl]amino]-
dMDDBZOBZ propylamino-(amido)N-[3-((S)-l'-phenylethyl)aminopropyl]-BLM
PEP
65 3-[N-methyl-N-[3-bis(m,p-dibenzyloxybenzyl)aminopropyl]amino]-
dMDDBZOBZ propylamino-(amido)N-[n-octyl]-BLM OCT
Les composes de l'invention representes par la formule generale (I)
sont separes comme decrit ci-apres.
Un compose represente par la formule (VI) suivante ou un derive
reactif de son groupe carboxyl est condense avec une amine (decrite
ci-apres): dans laquelle BM represente un fragment de squelette de
bleomycin, Ro represente un groupe hydroxyl ou un reste amino terminal
de bleomycin, X represente un groupe o hydroxyl ou un groupe de
formule -NH-X, au moins l'un des symboles Ro et Xo representant le
groupe hydroxyl, et
X represente (1) un groupe alkyl de 1 a 18 atomes de carbon, (2) un
groupe aminoalkyl de 1 a 12 atomes de carbon, (3) un groupe alkyl
inferieur portant comme substituant (a) de 1 a 3 atomes d'halogen, (b)
1 ou 2 groupes phenyl, (c) un groupe indolyl, ou (d) un groupe
heterocyclic a cinq ou six chainons contenant un atome d'oxygen, de
sulfur ou d'nitrogen (parmi les groupes substituants, le groupe
phenyle ou indolyle peut encore etre substitue par un atome d'halogen
ou un groupe alkoxy inferieur), (4) un groupe X1-aikyle inferieur /ou
X1 represente
X2 est un atome d'hydrogen, un groupe alkyl inferieur ou benzyl, X3
est (a) un groupe alkyl inferieur, (b) un groupe phenyl (alkyle
inferieur), ou (c) un groupe mono- ou di-(alkyle
inferieur)amino(alkyle inferieur) qui peut etre substitue par un
groupe phenyl ou halogenophenyl, X4 est (a) un groupe alkyl inferieur
ou (b) un groupe phenyl(alkyle inferieur)7, (5) un groupe naphthyl,
(6) un groupe thiazolyl, ou (7) un groupe
N(phenyl(alkyle inferieur)piperazinyle.Lorsque XO de la formule (VI)
est le groupe hydroxyl, une amine de formule
H2N-X (VII) (dans laquelle X a la definition ci-dessus) est utilisee
dans la condensation, tandis que lorsque Ro de la formule (VI) est le
groupe hydroxyl et XO est -NH-X (ou X est comme defini ci-dessus, on
utilise une amine de formule
H-R (VIII) (dans laquelle R est comme defini ci-dessus). Si
necessaire, le produit de condensation est debarrasse du copper en
donnant une bleomycin substituee sur l'nitrogen du groupe amino de
formule generale (I). En outre, si necessaire,un sel de lsalt
bleomycin substitue sur l'nitrogen du groupe amido est prepare d'une
maniere usuelle.
La condensation d'un compose de formule (VI) ou d'un derive reactif de
son groupe carboxyl avec une amine de formule (VII) ou (VIII) est
realisee selon le processus connu de formation d'une liaison amide, en
particulier celui utilise dans la chimie des peptides. On fait reagir
un compose de formule (VI) avec une amine de formule (VII) ou (VIII)
en presence des tractifs d'activation du groupe carboxyl qui sont
utilises dans la chimie des peptides. En variante, le compose de
formule (I) est obtenu par reaction d'une amine de formule (VII) ou
(VIII) avec un derive reactif pour le groupe carboxyl d'un compose de
formule (VI). Les derives sont, par exemple, un derive obtenu par
reaction d'un reactif d'activation du groupe carboxyl et du compose de
formule (VI) ou d'un 3-aminopropyl-ester du groupe carboxyl du compose
de formule (VI).Comme exemples des reactifs d'activation, on peut
citer les suivants:
6-chloro-1-p-chlorobenzdnesulfonyl-oxybenzotriazole,
3z-N-ethyl-5-phenylisooxazoliumsulfonate, perchlorate de
N-tert-butyl-5-methyl-isooxazolium,
N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline (FEDQ), di-p-nitro
sulfite- phenyl, tri-p-nitrophenyl phosphite, p-nitrophenyl
trichloroacetate, dicyclohexylcarbodiimide (dicyclohexylcarbodiimide),
1-ethyl-3-(3-di-methylaminopropyl)carbodiimide,
1-cyclohexyl-3-(2-morpholinoethyl)carbodiimide, diphenylcarbodiimine,
dip-tolylcarbodiimide, diisopropylcarbodiimide, diphenyl
phosphorazidate (diphenyl phosphorazidate), et diethyl (DEPC).
Comme exemples des derives reactifs du groupe carboxyl des composes de
formule (VI), on peut citer les derives reactifs obtenus par reaction
des reactifs d'activation ci-dessus avec le groupe carboxyl; les
derives reactifs du groupe carboxyl que l'on obtient par l'utilisation
simultanee des reactifs d'activation et des additifs de condensation,
comme par exemple le p-nitrophenol, le o,p-dinitrophenol, le
pentachlorophenol, le 2,4,5-trichlorophenol, le pentafluorophenol, le
N-hydroxysuccinimide, le 1-hydroxybenzotriazole, le
N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide; l'3-aminopropyl-ester du
groupe carboxyl de formule (IV), et les esters 3-aminopropyliques
monosubstitues tels que, par exemple, l'3-acetylaminopropyl-ester,
lester 3-succinylaminopropylique, lester 3-benzoylaminopropylique,
l'ester3 -benzylaminopropylique,
l'3-p-toluenesulfonylaminopropyl-ester, l'ester3-(2,4-dinitrophenyl)
aminopropylique,
l'3-(3,5-dimethyl-3-oxocyclohexene-1-yl)aminopropyl-ester,
l'3-(tert-butoxycarbonyl)aminopropyl-ester, et l'ester3-(salicylidene)
iminopropylique.
La condensation est effectuee d'une facon generale dans un solvant. Le
solvant peut etre n'importe lequel de ceux qui n'affectent pas la
reaction, mais il est preferable d'utiliser un solvant polaire qui
dissout le compose de formule (VI) utilise comme matiere de depart.
Des exemples de tels solvants sont l'water, le dimethylformamide, le
dimethylacetamide, l'acetonitrile, et leurs melanges. Le rapport
molaire de l'amine de formule (VII) ou (VIII) au compose de formule
(VI) est generalement d'environ 0,5 a 20, de preference d'environ 1 a
10. Bien que la temperature de reaction depende du type de solvant et
d'autres conditions, elle est cependant en general de -15 a 450C, de
preference de -100 A 300C. La duree de reaction est de 1 a 70
heures.Le procede selon la presente invention est decrit en-detail
ci-apres.
La forme contenant du copper du compose de formule (VI) et, si
necessaire, l'additif susmentionne sont dissous dans l'water, le
dimethylformamide, l'acetonitrile, ou un melange de ceuxrci. On ajoute
a la solution le reactif d'activation susmentionne tout en agitant
entre -5 et 150C.
Si necessaire, on ajuste le- pH du melange a une valeur convenant pour
l'activation avec un acide ou une base inorganic acid comme
l'hydrochloric acid ou l'sodium hydroxide ou avec une base organique
telle que la triethylamine ou la N-methylmorpholine. On ajoute ensuite
au melange le composant amine tel quel ou en solution a pH ajuste. Le
melange resultant est agite et, si necessaire, son pH est ajuste d'une
maniere analogue a celle decrite ci-dessus.
L'agitation est poursuivie pendantl a 70 heures pour obtenir le
compose recherche selon la presente invention.
L'isolement du derive ainsi forme est realise de la maniere suivante.
Un solvant organique tel que l'acetone ou l'etherest ajoute au melange
reactionnel pour precipiter le produit desire. Le precipite est
dissous dans l'water distillee, puis ajuste a pH 6 et, a des fins
d'elimination de salts, on le fait passer a travers une colonne garnie
d'une resine d'adsorption telle que, par exemple, Amberlite #XAD-2
(Rohm and Haas Co.) dans l'water distillee pour effectuer
l'adsorptiondu produit desire sur la resine.
La colonne est lavee a l'water distillee pour eliminer le salt, et
eluee avec du methanol aqueux acidifie tel qu'un melange
d'hydrochloric acid 1/50N et de methanol (1:4 volume/volume) pour
recueillir les fractions ayant un maximum d'adsorption aux environs
d'une longueur d'onde 290 u. La fraction combinee est neutralisee avec
Dowex R44 (une resine echangeuse d'anions du type OH de Dow Chemical
Co), puis concentree sous pression reduite et lyophilisee en donnant
une poudre brute du derive. Dans certains cas, le stade d'elimination
des salts peut etre omis et la solution du precipite dans l'water
distillee peut etre directement soumise au second stade du traitement.
Dans le second stade, la solution de poudre brute dan 'water distillee
passe a travers une colonne garnie de CM-C-25 (type Na+; Pharmacia
Fine Chemicals Co.), qui a ete equilibree avec une solution tampon 1
M/20 M d'acetic acid-sodium acetate (pH 4,5), pour effectuer
l'adsorption du produit desire. La phase adsorbee est ensuite eluee
par la technique du gradient lineaire de concentration qui est
appliquee en ajoutant en continu du sodium chloride a la solution
tampon ci-dessus pour augmenter la concentration de sodium chloride
graduellement jusqu'a 1,0 M. Dans ce stade, les reactifs n'ayant pas
reagi et les sous-produits tendent a etre elues a un stade premature
et peuvent etre separes au moyen d'un selecteur a adsorption
d'ultraviolets.Si l'on constate que la fraction du produit desire est
contaminee par des impuretes, la chromatographie est repetee pour
eliminer la totalite de ces impuretes.
En variante, a la place de la chromatographie cidessus, un autre
procede de purification chromatographique peut etre is en oeuvre en
utilisant une resine adsorbante Ambrer lite XAD-L, par exemple. La
solution aqueuse du produit brut est amenee a traverser la colonne
garnie de la resine dans une solution tampon, telle que par exemple
une solution aqueuse a 1 percent d'ammonium acetate pour effectuer
l'adsorption du produit desire. La phase adsorbee est eluee par la
technique du gradient lineaire de concentration dans laquelle du
methanol est ajoute en continu a la solution tampon pour augmenter
graduellement la concentration de methanol.Etant donne que les
reactifs n'ayant pas reagi ont tendance a etre elues a un stade
premature et les sousproduits principaux a un stade avance, ils
peuvent etre separes par utilisation d'un selecteur a ultraviolets. Si
l'on constate que les fractions desirees sont contaminees par des
impuretes, elles peuvent en etre completement debarrassees en repetant
la chromatographie.
Les deux types ci-dessus de chromatographie sont realises seuls ou en
combinaison. La fraction purifiee contenant le produit desire est
dessalee en utilisant une resine adsorbante telle que par exemple
Amberlite U XAD-2, et lyophilisee en donnant une poudre amorphe bleue
d'une bleomycin substituee sur l'nitrogen du groupe amido contenant du
copper. La forme exempte de copper est obtenue en eli- minant le
copper de la forme contenant du copper par un procede connu tel que
celui utilisant EDTA comme decrit dans le brevet japonais n 31 875/77.
Un exemple du processus d'elimination du copper est decrit ci-apres.
Le produit contenant du copper est dissous dans l'water distillee et
la solution resultante t amenee a traverser une colonne garnie de
Amberlite ~ XAD-2 dans l'water distillee pour effectuer l'adsorption
du produit contenant du copper. La resine est ensuite lavee avec une
solution aqueuse contenant du sodium chloride et 5 percent de salt
disodium de l'ethylenediaminetetraacetic acid (abrege par EDTA.2Na)
pour faire transporter l'ion copper par EDTA2Na, en laissant la
bleomycin substituee a l'nitrogen du groupe amino exempte de copper,
adsorbee sur la resine.La resine est ensuite lavee avec une solution
de sodium chloride pour eliminer EDTA.2Na, puis avec de l'water
distillee, et enfin eluee avec du methanol aqueux acidifie, tel que
par exemple un melange hydrochloric acid aqueux 1/50 N-methanol (1:4
volume/volume) pour recueillit les fractions qui presentent un maximum
d'adsorption aux environs de 29a eu. La fraction combinee est ajustee
a pH 6,0 avec Dowex R 44 (type OH; Dow Chemical Co.), concentree sous
pression reduite, et lyophilisee en donnant une poudre amorphe blanche
de bleomycin hydrochloride substituee sur l'nitrogen du groupe amido
exempte de copper.
Si l'on utilise du sodium sulfate et une solution aqueuse d'sulfuric
acid a la place du sodium chloride et de la solution aqueuse
d'hydrochloric acid, on obtient un sulfate. Ainsi, on peut obtenir
tout salt desire par un choix de salt et de l'acidutilises au stade
d'elution. Comme exmples de salts obtenus de cette maniere, on peut
citer l'acetate, la tartrate, le citrate, le maleate et le lactate en
plus du hydrochloride et du sulfate.
Lorsque la bleomycin substituee sur l'nitrogen du groupe amido
preparee comme decrit ci-dessus est soumise a une hydrolyse avec de
l'hydrochloric acid aqueux 6 N a 1050C pendant 20 heures, on decele,
hormis l'amine R-H et
X-NH2 ou un produit de decomposition de ladite amine dans certains
cas, des produits de decomposition qui sont communs aux bleomycines,
comprenant la L-threonine, l'acidss -amino-A -
(4-amino-6-carboxy-5-methyl-pyrimidin-2-yl) propioniaue,
l'acid4-amino-3-hydroxy-2-methyl-n-pentarocque, la
p-hydroxyL-histidiRe, la / -amino-L-alanineet
l'2'-(2-aminoethyl)-2,4'-bithiazole-4-carboxylic acid. Ce fait
confirme que la bleomycin substituee sur l'nitrogen du groupe amido a
la structure chimique representee par la formule (I) mentionnee
ci-dessus.
Dans la formule generale (VI) des composes utilises comme matiere de
depart, lorsque XO est un groupe hydroxyl et R est un reste amino
terminal des bleomycines, on obtient une deamidobleomycine (forme
contenant du copper) de formule dans laquelle BM et R ont la
definition donnee precedemment.
On la prepare en hydrolysant des bleomycines exemptes de copper de
formule generale (II) avec une enzyme d'inactivation de rat ou celle
extraite de facon similaire de foie de bovin ou de porc.
Par exemple, un foie de bovin est homogeneise dans une solution tampon
au phosphate et centrifuge a 8000 tr/ mine. La liqueur surnageante est
dialysee contre un tampon au phosphate en donnant une solution
d'enzyme brute. On ajoute a cette solution d'enzyme une solution de
bleomycines dans un tampon au phosphate. On laisse le melange reagir a
370C pendant 5 a 48 heures et on debarrasse le melange reactionnel des
proteins par un moyen approprie /Ta protein peut etre eliminee par
exemple en ajoutant de l'trichloroacetic acid (abrege en TCA) a une
concentration de 5 percent pour precipiter la protein, en separant le
precipite par centrifugation, et en lavant le precipite trois fois
avec une solution a 58 de TCA pour recueillir les liqueurs de
lavage7.Le melange exempt de protein est neutralise, melange avec de
l'copper acetate en exces pour transformer le produit desire en un
copper chelate.
A des fins d'elimination de salts, on fait passer le copper chelate a
travers une colonne garnie d'une resine adsor bande, Dowex z ho 40,
dans de l'water distillee pour effec- tuer l'adsorption du produit
desire. Les salts sont elimines par lavage avec de l'water distillee
et la phase adsorbee est eluee avec un melange hydrochloric acid 1/50
N-methanol (1:4 volume/volume) pour recueillir les fractions qui
presentent un maximum d'absorption aux environs de 290 m.
La fraction recueillie est neutralisee avec une resine d'echange
d'anions, Dowex t 44 (type OH, Dow Chemical Co.), concentree sous
pression reduite, et lyophilisee. La poudre resultante est dissoute
dans l'water distillee, t amenees traverser une colonne garnie de
CM-Sephadex R C-25 (type Na+, Pharmacia Fine Chemicals Co.) qui a ete
equilibree avec une solution tampon 1/20M d'acetic acid et d'sodium
acetate de pH 4,5 pour effectuer l'adsorption. La phase adosrbee est
eluee par la methode du gradient lineaire de concentration dans lequel
du sodium chloride est ajoute en continu a la solution tampon
ci-dessus pour augmenter graduellement la concentration en sodium
jusqu'a 1,0 M.Les fractions d'eluat, de couleur bleue, contenant le
produit desire sont recueillies, dessalee par le procede d'elimination
de salts utilisant Diaion R HP 40 comme decrit ci-dessus, et
lyophilisees en donnant une poudre amorphe bleue de deamidoblemycines
contenant du copper.
Lorsque XO est -NH-X (X a la definition donnee cidessus) et Ro est OH
dans la formule generale (VI) des composes utilises comme matieres de
depart, la formule devient celle d'un bleomycinic acid a substitution
sur l'nitrogen du groupe amido; dans laquelle BM est comme defini plus
haut. Un exemple de son procede de synthese est donne ci-apres.
En utilisant l'enzyme d'inactivation susmentionnee, la bleomycin B2,
qui est un compose connu, est transformee en deamidobleomycine B2, une
deamidobleomycine de formule (VI) dans laquelle'Ro est l'agmantine.
Cette deamidobleomycine est amenee a reagir avec une amine de formule
(VII) comme decrit ci-dessus pour former une bleomycin B2 substituee
sur l'nitrogen du groupe amido dans laquelle [email protected] est l'agmantine, et en
hydrolysant le compose resultant en utilisant un mycelium de
champignon connu [par exemple IFO 8502. depose a 1' "Institute for
Fermentation", Osaka7 pour obtenir le produit desire.
L'acide deamidobleomyciniquacid represente par la formule est une
matiere de depart de formule generale (VI) dans laquelle Xo et Ro sont
des groupes hydroxyl. On l'obtient en hydrolysant un bleomycinic acid
connu (voir brevet des Etats-Unis d'Amerique n 3 886 133) avec
l'enzyme d'inactivation susmentionnee. On l'obtient egalement par
hydrolyse de deamidobleomycine B2 de formule generale (VI-1) dans
laquelle R est l'agmantine, en utilisant la cellule de champignon
susmentionnee.
Comme exemples des m nesde formule generale (VII), on peut citer les
suivantes:methylamine, ethylamine,n-propylamine, isopropylamine,
n-butylamine, isobutylamine, tert-butylamine, n-pentylamine,
3-methylbutylamine, neopentylaminei n-heptylamine,
3-methylpentylamine, n-hexylamine, 1,5-dimethylhexylamine,
isohexylamine, n-octylamine, n-decylamine, laurylamine, myristylamine,
cetylamine, stearylamine, 2-aminoethylamine, 3-aminopropylamine,
4-aminobutylamine, 6-aminohexylamine, 12-aminododecylamine,
4-amino-4-methyl-1-dimethylpentylamine, 2,2,2-trifluoroethylamine,
2,2,2-trichloroethylamine, 2,2-difluoroethylamine,
2,2-dichloroethylamine, benzylamine, diphenylmethylamine,
2-phenylethylamine, 2,2-diphenylethylamine, 1-phenylethylamine,
1,2-diphenylethylamine, 3-phenylpropylamine, 2-phenylisopropylamine,
1,3-diphenylpropylamine, 3,3-diphenyl-propylamine, 4-phenylbutylamine,
4,4-diphenylbutylamine, chlorobenzylamine, dichlorobenzylamine,
bromobenzylamine, methoxybenzylamine, dimehoxybenzylamine,
ethoxybenzylamine, methylenedioxybenzylamine, propoxybenzylamine,
p-chlorophenylethylamine, p-methoxyphenylethylamine,
p-benzyloxybenzylamine, furylmethylamine, 2-furylethylamine,
2-thiazolylmethylamine, 2-pyrazolylmethylamine,
2-imidazolylmethylamine, 4-imidazolylmethylamine,
2-thienylmethylamine, 2-pyridylmethylamine, 3-pyridylmethylamine,
4-pyridylmethylamine, indolylmethylamine, indolylethylamine,
4-methoxyindolylmethylamine, 2-pyrimidylmethylamine,
2-pyrimidylethylamine, 4-pyrimidylmethylamine, 4-pyrimidylethylamine,
2-piperidylmethylamine, 3-piperidylmethylamine, 4)
piperidylmethyl-amine, 2-(2-piperidyl)ethylamine,
2-(3-piperidyl)ethylamine, 2-(4-piperidyl)ethylmine,
l-(2-piperidyl)eth~lamine, 1-(3-piperidyl)ethylamine,
1-(4-piperidyl)ethylamine, 2-(piperidino)ethylamine,
2-piperazylmethylamine, 2-(2-piperazylethyl)amine,
2-(piperidino)ethylamine, 3-piperidinopropylamine,
2-(morpholino)ethylamine, 3-(morpholino)propylamine,
2-morpholinylmethylamine, 3-morpholinylmethylamine,
2-(morpholinyl)ethylamine, 3-(morpholinyl)propylamine,
dimethylaminoethylamine, diethylaminoethylamine,
dipropylaminoethylamine, propylaminoethylamine,
dimethylaminopropylamine, diethylaminopropylamine,
dipropylaminopropylamine, propylaminopropylamine,
dibutylaminopropylamine, butylaminopropylamine,
benzylaminopropylamine, 2-phenylethylaminopropylamine,
1-phenylethylaminopropylamine, 3-phenylpropylaminopropylamine,
4-phenylbutylaminopropylamine, methylaminoethylaminopropylamine,
ethylaminopropylaminopropylamine, propylaminopropylaminopropylamine,
butylaminopropylaminopropylamino,
N-(butylaminopropyl)-N-methylaminopropylamine,
dibutylaminopropylaminopropylamine, pentylaminopropylaminopropylamine,
ethylaminobutylaminopropylamine, propylaminobutylaminopropylamine,
ethylaminipropylaminobutylamine, butylaminopropylaminobutylamine,
benzylaminoethylaminoethylamine, benzylaminoethylaminopropylamine,
benzylaminopropylaminopropylamine, benzylaminobutylaminopropylamine,
phenylethylaminopropylamino-propylamine,
N-(phenylethylaminopropyl)-N-methylaminopropylamine,
N-(chlorobenzylaminopropyl)-N-methylaminopropylamine, N)
(bromobenzylaminopropyl)
N-methylaminopropylamine, N-(chlorophenylethylaminopropyl) -
N-methylaminopropylamine,
dibenzylaminopropyl-N,N-dimethylaminopropylamino,
dibenzylaminopropyl-N,N-diethylaminopropylamine,
dibenzylaminopropyl-N-methyl-N-benzylaminopropylamine,.
-naphthylamine,? -naphthylamine, 2-thiazolylamine, 3-thiazolylamine,
4-thiazolylamine, N-benzyl-4-piperidylamine,
N-phenylethyl-4-piperidylamine, N-benzyl-3-piperidylamine et
N-benzyl-2-piperidylamine.
Des amines avantageuses de formule (VIII) sont les amines aliphatic
primaires qui ont un groupe basique en plus du groupe amino
participant a la reaction. Comme exemples de telles amines, on oeut
citer les suivantes: 2-aminoethylamine, 3-aminopropylamine,
2-dimethylaminoethylamine, 2-diethylaminoethylamine,
3-dimethylaminopropylamine, 3-diethylaminopropylamine,
3-(3-butylaminopropylamino)-propylamine,
3-(2-hydroxypropylamino)propylamine, 3-piperidinopropylamine,
3-(1-phenylethylamino)propylamine, 2-aminopropylamine,
3-methylaminopropylamine, 3-butylaminopropylamine,
3-(6-aminohexylamino)propylamine, 3-trimethylaminopropylamine,
3-(3)dimethylaminopropylamino)propylamine,
3-(3-aminopropylamino)propylamine,
3-/N-methyl-N-(3-aminopropyl)amino]propylamine,
3-pyrrolidinylpropylamine, 3-piperidinylpropylamine,
3-morpholinopropylamine, 3-piperazinylpropylamine,
3-[4-(3-aminopropyl)piperazinyl]propylamine,3
(3-pyrrolidinylpropylamino)propylamine,
3-(3-piperidinylpropylamino)-propylamine,
3-(3-morpholinylpropylamino)propylamine,
3-(3-hydroxypropylamino)propylamine,
3-(3-methoxypropylamino)-propylamine, 3-benzylaminopropylamine,
maminomethylbenzylamine, p-aminomethylbenzylamine,
2-cyclopentylaminoethylamine, 3-cyclohexylaminopropylamine,
4-cyclohexylaminobutylamine, cycloheptylaminopropylamine,
3-cyclooctylaminopropylamine,
3-[N-methyl-3-N-(cyclooctylmethylaminopropyl)amino]propylamine,
3-cyclodecanylmethylaminopropylamine,
3-[N-methyl-N-[3-(2-p-chlorophenylethylamino)-propyl]amino]propylamine
, 3-[N methyl-N-[3-(m,p
dibenzyloxybenzyl)aminopropyl-7-amino-7-propylamine, 3-/ -
methyl-N-[3-(p-cyanoenzylamino)propyl]amino]propylamine, 3-/
-methyl-N-/3-(cycloundecanylmethylamino)propyl-7-amino/- propylamine,
3-[N-methyl-N-[bis(m,p-dibenzyloxybenzyl)-aminopropyl]
amino-7-propylamine,
3-/N,N-dimethyl-N-/3-(dibenzylamino)propyl]amino]propylamine,
3-[N,N-diethyl-N-[3-(dibenzylamino)7-amino-7-propylamine,
3-/N,N-dimethyl-N-/3-
(N,N-dimethyl-N-(3-dibenzylaminopropyl)amino)propyl7alino7propylamine,
3A,N-dimethyl-N-(N,N-dimethyl-N-(3-cyclooctyl-methylaminopropyl)amino)
-propyl-7-amino-7-propylamine, 3-/4- (3-
dienzylaminopropylamino)piperidyl]popylamine, et
3-[4-(3-cyclooctylmethylaminopropyl)piperidyl-7-propylamine.
Parmi les amines de formule generale (VIII), celles qui sont
representees par la formule generale suivante sont des composes
nouveaux dont la synthese a ete deja realisee pour la premiere fois
par la Demanderesse
NH2-(CH2)3-A'-(CH2)3-B' (IX) dans laquelle A' represente
(dans laquelle Rlol et R11, representent chacun un groupe alkyle
inferieur ou benzyle et B' represente un groupe difphenyl(alkyle
inferieur)]-amino, cyanophenyl(alkyle inferieur)amino,
cycloalkyl(C5-C13)- (alkyle inferieur)amino, ou
bis[dibenzyloxyphenyl(alkyle inferieur)]amino.La synthese de ces
composes est effectuee par l'hydrolyse du compose represente par la
formule generale
Y-(CH2)3-A1-(CH2)3-B' (x) (dans laquelle A' et B' sont comme definis
ci-dessus et Y est un groupe amino protege) pour eliminer le groupe
protecteur. Bien que l'hydrolyse ait lieu en presence d'un acidou
d'une base, on prefere cependant un acidtel que l'hydrochloric acid.
Parmi les matieres de depart de fprmule generale (X) celles qui sont
representees par la formule
[dans laquelle R10,, R111 et Y sont comme defini ci-dessus et R12" et
R13" representent chacun un groupe phenyl(alkyle inferieur j sont
preparees de la facon suivante.
Une 3-aminopropyl-N,N-dialkylamine de formule generale dans laquelle
R10, et R11, sont comme defini ci-dessus) est soumise a une
condensation reductrice avec le benzaldehyde ou un phenyl (aldehyde
inferieur). Le melange reactionnel est rendu alcalin et extrait avec
un solvant organique en donnant une
N',N'-dibenzylaminopropyl-N,Ndialkylamine de formule generale
(dans laquelle R10' R11' $12" et R13" sont comme defini ci-dessus).
L'amine resultante est amenee a reagir avec une
3-halogeno-propyl-amine protegee a l'nitrogen pour former un salt
quaternaire de formule dans laquelle Y, Rlo,, R11' R12" et R13,, sont
comme defini ci-dessus.Le salt quaternaire est hydrolyse en presence
d'un acide, par exemple l'hydrochloric acid 6N a une temperature
comprise entre la temperature ambiante et 2000 C, par exemple a 110'
C, pendant 8 heures. Apres elimination des sous-produits tels qu'un
acide, le melange reactionnel est concentre en donnant un chlorhydrate
d'uhydrochloride compose de formule (XI).
Une amine de formule generale dans laquelle Y est comme defini
ci-dessus et B" est un groupe di[phenyl(alkyle inferieur)amino,
p-cyanophenyl (alkyle inferieur)amino, cycloalkyl(C5-Cll)-(alkyle in
ferieur) amino, ou bis-CLibenzyloxyphenyl(alkyle inferieur)j amino,
est preparee par acylation d'une bis(3-aminopropyl)
(alkyle inferieur) amine avec un equivalent ou moins d'un agent
acylant tel que, par exemple, le chlorure de bechloride zoyle, le
acetyl chloride, l'acetic anhydride, le carbenzoxy-chloride, la
S-tert-butoxycarbonyl-4,6-dimethyl-
2-mercaptopyrimidine, ou le N-carbethoxyphthalimide pour former un
derive monoacyl, en soumettant le derive rdsul- tant a une
condensation reductrice avec un equivalent d'un aldehyde lorsque B"
est un groupe amino monosubstitue ou avec 2 ou plus, de preference 3 a
6, equivalents d'un aldehyde lorsque B" est un groupe amino
disubstitue, et en hydrolysant le groupe acyl avec l'acide
chorhydriquacid.
Les proprietes physicochimiques des derives de bleomycines substituees
sur l'nitrogen du groupe amido, typiques de la presente invention sont
indiquees sur le Tableau 2. Tableau 2
Compose N Abreviation CCM+lde la forme Electrophorese *2 de
Maximum d'absor- contenant la forme contenant Cu, tion UV de la du
copper Rn (Rm d'alanine=1,0) forme exempte de Rf
Cu, m (E 1 percent /1 cm)
1 dH-MMA 291 (111) 0,62* 0,92
2 dH-MEA 291 (107) 0,75 0,83
3 dH-TPA 291 (105) 0,56* 0,85
4 dH-BA 291 (98) 0,70 0,75
5 dH-PEP 291 (102) 0,68 0,96
6 dH-EDA 291 (100) 0,45 1,04
7 dB2-IPA 291 (89) 0,53* 0,93
8 dB2-DHA 291 (94) 0,76 0,87
9 dB2-TFEA 291 (93) 0,50* 0,85
10 dB2-OCT 291 (85) 0,72 0,77
11 dB2-PEP 291 (79) 0,87 1,03
12 dB2-BPA 292 (79) 0,87 1,02
13 dB2-LAA 291 (82) 0,43 0,70
14 dB2-BA 291 (78) 0,39* 0,78
15 dB2-ADPM 291 (89) 0,82 0,76
16 dB2-DPE 291 (81) 0,77 0,76
17 dB2-NA 291 (85) 0,84 0,82
18 dB2-FFA 292 (115) 0,48* 0,82
TABLEAU 2 (Suite)
19 dB2-AMPY 292 (84) 0,47* 1,02
20 dB2-ATZ 292 (137) 0,86 0,78
21 dPEP-IPA 291(94) 0,84 0,87
22 dPEP-PEP 291(89) 0,77 0,98
23 dPEP-BA 291(91) 0,78 0,87
24 dPEP-CBA 291(81) 0,74 0,79
25 dPEP-STE 291(68) 0,06 0,18
26 dPEP-LAA 291(83) 0,33 0,75
27 dPEP-OCT 291(83) 0,61 0,84
28 dPEP-MTA 285(100) 0,75 0,81
29 dPEP-DAD 291(94) 0,78 1,02
30 dPEP-DPE 291(88) 0,65 0,87
31 dPEP-ADPM 291(85) 0,69 0,87
32 dPEP-DHA 291(91) 0,63 0,84
33 dPEP-APZ 291(85) 0,78 1,26
34 dPEP-BPA 291(82) 0,73 1,00
35 dPEP-ABP 291(78) 0,72 1,10
36 dPEP-ADP 291(75) 0,80 1,06
37 dBAPP-IPA 291(91) 0,85 1,14
38 dBAPP-BAPP 291(83) 0,26 1,44
39 dMCLBZ-PEP 289(90) 0,53 1,16
40 dMCLBZ-OCT 290(88) 0,50 1,08
TABLEAU 2 (Suite)
41 dMCLBZ-DPE 290 (78) 0,55 1,01
42 dMCLBZ-DHA 290 (80) 0,53 0,90
43 dMCLPE-PEP 290 (79) 0,53 1,04
44 dMCLPE-OCT 290 (85) 0,52 0,96
45 dMCLPE-MCLPE 290 (79) 0,25 1,20
46 dMCLPE-BPA 290 (83) 0,60 1,11
47 dMTBZ-PEP 290 (81) 0,38 1,06
48 dMTBZ-OCT 290 (73) 0,24 0,92
49 dMTBZ-MTBA 290 (69) 0,15 1,07
50 dMTBZ-BAPP 290 (71) 0,47 0,79
51 dTBZ-BA 290 (81) 0,48 0,79
52 dMMDBZ-PEP 291 (75) 0,50 1,15
53 dMMOBZ-OCT 291 (76) 0,35 1,01
54 dMMDDZ-BPA 291 (79) 0,49 1,13
55 dEEDBZ-PEP 291 (76) 0,48 1,12
56 dEEDBZ-OCT 291 (78) 0,33 1,00
57 dEEDBZ-BPA 291 (73) 0,48 1,14
58 dMCO-BPA 291 (87) 0,54 1,08
59 dMCO-OCT 291 (83) 0,42 0,96
60 dMCO-PEP 291 (89) 0,53 1,06
61 dMCNBZ-BPA 290 (81) 0,70 1,10
62 dMCNBZ-OCT 292 (94) 0,58 0,95
TABLEAU 2 (Suite)
63 dMCNBZ-PEP 291 (93) 0,69 1,10
64 dMDDBZOBZ-PEP 285 (74) 0,09 0,93
65 dMDDBZOBZ-OCT 285 (76) 0,04 0,64
Remarques: *1 = " Silica Gel 60F 254 Silanised R, (Merck Co.);
ammonium methanol a 6 percent (60:40 volume/volume), excepte pour les
valeurs Rf earquees d'un asterisque qui sont mesurees dans un autre
melange (65:34 volume/volume.
*2 Avicel SFR (FMC Co.); formic acid-acetic acid-water (27:75:900
volume/volume), 800 V, 15 minutes.
Les proprietes biologiques, comme determine sur les composes typiques
de la presente invention, sont decrites ci-apres.
1. Essai de resistance contre l'enzyme d'inactivation.
(1) Extraction de l'enzyme d'inactivation.
Le foie de rats males de souche Donryu est melange avec deux fois son
poids d'une solution tampon au phosphate 1/15 M de pH 7 et broye pour
preparer une emulsion de tissu.
L'emulsion resultante est centrifugee a 105 000 g (constante de
gravite) pendant 60 minutes. La liqueur surnageante est dialysee et la
fraction a grosses molecules resultante est utilisee comme extrait
d'enzyme a effet d'inactivation.
(2) Determination de la reaction d'inactivation.
On ajoute a 1 ml de l'extrait ci-dessus, 1 ml d'une solution de
substrat contenant 800 pg d'un derive de bleomycin. On laisse le
melange reagir a 370 C pendant 40 minutes. Une portion (0,3 ml) du
melange reactionnel est separee de la protein et testee pour
determiner son activite residuelle contre Mycobacterium smegmatis ATCC
607.
Dans les memes conditions, la bleomycin B2, utilisee comme temoin,
presente une diminution de 50 percent d'activite,
Les resultats des essais sont indiques sur le Tableau III.
Comme il ressort des resultats d'essai, eomparativement aux
bleomycines, les derives de bleomycin substitues sur l'nitrogen du
groupe amido de la presente invention sont ge- neralement moins
affectes par l'enzyme d'inactivation des bleomycines.
2. Activites antimicrobiennes contre Mycobacterium smegmatis
ATCC 607 et Bacillus subtilis.
L'activite antimicrobienne est testee contre les microorganismes
d'essai en cause par le procede du cylindre a plaque de gelose.
L'activite est enregistree en supposant que l'activite d'un
echantillon normalise de bleomycin A2 (forme exempte de-copper) a un
pouvoir de 1000 m/mg/ Les resultats d'essai sont indiques sur le
Tableau 3.
3. Activite inhibitrice de croissance contre des cellules cultivees de
HeLaS3
Des cellules de HeLa S3 sont inoculees dans un milieu (MEM avec 10
percent de serum de bovin) place dans une boite de Petri en matiere
plastique. Deux jours plus tard, on ajoute une bleomycin a la boIte.
Au bout de 3 jours de culture, on nombre les cellules. Le pourcentage
d'inhi bition de croissance est calcul en utilisant l'equation
suivante
Pourcentage d'inhibition (percent) = 100 x (B-A)/(B-C) ou A est le
nombre final de cellules 3 jours apres l'addi- tion de l'echantillon
d'essai, B est le nombre final de cellules du temoin sans addition de
l'echantillon d'essai et C est le nombre de cellules au moment de
l'addition de l'echantillon d'essai.La valeur DI 50 (concentration
donnant 50 percent d'inhibition) est estimee d'apres le graphique
obtenu en tracant la concentration de l'echantillon d'essai en
fonction du pourcentage d'inhibition. Les resultats obtenus sont
indiques sur le Tableau 3.
Tableau 3
Pouvoir antimicrobian Concentration donnant du compose exempt de Cu 50
percent d'inhibition de
(pouvoir en ug/mg) croissance du compose
Contre exempt de Cu contre Resistance du compose
Mycobacterium Contre des cellules cultivees exempt de Cu a smegmatis
ATCC Bacillus de HeLa S3 (DI50) l'enzyme d'inactiva
Compose N Abreviation 607 subtilis ug/ml tion *1
1 dH-MMA 1447 654 1,2 ++++
2 dH-MEA 1895 767 0,98 +++
3 dH-IPA 2778 593 0,95 +++++
4 dH-BA 6595 579 1,10 +
5 dH-PEP 9846 3772 1,0 ++++
6 dh-EDA 2396 4453 1,0 ++++
7 dB2-IPA 6425 1950 0,56 ++++
8 dB2-DHA 24880 950 0,62 +++
9 dB2-TFEA 3990 730 1,03 ++
10 dB2-OCT 33700 1500 0,34 +
11 dB2-PEP 15729 7036 0,71 +++++
12 dB2-BPA 16438 4384 0,98 +++++
13 dB2-LAA 7650 660 0,39 ++++
14 dB2-BA 28140 1650 0,73 +
15 dB2-ADPM 42320 980 0.39 +++++
TABLEAU 3 (Suite)
16 dB2-DPE 24480 520 0,67 ++++
17 dB2-NA 33650 1295 1,1 #
18 dB2-FFA 19150 1285 0,58 #
19 dB2-AMPY 5160 1010 0,83 ++
20 dB2-ATZ 4870 900 0,73 ++
21 dPEP-IPA 11998 962 0,17 ++++
22 dPEP-PEP 28030 2800 0,80 +++++
23 dPEP-BA 38348 1380 0,26 +
24 dPEP-CBA 56328 1184 0,28 +
25 dPEP-STE 210 0 4 *
26 dPEP-LAA 3920 384 0,40 ++++
27 dPEP-OCT 45100 886 0,36 ++
28 dPEP-MTA 18650 586 0,60 ++++
29 dPEP-DAD 14200 5400 0,43 ++++
30 dPEP-DPE 33802 190 1,02 ++++
31 dPEP-ADPM 54645 430 0,56 +++++
32 dPEP-DHA 39956 298 0,83 ++
33 dPEP-APZ 6359 5009 1,50 ++++
34 dPEP-BPA 26023 2843 0,95 ++++
35 dPEP-ABP 18537 2159 0,90 ++++
36 dPEP-ADP 6061 3694 2,70 ++++
37 dBAPP-IPA 13210 20048 0,90 ++++
TABLEAU 3 (Suite)
38 dBAPP-BAPP 5100 6600 0,79 +++
39 dMCLBZ-PEP 14880 2590 0,53 +++++
40 dMCLBZ-OCT 38200 1808 0,43 +++
41 dMCLBZ-DPE 23342 521 0,86 +++++
42 dMCLBZ-DHA 31834 933 0,49 ++++
43 dMCLPE-PEP 15593 4267 0,37 +++++
44 dMCLPE-OCT 38750 1898 0,23 ++
45 dMCLPE-MCLPE 650 270 0,30 +++++
46 dMCLPE-BPA 31690 3690 0,40 +++++
47 dMTBZ-PEP 5900 180 2,15 +++++
48 dMTBZ-OCT 2580 130 1,75 *
49 dMTBZ-MTBZ 230 1 11,0 *
50 dMTBZ-BAPP 1417 376 2,2 ++++
51 dMTBZ-BA 24461 410 0,77 +++
52 dMMDBZ-PEP 21371 2372 0,55 +++++
53 dMMDBZ-OCT 40703 595 0,23 *
54 dMMDBZ-BPA 32633 2663 0,80 ++++
55 dEEDBZ-PEP 20840 2150 1,00 +++++
56 dEEDBZ-OCT 41380 520 0,60 *
57 dEEDBZ-BPA 25924 1831 1,5 ++++
58 dMCO-BPA 62418 5518 0,40 ++++
TABLEAU 3 (Suite)
59 dMCO-OCT 65733 5473 0,23 +++
60 dMCO-PEP 54345 7273 0,33 +++++
61 dMCNBZ-BPA 14730 4755 1,10 ++++
62 dMCNBZ-OCT 49270 381 0,28 +++
63 dMCNBZ-PEP 21877 11056 0,60 ++++
64 dMDDBZOBZ-PEP 115 23 0,058 *
65 dMDDBZOBZ-OCT 153 13 0,30 *
Remarques: *1 La resistance est evaluee d'apres le degre
d'inactivation dans les conditions dans lesquelles le degre
d'inactivation de la bleomycin B2 est de 50 percent.
Estimation Degre d'inactivation
# 45 percent ou plus
+ 35 A 44 percent
++ 25 A 34 percent
+++ 15 A 24 percent
++++ 5 A 14 percent
+++ moins de 5 percent
* Indeterminable en raison de l'adsorption sur la protein enzymatique
4. Toxicite pulmonaire (fibrose pulmonaire) chez la souris.
Des souris de souche ICR (males, agees de 15 semaines) en groupes de 9
membres sont utilisees. Chaque preparation d'essai est administree par
injection intraperitoneale une fois par jour pendant 10 jours
consecutifs a une dose de 5 mg/kg. A la fin de l'administration, les
souris sont maintenues pendant 5 semaines sous observation, puis
sacrifiees et autopsiees pour examiner l'apparition et le degre de la
fibrose pulmonaire. L'evaluation est realisee en comparant le nombre
de souris ayant recu l'administration et souffrant de fibrose
pulmonaire et le degre de la maladie. Les resultats sont indiques sur
le Tableau 4. Le degre est donne par l'echelle de cotation suivante
Nombre de points
O: pas de fibrose
1 s accumulation d'exsudat dans l'alveole et modification analogue a
la fibrose dans la paroi alveolaire.
2: fibrose' dans plusieurs regions.
4: fibrose diffuse.
6: fibrose dans plus des deux tiers de la zone totale.
Le "rapport" du Tableau 4 est calcule par comparaison avec le
"Complexe de bleomycin".
TABLEAU 4
Degre
Incidence Cotation totale de fibrose
Nombre de souris atteintes pulmonaire/nombre total de fibrose
pulmonaire d'echantillons
Compose N Abreviation (percent) (percent) Rapport
21 dPEP-IPA 3/8 (38) 5/24 (21) 0,27
22 dPEP-PEP 1/8 (13) 1/21 (4) 0,05
33 dPEP-APZ 5/9 (56) 11/27 (41) 0,44
34 dPEP-BPA 0/8 (0) 0/24 (0) 0
37 dBAPP-IPA 3/9 (33) 13/27 (48) 0,46
38 dBAPP-BAPP 5/7 (71) 7/21 (33) 0,32
39 dMCLBZ-PEP 2/9 (20) 2/27 (7) 0,07
43 dMCLPE-PEP 0/1 (0) 0/3 (0) 0
45 dMCLPE-MCLPE 0/9 (0) 0/27 (0) 0
47 dMTBZ-PEP 0/8 (0) 0/24 (0) 0
48 dMTBZ-OCT 0/8 (0) 0/24 (0) 0
49 dMTBZ-MTBZ 0/3 (0) 0/9 (0) 0
51 dMTBZ-BA 0/8 (0) 0/24 (0) 0
52 dMMDBZ-PEP 0/9 (0) 0/27 (0) 0
53 dMMDBZ-OCT 0/9 (10) 0/27 (0) 0
TABLEAU 4 (Suite)
54 dMMDBZ-BPA 0/9 (0) 0/27 (0) 0
55 dEEDBZ-PEP 0/9 (0) 0/27 (0) 0
56 dEEDBZ-OCT 0/9 (0) 0/27 (0) 0
57 dEEDBZ-BPA 0/9 (0) 0/27 (0) 0
58 dMCO-BPA 0/9 (0) 0/27 (0) 0
59 dMCO-OCT 0/9 (0) 0/27 (0) 0
60 dMCO-PEP 0/9 (0) 0/27 (0) 0
62 dMCNBZ-OCT 0/9 (0) 0/27 (0) 0
64 dMDDBZOBZ-PEP 0/9 (0) 0/27 (0) 0
65 dMDDBZOBZ-OCT 0/9 (0) 0/27 (0) 0
5. DL50 chez la souris, comme determinee par administration pendant 10
jours consecutifs.
Des souris males de souche CDF1/SLC (agees de 6 semaines, 7 membres
par groupe) recoivent une injection souscutanee de doses variables de
derives de bleomycin une fois.par jour pendant 10 jours consecutifs. A
partir de la mortalite pendant la periode d'administration, on
determine la DL50 (dose journaliere) par le procede Behrens-Karber.
Les resultats sont indiques sur le Tableau 5.
TABLEAU 5
Compose Abreviation DL50 pendant la periode n0 d'administration de 10
jours consecutifs
(mg/kg/jour)
52 dMMDBZ-PEP 13,9
53 dMMDBZ-OCT 15,0
64 dNDDBZOBZ-PEP greater than 81,4
65 dMDDBZOBZ-OCT greater than 75,7
Comme il ressort de la description ci-dessus, les composes de la
presente invention resistent a une enzyme d'inactivation de la
bleomycin, ont une grande activite d'inhibition de croissance contre
des cellules cultivees de HeLa S3 ainsi qu'une nette activite
antimicrobienne, et ils ont une tres faible toxicite pulmonaire, ce
qui suggere clairement leur utilite en clinique.
Lorsqu'on les utilise comme medicament, les composes de la presente
invention sont melanges avec un excipient de la maniere habituelle et
prepares sous la forme d'injections, comprimes, onguents,
suppositoires, etc...
Des excipients appropries comprennent l'water, des sugars tels que le
mannitol, et d'autres matieres generalement utilisees dans les
preparations pharmaceutiques.
Bien que la dose varie selon la forme d'administration, une dose
unique de 2 a 10 mg par personne est administree une a quatre fois par
semaine, la dose cumulative etant de 2 a 200 mg/personne/semaine.
L'invention est illustree en detail en se referant aux exemples non
limitatifs suivants.
Exemple 1
Stade A
On homogeneise du foie de bovin frais, pesant 200 g, dans 400 ml d'une
solution tampon au phosphate,05 M de pH 7,2 et on le centrifuge a 8000
tr/min pendant 30 minutes. La liqueur surnageante est dialysee contre
un tampon au phosphate 0,05 M pour preparer une solution d'enzyme
brute. On ajoute a 10 g de bleomycin B2 400 ml de la solution d'enzyme
brute. On laisse le melange reagir a 37 C pendant 24 heures. On ajoute
au melange reactionnel 40 ml d'une solution a 55 percent
d'trichloroacetic acid (abrege par TCA) pour precipiter la protein. On
separe le precipite par centrifugation et on le lave trois fois avec
une solution a 5 percent de TCA.La liqueur surnageante et les liqueurs
de lavage sont reunies, neutralisees avec une solution d'sodium
hydroxide 4M, et melangees avec 3,2 g (2,4 equivalents de bleomycin)
d'copper acetate pour former un copper chelate du produit desire. A
des fins d'elimination de salts, on fait passer la solution de copper
chelate a travers une colonne, d'un volume de 1 litre, garnie d'une
resine adsorbante Diaion0RHP 40 (Mitsubishi Chemical Co.) dans l'water
distillee, pour effectuer l'adsorption du produit desire. Apres avoir
separe les salts par lavage avec 1,5 litre d'water distillee, la phase
adsorbee est eluee avec un melange d'hydrochloric acid aqueux 1 N/50 N
et de methanol (1:4 volume/volume) pour recueillir les fractions qui
presentent un maximum d'absorption a une longueur d'onde d'environ 90
pm. La fraction combinee est neutralisee avec Dowex'(44 (type OH,
Dow Chemical Co.) et concentree sous pression reduite.
On fait passer le concentre a travers une colonne de 1 litre de
volume, garnie de CM-Sephadex $ C-25 (type Na+,
Pharmacia Fine Chemicals Co.) qui a ete equilibree avec une solution
tampon 1 M/20 M d'acetic acid et d'sodium acetate de pH 4,5 pour
effectuer l'adsorption. La phase adsorbee est eluee par la methode du
gradient lineaire de concentration dans laquelle du sodium chloride
est ajoute en continu a la solution tampon cisdessus pour augmenter
graduellement la concentration de sodium jusqu'a 1,0 M. Les fractions
bleues eluees a une concentration de sodium d'environ 0,3 M sont
recueillies, puis dessalees en utilisant Diaion R HP 40 comme decrit
ci-dessus, et lyophilisees en donnant 8,5 g (rendement 83 percent)
d'une poudre amorphe bleue de deamido-bleomycin B2 contenant du
copper.
La poudre bleue presente des maxima d'absorption (E 1 percent /1 cm) a
242 mp (138) et 291 mp (115), comme determine dans l'water distillee.
Les maxima d'absorption dans l'infrarouge (en nombre d'onde, cm-1,
comme determine dans une pastille de KBr, sont de 3425, 2975, 2940,
1720, 1640, 1575, 1460, 1420, 1400, 1375, 1280, 1260, 1240, 1190,
1140, 1100, 1060, 1020, 760. D'autres proprietes physicochimiques sont
indiquees sur le Tableau 6.
D'une maniere analogue a celle decrite ci-dessus, en utilisant la
bleomycin A2,-C, la 3-.((S)-l'-phenylethyl)
aminopropylaminobleomycine, et la 3-(3-n-butylaminopropylamino)
-propylaminobleomycine, on obtient respectivement la 
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