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[5][_]
Molecule
(116/ 529)
[6][_]
water
(50)
[7][_]
acetic acid
(25)
[8][_]
SOMATOstatin
(24)
[9][_]
dimethylformamide
(24)
[10][_]
sulfate
(19)
[11][_]
ethylmorpholine
(19)
[12][_]
ethyl acetate
(18)
[13][_]
potassium
(17)
[14][_]
ethyl ether
(17)
[15][_]
TFA
(15)
[16][_]
L-Phe
(14)
[17][_]
hydroxybenzotriazole
(13)
[18][_]
(L)-Cys
(11)
[19][_]
sodium
(11)
[20][_]
carbonate
(10)
[21][_]
(L)-Trp
(9)
[22][_]
potassium sulfate
(9)
[23][_]
TAURINE
(7)
[24][_]
GLUCAGON
(7)
[25][_]
L-Asn
(6)
[26][_]
butanol
(6)
[27][_]
L-Lys
(5)
[28][_]
L-Thr
(5)
[29][_]
acetate
(5)
[30][_]
Cl
(5)
[31][_]
H-Phe-Phe-OCH3
(5)
[32][_]
isopropanol
(5)
[33][_]
pentane
(5)
[34][_]
DES
(4)
[35][_]
ALA-GLY
(4)
[36][_]
hydrochloride
(4)
[37][_]
Phe-Phe-OH
(4)
[38][_]
CH3CO2H
(4)
[39][_]
tetrahydrofuran
(4)
[40][_]
pyridine
(4)
[41][_]
MeOH
(4)
[42][_]
Phe-OMe
(4)
[43][_]
anisole
(4)
[44][_]
nitrogen
(4)
[45][_]
L-Ser
(3)
[46][_]
D-Cys
(3)
[47][_]
ammonium acetate
(3)
[48][_]
formic acid
(3)
[49][_]
HBR
(3)
[50][_]
Boc-Phe-ONp
(3)
[51][_]
hexane
(3)
[52][_]
dicyclohexylcarbodiimide
(3)
[53][_]
acetone
(3)
[54][_]
ethanedithiol
(3)
[55][_]
(D)-Trp
(2)
[56][_]
-Cys
(2)
[57][_]
phosphate
(2)
[58][_]
silver
(2)
[59][_]
trifluoroacetic acid
(2)
[60][_]
potassium ferricyanide
(2)
[61][_]
chloride
(2)
[62][_]
Me
(2)
[63][_]
precipite blanc
(2)
[64][_]
sodium chloride
(2)
[65][_]
Boc-Phe
(2)
[66][_]
Boc-Asn-Phe
(2)
[67][_]
1'-ethyl ether
(2)
[68][_]
dioxane
(2)
[69][_]
dicyclohexylurea
(2)
[70][_]
phosphoric anhydride
(2)
[71][_]
Boc-Thr
(2)
[72][_]
methylene chloride
(2)
[73][_]
ethyl alcohol
(2)
[74][_]
magnesium sulfate
(2)
[75][_]
Trp-ONp
(2)
[76][_]
acetic acid trichloride
(2)
[77][_]
CF
(1)
[78][_]
-NH-CH2-CH2-SO2-
(1)
[79][_]
D-Trp
(1)
[80][_]
-CH2
(1)
[81][_]
SO2
(1)
[82][_]
maleate
(1)
[83][_]
citrate
(1)
[84][_]
benzoate
(1)
[85][_]
succinate
(1)
[86][_]
malate
(1)
[87][_]
ascorbate
(1)
[88][_]
mercury
(1)
[89][_]
nitrate
(1)
[90][_]
hydrogen sulfide
(1)
[91][_]
benzyloxycarbonyl-taurine
(1)
[92][_]
Phe-Phe
(1)
[93][_]
Br
(1)
[94][_]
CII3
(1)
[95][_]
trifluoroacetate
(1)
[96][_]
OMe
(1)
[97][_]
phenylalanine methyl ester
(1)
[98][_]
phenylalanine hydrochloride methyl ester
(1)
[99][_]
benzene
(1)
[100][_]
hydrobromic acid
(1)
[101][_]
Boc-Asn-ONp
(1)
[102][_]
HOBT
(1)
[103][_]
H-Asn-Phe
(1)
[104][_]
Boc-Ala-
(1)
[105][_]
Gly-O
(1)
[106][_]
OH
(1)
[107][_]
butoxycarbonyl-serine
(1)
[108][_]
magnesium
(1)
[109][_]
H-Phe-Thr-Ser-Cys
(1)
[110][_]
Boc-Trp-Onp
(1)
[111][_]
methyl cyanide
(1)
[112][_]
barium hydroxide
(1)
[113][_]
silver nitrate
(1)
[114][_]
ammonia
(1)
[115][_]
Phe-Phe-O
(1)
[116][_]
Boc-Phe-Phe-OMe
(1)
[117][_]
Boc-Ala-Gly-O
(1)
[118][_]
Boc-Cys-ONp
(1)
[119][_]
propanol
(1)
[120][_]
Boc-
(1)
[121][_]
Se
(1)
[122][_]
Physical
(270/ 364)
[123][_]
20 minutes
(10)
[124][_]
100 ml
(6)
[125][_]
5 percent
(6)
[126][_]
100 percent
(5)
[127][_]
2 g
(5)
[128][_]
4 g
(5)
[129][_]
20 ml
(4)
[130][_]
de 100 percent
(4)
[131][_]
15 minutes
(3)
[132][_]
30 minutes
(3)
[133][_]
13 g
(3)
[134][_]
15 ml
(3)
[135][_]
pH = 3,5
(3)
[136][_]
13 ml
(3)
[137][_]
50 ml
(3)
[138][_]
6 ml
(3)
[139][_]
6 g
(3)
[140][_]
50 percent
(3)
[141][_]
250 ml
(3)
[142][_]
Rf: 0,77
(3)
[143][_]
4,18 g
(3)
[144][_]
Rf: 0,43
(2)
[145][_]
14 g
(2)
[146][_]
1 percent
(2)
[147][_]
17 g
(2)
[148][_]
Rf: 0,33
(2)
[149][_]
Rf: 0,65
(2)
[150][_]
5 ml
(2)
[151][_]
60 ml
(2)
[152][_]
2,34 g
(2)
[153][_]
15 g
(2)
[154][_]
3,4 g
(2)
[155][_]
2,70 g
(2)
[156][_]
200 ml
(2)
[157][_]
38,5 g
(2)
[158][_]
300 ml
(2)
[159][_]
Rf: 0,60
(2)
[160][_]
90 ml
(2)
[161][_]
2,52 ml
(2)
[162][_]
Rf: 0,50
(2)
[163][_]
Rf: 0,57
(2)
[164][_]
130 ml
(2)
[165][_]
Rf: 0,36
(2)
[166][_]
57 ml
(2)
[167][_]
de 98 percent
(2)
[168][_]
Rf: 0,58
(2)
[169][_]
Rf: 0,30
(2)
[170][_]
Rf: 0,61
(2)
[171][_]
3,8 g
(2)
[172][_]
3,7 g
(2)
[173][_]
2 ml
(2)
[174][_]
1,3 g
(2)
[175][_]
0.1-10 mg
(1)
[176][_]
4 minutes
(1)
[177][_]
2 litres
(1)
[178][_]
16 g
(1)
[179][_]
6,3 g
(1)
[180][_]
12,73 g
(1)
[181][_]
89 percent
(1)
[182][_]
Rf: 0,53
(1)
[183][_]
17,9 g
(1)
[184][_]
30,4 ml
(1)
[185][_]
33 percent
(1)
[186][_]
14,28 g
(1)
[187][_]
de 91,4 percent
(1)
[188][_]
14,5 g
(1)
[189][_]
5,51 g
(1)
[190][_]
8,7 ml
(1)
[191][_]
16,80 g
(1)
[192][_]
81 percent
(1)
[193][_]
13,97 g
(1)
[194][_]
84 ml
(1)
[195][_]
Rf: 0,13
(1)
[196][_]
9,66 g
(1)
[197][_]
255 ml
(1)
[198][_]
59,5 ml
(1)
[199][_]
pH 3,5
(1)
[200][_]
78,2 percent
(1)
[201][_]
65 ml
(1)
[202][_]
12,58 g
(1)
[203][_]
de 94,7 percent
(1)
[204][_]
12,5 g
(1)
[205][_]
8,35 g
(1)
[206][_]
70,5 percent
(1)
[207][_]
Rf: 0,44
(1)
[208][_]
12,8 g
(1)
[209][_]
14,37 g
(1)
[210][_]
Rf:0,40
(1)
[211][_]
91 ml
(1)
[212][_]
7,8 g
(1)
[213][_]
4,29 ml
(1)
[214][_]
97,3 percent
(1)
[215][_]
Rf: 0,62
(1)
[216][_]
70 ml
(1)
[217][_]
13,86 g
(1)
[218][_]
93 percent
(1)
[219][_]
Rf: 0,38
(1)
[220][_]
12,55 g
(1)
[221][_]
de 83 ml
(1)
[222][_]
1,75 g
(1)
[223][_]
2,88 ml
(1)
[224][_]
de 97,1 percent
(1)
[225][_]
Rf: 0,28
(1)
[226][_]
700 g
(1)
[227][_]
6 l
(1)
[228][_]
608 g
(1)
[229][_]
800 ml
(1)
[230][_]
500 g
(1)
[231][_]
Rf: 0,69
(1)
[232][_]
5,78 g
(1)
[233][_]
de 1 ml
(1)
[234][_]
10 minutes
(1)
[235][_]
150ml
(1)
[236][_]
5,15 g
(1)
[237][_]
1,15 g
(1)
[238][_]
2,05 g
(1)
[239][_]
2,47 g
(1)
[240][_]
5,3 g
(1)
[241][_]
de 80 percent
(1)
[242][_]
Rf: 0,63
(1)
[243][_]
de 97 percent
(1)
[244][_]
6,80 g
(1)
[245][_]
3,79 g
(1)
[246][_]
7,5 g
(1)
[247][_]
7,81 g
(1)
[248][_]
4,64 g
(1)
[249][_]
8,22 g
(1)
[250][_]
de 90 percent
(1)
[251][_]
Rf: 0,75
(1)
[252][_]
de 2,03 g
(1)
[253][_]
10,29 g
(1)
[254][_]
6,2 g
(1)
[255][_]
13,075 g
(1)
[256][_]
2,5 ml
(1)
[257][_]
5,11 g
(1)
[258][_]
120 ml
(1)
[259][_]
de 100 ml
(1)
[260][_]
12,6 g
(1)
[261][_]
Rf: 0.50
(1)
[262][_]
13,3 g
(1)
[263][_]
13,4 g
(1)
[264][_]
8,16 g
(1)
[265][_]
2,16 g
(1)
[266][_]
1,62 g
(1)
[267][_]
11,57 g
(1)
[268][_]
de 91 percent
(1)
[269][_]
Rf: 0,85
(1)
[270][_]
11,5 g
(1)
[271][_]
11,33 g
(1)
[272][_]
5 g
(1)
[273][_]
125 ml
(1)
[274][_]
89 ml
(1)
[275][_]
pH 7
(1)
[276][_]
55 percent
(1)
[277][_]
Rf: 0,32
(1)
[278][_]
10 ml
(1)
[279][_]
0,2 N
(1)
[280][_]
pH = 6,9
(1)
[281][_]
950 g
(1)
[282][_]
3750 g
(1)
[283][_]
1,46 g
(1)
[284][_]
194,7 mg
(1)
[285][_]
Rf: 0,21
(1)
[286][_]
75 g
(1)
[287][_]
2,5 N
(1)
[288][_]
60,24 g
(1)
[289][_]
21,1 g
(1)
[290][_]
37,37 g
(1)
[291][_]
de 89 percent
(1)
[292][_]
Rf: 0,5
(1)
[293][_]
37 g
(1)
[294][_]
370 ml
(1)
[295][_]
148 ml
(1)
[296][_]
31 g
(1)
[297][_]
de 86 percent
(1)
[298][_]
Rf: 0,31
(1)
[299][_]
27,55 g
(1)
[300][_]
de 98,6 percent
(1)
[301][_]
40 ml
(1)
[302][_]
6,5 ml
(1)
[303][_]
5,7 g
(1)
[304][_]
1,5 g
(1)
[305][_]
8,05 g
(1)
[306][_]
Rf: 0,67
(1)
[307][_]
8 g
(1)
[308][_]
de 8 g
(1)
[309][_]
Rf: 0,26
(1)
[310][_]
7 g
(1)
[311][_]
71 percent
(1)
[312][_]
6,36 g
(1)
[313][_]
de 7 g
(1)
[314][_]
5,36 g
(1)
[315][_]
30 ml
(1)
[316][_]
2,52 g
(1)
[317][_]
0,86 g
(1)
[318][_]
5,98 g
(1)
[319][_]
Rf: 0,49
(1)
[320][_]
2,9 g
(1)
[321][_]
0,92 g
(1)
[322][_]
0,26 ml
(1)
[323][_]
0,2 g
(1)
[324][_]
2,42 g
(1)
[325][_]
de 54,1 percent
(1)
[326][_]
2,19 g
(1)
[327][_]
de 99 percent
(1)
[328][_]
48 g
(1)
[329][_]
de 1,48 g
(1)
[330][_]
0,670 g
(1)
[331][_]
de 52 percent
(1)
[332][_]
20 g
(1)
[333][_]
160 ml
(1)
[334][_]
26 ml
(1)
[335][_]
19 g
(1)
[336][_]
21,84 g
(1)
[337][_]
de 78,6 percent
(1)
[338][_]
61 ml
(1)
[339][_]
1,16 ml
(1)
[340][_]
1,22 g
(1)
[341][_]
de 72 percent
(1)
[342][_]
Rf: 0,68
(1)
[343][_]
de 14 ml
(1)
[344][_]
1,4 ml
(1)
[345][_]
Rf: 0,48
(1)
[346][_]
3,10 g
(1)
[347][_]
de 64 percent
(1)
[348][_]
de 94,8 percent
(1)
[349][_]
Rf: 0,76
(1)
[350][_]
de 5 s
(1)
[351][_]
3,07 g
(1)
[352][_]
de 3,6 g
(1)
[353][_]
Rf: 0,59
(1)
[354][_]
35 ml
(1)
[355][_]
2,57 g
(1)
[356][_]
1,05 g
(1)
[357][_]
97 percent
(1)
[358][_]
21 ml
(1)
[359][_]
Rf: 0,09
(1)
[360][_]
3,69 g
(1)
[361][_]
de 78 percent
(1)
[362][_]
4,3 g
(1)
[363][_]
de 4,3 g
(1)
[364][_]
98,4 percent
(1)
[365][_]
Rf: 0,18
(1)
[366][_]
de 3,2 g
(1)
[367][_]
2,91 g
(1)
[368][_]
de 83 percent
(1)
[369][_]
Rf: 0,83
(1)
[370][_]
99,8 percent
(1)
[371][_]
4,16 g
(1)
[372][_]
88,7 percent
(1)
[373][_]
Rf: 0,87
(1)
[374][_]
98,9 percent
(1)
[375][_]
Rf: 0,14
(1)
[376][_]
4,1 g
(1)
[377][_]
90 percent
(1)
[378][_]
Rf: 0,82
(1)
[379][_]
98 percent
(1)
[380][_]
3,75 g
(1)
[381][_]
2,12 g
(1)
[382][_]
3,5 g
(1)
[383][_]
de 77,9 percent
(1)
[384][_]
Rf: 0,66
(1)
[385][_]
Rf: 0,72
(1)
[386][_]
de 2 g
(1)
[387][_]
Rf: 0,51
(1)
[388][_]
0,843 g
(1)
[389][_]
Rf: 0,74
(1)
[390][_]
Rf: 0.62
(1)
[391][_]
10 mg
(1)
[392][_]
220 g
(1)
[393][_]
Generic
(22/ 101)
[394][_]
acids
(34)
[395][_]
ethers
(14)
[396][_]
PEPTIDE
(11)
[397][_]
amino acid
(6)
[398][_]
ADDITION salts
(4)
[399][_]
salts
(4)
[400][_]
alcohols
(4)
[401][_]
amines
(3)
[402][_]
metal
(3)
[403][_]
cysteines
(3)
[404][_]
DIPEPTIDE
(2)
[405][_]
thiol
(2)
[406][_]
tripeptide
(2)
[407][_]
tetradecapeptide
(1)
[408][_]
sulfonamide
(1)
[409][_]
carboxylic acid
(1)
[410][_]
2-[4-(phenylazo)-benzylsulfonyl]ethyl-ester
(1)
[411][_]
lysines
(1)
[412][_]
disulfide
(1)
[413][_]
tetrapeptide
(1)
[414][_]
sulfide
(1)
[415][_]
sugar
(1)
[416][_]
Gene Or Protein
(15/ 29)
[417][_]
GROWTH HORMONE
(6)
[418][_]
Etre
(5)
[419][_]
INSULIN
(4)
[420][_]
DANS
(2)
[421][_]
Pyri
(2)
[422][_]
THR
(1)
[423][_]
CES
(1)
[424][_]
Aminopeptidases
(1)
[425][_]
Carboxypeptidases
(1)
[426][_]
IFA
(1)
[427][_]
Cl3
(1)
[428][_]
L805
(1)
[429][_]
TIIF
(1)
[430][_]
TIF
(1)
[431][_]
CMM
(1)
[432][_]
Substituent
(10/ 23)
[433][_]
acetamidomethyl
(6)
[434][_]
Boc
(4)
[435][_]
ethyl
(3)
[436][_]
methyl
(3)
[437][_]
benzyloxycarbonyl
(2)
[438][_]
2-(methylsulfonyl)-ethoxycarbonyl
(1)
[439][_]
carboxyl
(1)
[440][_]
tert-butyl-oxycarbonyl-amino(Boc)
(1)
[441][_]
oxy
(1)
[442][_]
amino
(1)
[443][_]
Chemical Role
(3/ 10)
[444][_]
hormones
(8)
[445][_]
INHIBITORS
(1)
[446][_]
inhibitory
(1)
[447][_]
Organism
(3/ 3)
[448][_]
animal
(1)
[449][_]
rats
(1)
[450][_]
dais
(1)
[451][_]
Disease
(2/ 2)
[452][_]
Sugar Diabetes
(1)
[453][_]
Toxicity
(1)
[454][_]
Polymer
(1/ 2)
[455][_]
Sephadex
(2)
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Publication
_________________________________________________________________
Number FR2522656A1
Family ID 5900238
Probable Assignee Sanofi Sa
Publication Year 1983
Title
_________________________________________________________________
FR Title ANALOGUES DE LA SOMATOstatin SUBSTITUES PAR LA TAURINE, ET
MEDICAMENTS, UTILES NOTAMMENT POUR LE TRAITEMENT DU DIABETE, EN
CONTENANT
EN Title SOMATOSTATIN ANALOGUE PEPTIDE GROWTH HORMONE INHIBITORS -
INHIBIT INSULIN AND GLUCAGON SECRETION AND ARE RESISTANT TO
PROTEOLYTIC HYDROLYSIS
Abstract
_________________________________________________________________
LA PRESENTE INVENTION CONCERNE DES ANALOGUES DE LA SOMATOstatin
CARACTERISES EN CE QU'ILS REPONDENT A LA FORMULE GENERALE:
(CF DESSIN DANS BOPI)
DANS LAQUELLE:
R DESIGNE UN H, UN amino acid, UN DIPEPTIDE COMME ALA-GLY PAR EXEMPLE;
X(L)-LYS OU LIAISON SIMPLE; X(L)-ASN, TAU OU LIAISON SIMPLE;
X(L)-PHE-OU (L)-ASN; X(L)-PHE, TAU OU LIAISON SIMPLE; L'UN DES DEUX
GROUPEMENTS X OU X EST OBLIGATOIREMENT TAU; X(L)-THR, (L)-PHE OU
LIAISON SIMPLE; X(L)-SER OU LIAISON SIMPLE; (L)-Trp(L)-(L)-Trp OU
(D)-(L)-Trp; (L)-Cys(L)-(L)-Cys OU (D)-(L)-Cys, ET LES ADDITION salts
DE CES PRODUITS AVEC DES acidsPHARMACEUTIQUEMENT ACCEPTABLES ET LES
MEDICAMENTS EN CONTENANT.
Somatostatin analogues of formula (I) and their acid addn. salts are
new. In (I) R is H, an aminoacid or a dipeptide e.g. Ala-Gly; X1 is
L-Lys or a bond; X2 is L-Asn, Tau (i.e. insertion of taurine in
peptide sequence or -NH-CH2-CH2-SO2-) or a bond; X3 is L-Phe or L-Asn;
X4 is L-Phe, Tau or a bond; with the condition that one of X2 and X4
is Tau X5 is L-Thr, L-Phe or a bond; X6 is L-Ser or a bond; (L)-Trp is
L-Trp or D-Trp; and (L)-Cys is L-Cys or D-Cys. (I) control the
secretion of growth hormone (growth hormone) and may be used to treat
acromeoalia. Their inhibitory effect on glucagon and insulin secretion
is different and in glycemic regulation they are useful for control of
insulin dependent and non-insulin dependent sugar diabetes. They have
low toxicity, relatively little effect on gastric secretion and are
more resistant to enzymatic (proteolytic) hydrolytic degradation than
somatostatin. They may be administered parenterally by intravenous,
sub-cutaneous or intramuscular injection, usually in doses of 0.1-10
mg.
Description
_________________________________________________________________
La somatostatin est un tetradecapeptide de structure et qui inhibe
lessecretions endogenes d'hormones de croissance (girl) d'insuline et
de glucagon. Les abreviations utilises sonL celles recommandees pour
les aminoacides par la comlnission de nomenclature biochimique de
1'IUPAC (Journal of Biological Chemistry, 1972, 247, p.
977).
Ce meme peptide reduit egalement de facon notable les taux de
secretions digestives. La deni-vie biologique de la somatostatin est
tres courte (4 minutes environ) car elle est tres vite hydrolysee in
vivo par des enzymes proteolytiques ou bien degradee par des
aminopeptidases et des carboxypeptidases.
Un tres grand nombre d'analogues a ete decrit par differents autcurs
en vue d'obtenir soit des dissociations d'activite biologique soit une
demi-vie biologique prolongee.
Les produits de la presente invention repondent a la formule generale
dans laquelle R R designe un Il, un amino acid, un dipep- tide comme
Ala-Gly;
. X1 = (L)-Lys ou liaison simple
. X2 = (L)-Asn, Tau ou liaison simple
. X3 = (L)-Phe ou (L)-Asn
. X4 = (L)-Phe, Tau ou liaison simple l'un des deux groupements X2 ou
X4 est obligatoirement Tau
. X5 = (L)-Thr, (L)-Phe ou liaison simple
X6 = (L)-Ser ou liaison simple
(L)-Trp = (L)-Trp ou (D)-Trp
. (L)-Cys = (1)-Cys ou (D)-Cys.
Le symbole Tau represente le groupement qui resulte de l'insertion de
la Taurine dans une sequence peptidique, soit
- NH - CH2 -CH2 - SO2
C'est une structure du type sulfonamide.
Ces produits se caracteriset e partienlier - Par une meilleure
resistance a la proteolyse en particulicr glace si la presence d'un
amino acid non naturel la Taurine que les enzymes proteolytiques ne
savent pas reconnaitre et eventuellement grace a' a introduction d'
aci- des amines de la serie D.
- Par une dissociation d'activite biologique par rapport a la
somatostatin prise comme produit de reference aussi bien au niveau de
l'inhibition des 3 hormones de base impliquees dans le diabete qu'au
niveau de l'inhibition des secretions digestives.
Les produits preferes de la presente invention sont representes par
les formules suivantes
CM 14.461
C 14.462
CM 14.468
CM 14.470
CM 14.471
C 14.473
CM 14.500
Ces composes sont toujours utilises sous forme dtun addition salt
comme le hydrochloride, le sulfate, phosphate, acetate, maleate,
citrate, benzoate, succinate, malate, ascorbate...Ces salts pourront
etre obtenus en dissolvant le compose dans l'water en presence do deux
equivalents de l'acidet en soumettant ensuite l'ensemble a une
lyophilisation.Le addition salt prefere reste toutefois 11 acetate.
Principes generaux de la synthese:
Ils sont synthetises selon un procede mixte entre la synthese en phase
solide et la synthese en solution.
Les operations de couplage entre 2 aminoacides sont effectuees en
phase liquide, cest-a-dire en en solution dans un solvant polaire
comme le dimethylformamide (dimethylformamide). Le produit de la
reaction est isole par addition d'un tiers solvant au milieu
reactionnel qui l'insolubilse et permet ainsi de l'isoler par
filtration.
Le produit brut ainsi obtenu est ensuite soumis a des operations de
lavages en phase solide a laide de solvants appropries dans lesquels
il est insoluble. On utilisc a cet effet un groupement protecteur de
la fonction carboxylic acid sur la cysteine de depart (cysteine 14)
qui insolubilise les produits dans les solvants usuels dc lavage (eau,
alcohols, ethers, acetate dtethyle...), tout en maintenant une
solubiiite suffisante dans les solvants polaires comme le
dimethylformamide permettant ainsi d'effectuer les operations de
couplage en phase liquide.
Le groupement protecteur qui permet dfnppliquer cette strategie est le
2-[4-(phenylazo)-benzylsulfonyl]ethyl-ester(OPSE) stable en milieu
acide et clivable en milieu basiquacid selon le processus de
sselimination.
Ltapplication de cette technologie a la synthese de la somatostatin a
ete decrite dans Biorganic Chemistry 8, p. 429-442, (1979).
Les serine et threonine intervenant dans ces syntheses ont ete
utilises sans protection des fonctions hydroxylees dans leur chaise
laterale.
L'amine en # de la chaine laterale de la lysine est protegee pendant
les phases d'elongation du peptide par le groupement
2-(methylsulfonyl)-ethoxycarbonyl (tisse) stable en milieu acide et
clivable en milieu basiquacid.
La fonction thiol de la cysteine porte le groupement protecteur
acetamidomethyl (acetamidomethyl) qui est stable en milieu basique ou
acide. La deprotection est dans ce cas assuree par traitement a l'aide
d'un metal lourd comme 11 silver ou le mercury.
Pendant les phases d'elongation la protection temporaire des amines en
position m du carboxyl est assuree par le groupement protecteur
tert-butyl-oxycarbonyl-amino(Boc). Ainsi chaque operation de couplage
sera suivie d'une operation de deprotection selective du Boc. Cette
deprotection est assuree par un traitement a' l'trifluoroacetic acid
et est effectuee aussi en solution. Ici egalement le produit deprotege
sera isole du milieu reactionnel par addition d'un tiers solvant qui
l'insolubilise. Toutefois, afin de minimiser les quantites de solvant
utilisees, il sera souhaitable de concentrer au prealable le milieu
reactionnel.
Apres les phases d'eloiigation le poptide protege obtenu sera libere
des protections des chaines laterales des lysines et de la fonction
carboxylique terminale par un traitement basique utilisant la soude ou
la baryte dans un solvant approprie u base de dimethylformamide.
Le peptide ainsi obtenu possede toujours les thiols des cysteines
protegees par le groupement acetamidomethyl.
I1 pourra a ce niveau, selon son degre de purete, etre utilise tel que
pour l'etape finale d'oxydation ou bien soumis a wie purification
poussee par la technique de la distribution a contre courant ou bien
par chromatographie de partition.
Enfin, la cyclisation finale du produit par creation d'un pont
disulfide entre les deux cysteines sera assuree par les operations
suivantes
- deprotection des groupements acetamidomethyl des deux cysteines par
un metal lourd (nitrate d'silver par exemplnitrate)
- elimination du metal lourd par un traitement a l'
hydrogen sulfide
- degazage et dilution a labri de l'air de la solution ainsi obtenue
- addition de cette solution progressivement et a PH controle a Wl
milieu d'oxydation constitue par un tampon ammonium acetate contenant
l'agent d'oxy dation qui est le potassium ferricyanide.
Cette operation sera toujours effectuee dans des conditions de forte
dilution (2 litres par g de produit traite) de facon a minimiser les
risques de polymerisation, consequence d'une oxydation in termol
eculaire.
Le produit final est ensuite debarrasse des ions complexes provenant
de la phase d'oxydation par passage surresine convenable puis dessale
et concentre par fixation suivie d'elution par l'acetic acid sur une
autre resine.
Le produit brut d'evaporation devra etre soumis a une chromatographie
de permeation sur gel dans l'acetic acid dilue afin de le debarrasser
des polymeres qui se sont formes au cours de la phase d'oxydation.
Si apres cette operation de permeation sur gel la purete du produit
s'avere insuffisante il pourra etre soumis a d'autres techniques de
purification comme la chromatographie de partition ou le passage sur
resine echangeuses d'ions..
En ce qui concerne l'introduction de la Taurine en sequence, on
prepare d'abord un fragment peptidique contenant cette taurine que
l'on couple ensuite sur le reste de la molecule.
Par exemple, dans le cas du CM 14.462 on prepare le t etrapept ide que
1 on couple sur 1' heptapept ide
La taurine est introduite a partir du chloride-dwacide de la
benzyloxycarbonyl-taurine (Z Tau-Cl) selon la sequence de reactions
Z-Tau-Cl + H-Phe-Phe-OCH3
Z-Tau-Phe-Phe-OCH3
Le tripeptide protege est soumis ensuite a une saponification
Z-Tau-Phe-Phe-OC113
Z-Tau-Phe-Phe-OH
Le groupement benzyloxycarbonyl (Z) est elimine par un traitement
acide energiquacid (H Br / CH3CO2H).
On couple ensuite la sous la forme activee sur ce tripeptide
conduisant au tetrapeptide attendu
Les exemples suivants, a caractere non limitatif, illustrent les
syntheses qui ont conduit a la preparation des composes de la presente
invention.
Symboles et abreviations utilises
Z: benzyloxycarbonyl
Boc:
hydroxybenzotriazole: hydroxybenzotriazole
acetamidomethyl:
Msc:
ONSu:
OPse:
ONp:
O-Tcp:
Me: CII3
dimethylformamide: dimethylformamide
IFA: trifluoroacetic acid ou trifluoroacetate
tetrahydrofuran: tetrahydrofurane
CCM: chromatographie sur couches minces de silice Merck
60F 254
HPLC: Cilromatographie liquide haute performance
BEW1: eluant de chromatographie: butanol (72), CH3CO2H
(7) et H20 (21)
BPEW1: " " ": butanol (50), pyri dine (12), CH3CO2H (12),
H2O (25)
EBPEW1: " " ": ethyl acetate (42), butanol (25), pyri dine (21),
acetic acid (6), water (10)
EPAW1: " " " ethyl acetate (63), pyridine (210, acide formic acid
(10), water (6)
EPAS2: " " " ethyl acetate (70), pyridine (16), formic acid (8), water
(6)
Truth: " " " CH Cl3 (95), MeOH (5),
CH3CO2H (3)
L'analyse en amino acids des differents produits intermediaires cites
dans les exemples suivants a ete realisee.
EXEMPLE 1: Preparation de CM 14.458. schema reactionnel:
Preparation de (A)
1). Z-Tau-Ph3-OMe
16 g de hydrochloride phenylalanine methyl estersont dissous dans
l'water et neutralises a pli 7 par 6,3 g de carbonate acidde sodium.
Apres evaporation a sec, on reprend par l'ethyl acetate, filtre, seche
et evapore ii scc.
Le residu est repris par 20 ml de tetrahydrofuran (tetrahydrofuran) et
additionne a une solution de 7,- Tau Cl. Tau Cl est un produit decrit
(Biochimica Biophysica Acta, 1955, 18, 353).
Apres une nuit de reaction a temperature ambiante il se forme un
precipite blanc constitue de phenylalanine hydrochloride methyl ester.
Le produit est filtre. On evapore a sec la solution, on reprend par de
l'water puis on extrait par l'ethyl acetate. La solution est ensuite
lavee par une solution de sulfate acidde potassium, une solution de
potassium sulfate, une solution de carbonate acidde sodium t une
solution de chlorure de sodium chloride. Apres sechage et evaporation
a sec on recristallise dans un melange de solvants: benzene et pen-
tane.
On obtient 12,73 g de 1; rendement 89 percent point de fusion 93;
CCM/Truth Rf: 0,53.
2). HBR, H-Tau-Phe-OMe
17,9 g du produit 1 prepare ci-dessus sont dissous dans 30,4 ml d'un
melange d'acetic acid et hydrobromic acid a 33 percent. Apres 15
minutes a temperature ambiante, on evapore a sec puis on precipite par
l'ethyl ether.
On obtient 14,28 g du produit attendu 2, soit un rendement de 91,4
percent. Ce produit est tres hygroscopique.
3). Boc-Phe-Tau-Phe-OMe
On dissout dans 100 mi de dimethylformamide 14,5 g de 2 prepare
ci-dessus. On ajoute a la solution 15,7; de Boc-Phe-ONp, 5,51 g
d'hydroxybenzotriazole (hydroxybenzotriazole) et 8,7 ml de N
ethylmorpholine. La reaction dure une nuit a pli compris entre 6 et 7.
On evapore a sec puis on reprend par l'ace- ethyl. On lave par une
solution de sulfate acidde potassium, une solution de sulfa-te de
potassium et de l'water; on seche, on evapore a sec puis on reprend
par le minimum d'ethyl acetate tiede. On fait precipiter par addition
d'hexane. On essore le precipite, il est ensuite lave a l'hexane puis
a l'ethyl ether.
Apres sechage, on obtient 16,80 g de 3 rendement 81 percent; CCM/Truth
Rf: 0,43.
4). TFA, H-Phe-Tau-Phe-OMe
13,97 g de 3 sont dissous dans 84 ml de TFA.
Apres 15 minutes de reaction a temperature ambiante, on evapore a sec,
on fait precipiter par l'hexane foid pour obtenir 14 g de 4; rendement
100 percent -; CCM/Truth Rf: 0,13.
5).; Boc-Asn-Phe-Tau-Phe-OMe
Dans 100 ml de dimethylformamide on dissout 14 g de 4 prepare
ci-dessus auxquels on ajoute 9,66 g de Boc-Asn-ONp, 4,o6g de HOBT et
G,o6 ml de N ethylmorpholine. Apres 2 heures de reaction a pH compris
entre 6 et 7, on evapore a moitie, on fait precipiter par 4 volumes
d'water puis on lave successivement par une solution de sulfate aciddo
potassium, une solution de potassium sulfate, de l'water, une solution
de carbonate acidde sodium, de l'water et de l'ethyl ether a 1 percent
d'ethyl acetate, a nouveau de 1'-ethyl ether puis on seche.
On obtient 17 g de 5; rendement 100 percent;
CCM/Truth Rf: 0,33.
6). Boc-Asn-Phe-Tau-Phe-OH
17 g de 5 sont dissous dans 255 ml de dioxane, on ajoute 59,5 ml de
soude normale. Apres 30 minutes a tempe rature ambiante, on evapore a
sec. On reprend par 60 mi d'water, oii acidifie a pH 3,5. 11 se forme
un precipite qui est filtre, lave a l'water ct seche.
On obtient 13 g de 6; rendement 78,2 percent
CCM/Truth Rf: 0,65.
7). TFA, H-Asn-Phe-Tau-Phe-OH
On dissout 13 g de 6 decrit ci-dessus dans 65 ml de TFA. Apres 20
minutes de reaction a temperature ambiante, oii evapore a sec puis on
fait precipiter par 1'-ethyl ether et on seche.
On obtient 12,58 g de 7, soit un rendement de 94,7 percent
CCM/BEW1 Rf: 0,33.
Dans 100 ml de DMP on dissout 12,5 g de 7 et on ajoute 1G,5 ml d'water
puis 8,35 g de de hydroxybenzotriazole et 5ml de N ethylmorpholine.
Apres 3 heures a pH compris entre 6 et 7, on evapore a sec puis on
amene a pli = 4,5, on. fait precipiter par l'ethyl acetate, on lave et
on seche par l'ethyl ether.
On obtient 12,41g de 8; rendement 70,5 percent; CCM/BEW1 Rf: 0,44
12,8 g de 8 prepare ci-dessus sont dissous dans 60 ml de TFA, apres 20
minutes a temperature ambiante on evapore. Il se forme une huile. On
precipite par l'ethyl ether pour obtenir 14,37 g de 9; rendement 100
percent;
CCM/BPEW1 Rf:0,40.
On dissout 13 g de 9 prepare ci-dessus dans 91 ml de dimethylformamide
et 15 ml d'water. On ajoute 7,8 g de
2,34 g de hydroxybenzotriazole et 4,29 ml de N ethylmorpholine. Apres
3 heures de reaction a pH compris entre 6 et 7, on evapore la solution
de moitie puis on amene a pH = 3,5 par addition d'une quantite
suffisante d'acetic acid.
Le produit 10 precipite par addition d'ethyl ether; Poids: 16,84g;
rendement 97,3 percent;CCM/BPEW1
Rf: 0,62.
On dissout 15 g de 10 prepare ci-dessus dans 70 ml de TFA. Apres 20
minutes a temperature ambiante, on obtient une huile a partir de
laquelle il se forme un precipite par addition d'ethyl ether.
On obtient 13,86 g de 11; rendement 93 percent
CCM/BPEW1 Rf: 0,38.
12,55 g de il sont dissous dans un melange de 83 ml de
dimethylformamide et 13 ml d'water. On ajoute 3,4 g de Boc-Ala-
Gly-O-Tcp, 1,75 g de hydroxybenzotriazole et 2,88 ml de N
ethylmorpholine.
Apres 3 a 4 heures de reaction a pH compris entre 6 et 7, on evapore a
moitie puis on amene a pH = 3,5. Le precipite obtenu par addition
d'ethyl acetate est lave par l'ace- tate ethyl puis acidifie a pH =
3,5. Le produit 12 obtenu est le produit (-A) du schema reactionnel.
On en obtient 13,45 S, soit un rendment de 97,1 percent; CCM/BEW1
Rf: 0,28.
Preparation de (B)
On dissout 700 g de
(J. Amer. Chem., 1972, 94, 5456) dans 6 l de pyridine anhydre, puis on
dissout 608 g de Pse OH et on refroidit la solution a 0 C.
Dans 800 ml de pyridine anhydre on dissout 500 g de
dicyclohexylcarbodiimide. Ce melange est ajoute lentemcnt (en 7
heures) a la solution precedente en maintenant la temperature entre 0
C et 50C et sous agitation.
Apres une nuit sous agitation, entre 0 C et 5 C, on essore le
dicyclohexylurea forme. On evapore le solvant.
Le residu huileux forme est verse dans 15 1 d'un melange water et
glace sous agitation. Le produit cristallise, il est lave plusieurs
fois par une solution saturee de carbonate acidde sodium puis par de
l'water et seche. Point de fusion 75-77 C; CCM/BEW1 Rf: 0,69; [ and
alpha]25= - 16 (c = 1, acetic acid).
5,78 g de sont ajoutes rapidement a une solution de 1 ml
d'hydrochloric acid concentre dans
100 ml d'formic acid a temperature ambiante. Apres
10 minutes le solvant est evapore sous vide. Le residu huileux repris
dans 15 ml de methanol est verse dans 150ml d'etheranhydre agite a 0
C. Le produit forme est filtre, rince a l'etheret seche sous vide en
presence d'phosphoric anhydride.
Point de fusion 162-1640C; CCM/BEW1 Rf:
5,15 g de 14 sont dissous dans 60 ml de dimethylformamide pur anhydre
auxquels on ajoute 1,15 g de N ethylmorpholine.
Apres refroidissement a -100C, on ajoute 2,05 g de N
butoxycarbonyl-serine puis goutte a goutte 2,47 g do
dicyclohexylcarbodiimide et 2,70 g dlOHBT dissous dans 20 ml de
dimethylformamide.
Apres 1 heure a -10 C, on laisse revenir lentement a temperature
ambiante. Au bout de 6 heures, le DMP est evapore sous vide puis le
residu est repris par 200 ml d'ethyl acetate, on filtre le
dicyclohexylurea forme puis mi lave le solide par des solutions
aqueuses de sulfate acidde potassium, potassium sulfate, water,
carbonate acidde sodium a 5 percent, water.
Apres sechage sur sulfate acidde magnesium, le solvant est concentre a
50 ml. Apres une nuit a 0 C, le produit precipite, il est filtre,
rince par l'ethyl acetate, l'etheranhydre puis seche sous vide. On
obtient 5,3 g, soit un rendement de 80 percent. Point de fusion
111-113 C; CCM/BEW1 Rf: 0,63: [ and alpha]25= - 25 5 (c = 1, methyl
alcohol).
38,5 g de 15 sont ajoutes rapidement a 300 ml de TFA prealablement
refroidis a OOC. Apres quelques minutes, l'acidest evapore sous vide,
le residu est repris par de l'etheranhydre, puis filtre et rince
plusieurs fois a l'etheranhydre et seche.
On obtient 38,5 g de 16, soit un rendement de 97 percent; CCM/BPEW1
Rf: 0,60.
6,80 g de 16 sont dissous dans 100 ml de dimethylformamide pur.
Tout en refroidissant au baiii de glace, on ajoute successivement 2,52
nil de N ethylmorpholine et 3,79 g de Boc
Thr-ONsu. Apres 2 heures a temperature ambiante, on evapore le
dimethylformamide a 30 C, le produit solidifie en presence de glace,
il est filtre sous vide puis lave a l'water, par une solution de
sulfate acidde potassium et sulfate de potassiuM a pl1sulfate= 2, a
l'water, par une solution do carbonate acidde sodium a 5 percent et 2
fois a l'water.
Apres sechage a l'air, puis sur phosphoric anhydride, on obtient 7,5 g
de 17, soit un rendement de 9804.
Point de fusion: 136 - 138 C; CCM/BEW1 RF: 0,69.
18). est obtenu a partir de 17 en operant selon la methode decrite
pour la preparation de 16.
7,81 g de 18 sont dissous dans 90 ml de dimethylformamide anhydre et
traites a 0 C par 2,52 ml de N ethylmorpholine puis 4,64 g de
Boc-Phe-ONp.
Apres une nuit au refrigerateur, le dimethylformamide est evapore vide
a 305C, le produit obtenu est lave a l'water, une solution aqueuse de
sulfate do potassium et sulfate acidde potassium, de l'water, une
solution aqueuse de carbonate acidde sodium et de l'water. Apres
sechage, on lave a nouveau par l'isopropanol et l'ether.
011 obtient ainsi 8,22 g, soit un rendement de 90 percent.
Point de fusion: 153 - 155 C; CCM/BEW1 Rf: 0,75; [ and alpha]25= - 16
(c = 1, acetic acid).
20). TFA, H-Phe-Thr-Ser-Cys-OPse est obtenu a
acetamidomethyl partir de 19 en suivant le mode operatoire decrit nour
la preparation de 16.
CCM/BPEW1 Rf: o,65; [ and alpha]25 = - l805(c=1, methanol). est obtenu
a partir de 20 par addition de Boc-Thr-ONsu selon le mode operatoire
decrit pour la preparation de 17.
CCM/BEW1 Rf: 0,65; Point de fusion: 169 - 172 C.
2 g de 22 sont obtenus a partir de 2,03 g de 21 on suivant le mode
operatoire decrit pour la preparation do 16.
CCM/EPAW1 Rf: 0,50.
10,29 g do 22 sont dissous dans 100 ml de dimethylformamide anhydre et
traites a 0 C par 2,52 ml de N ethylmorpholine et 6,2 g de
Apres 15 a 20 heures a tempe- ture ambiante, le solvant est evapore
sous vide.On agite en presence de glace, le precipite forme est
filtre, puis lave a l'water, par mie solution aqueuse de sulfate
acidde potassium et sulfate dc potassium, a l'water, 2 fois par 100 ml
d'isopropanol et enfin abondamment and l'etherpuis a l'acetone.
CCM/BEW1 Rf: 0,57: [ and alpha]25= - 19,5 (c = 1 acetic acid.) est
obtenu a partir de 23 en suivant le mode operatoire decrit pour la
preparation de 16.
CCM/EPAW1 Rf: 0,50.
13,075 g de 24 sont mis en solution dans 130 ml de dimethylformamide
anhydre et traites au bain de glace par 2,5 ml de
N ethylmorpholine, 5,11 g de Boc-Trp-Onp et 2,70 g
d'hydroxybenzotriazole.
Apres une heure environ a temperature ambiante la reaction est
complete, le solvant evapore, le residu repris a la glace se solidifie
peu a peu; il est broye finement, filtre, lave abondamment a l'water
puis apres un leger sechage par 2 fois 120 ml disopropanol tiede puis
par des fractions de 100 ml d'acetone tiede jusqu'a purete
satisfaisante en CCM.
On obtient ainsi 12,6 g du produit presentant les caracteristiques
suivantes
CCM/EPAW2 Rf: 0.50; [ and alpha]25= - 17,5 (c = 1, acetic acid).
26)B On prepare au Lain de glace le melange suivant 130 ml de TFA, 13
ml d'ethanedithiol et 6 ml d'anisole.
On lui ajoute rapidement sous agitation 13,3 g de 25 et poursuit
l'agitation pendant 20 minutes a temperature ambiante. Apres
evaporation sous vide lo residu est repris tlaiis 50 ml d'isopropanol
qui est ensuite evapore sous vide, repris une seconde fois par le meme
solvant duquel il est filtre apres trituration et enfin lave par le
melange isopropanol etherpuis par l'etherseul et seche.
On obtient ainsi 13,4 g du sel de (Bsalt.
CCM/BEW1 Rf: 0,36.
Preparation de (C).
27). Dans 90 ml de dimethylformamide, on dissout 6 g de (A) auxquels
on ajoute 8,16 g de (B), 2,16 g de hydroxybenzotriazole et 1,62 g de
dicyclohexylcarbodiimide. Le p1l est compris entre 6 et 7, on laisse a
temperature ambiante une nuit puis on evapore le volume au dixieme, on
precipite par l'ethyl acetate, filtre et reprend le filtrat dans
l'ethyl ether. On filtre a nouveau puis on reprend par un peu de
methyl cyanide puis par l'ethyl ether.
On obtient ainsi 11,57 g de (C), soit un rendement de 91 percent;
CCM/EBPEW1 Rf: 0,85.
Preparation de (D).
On dissout 11,5 g de (C) dans 57 ml de methylene chloride puis 6 ml
d'anisole et 6 ml dtethanedithiol,on ajoute 57 ml de TFA. Apres 20
minutes de reaction, on obtient une huile; un precipite est forme par
addition de 4 volumes d'ethyl ether.
On obtient ainsi 11,33 g de 28, soit un rendement de 98 percent;
CCM/BPEW1 Rf: 0,58.
5 g de 28 sont dissous dans 125 ml de dimethylformamide et 15 ml
d'ethyl alcohol. On refroidit a +5 C. On ajoute 89 ml d'barium
hydroxide a uno temperature comprise entre 15 C et 200C maximum,
l'addition durc 30 minutes au plus. En fin de reaction, on fait
barbotter du gaz carbonique jusqu'a pH 7. Il se forme un precipite,
apres centrifugation, 011 evapore a sec puis on precipite par 5
volumes d'ethyl acetate et on lave par l'ethyl acetate. Poids 2 g;
rendement 55 percent; CCM/BPEW1 Rf: 0,32.
Preparation de (D): CM 14.458.
39). 2 g de 29 sont dissous dans 200 ml d'une solution d'acetic acid a
50 percent degazee. A temperature ambiante, sous nitrogen, a l'abri de
la lumiere, on introduit 10 ml d'une solution normale de silver
nitrate. On laisse une nuit a temperature ambiante a l'abri de la
lumiere sous nitrogen.La solution est ensuite evaporee a sec sous
nitrogen, le residu est repris par de l'etherpuis par 250 ml d'water.
On centrifuge, on decante puis on reprend le solide par 250 ml d'water
et 250 ml de dimethylformamide prealablement degazes, on fait passcr
un courant dthydro- gene sulfide pendant quelques minutes puis on
centrifuge, on decaiite et on lave le culot noir.
Les water de lavages soiit reunies, degazees, on y ajoute 3 1 dwIe
solution d'acetic acid 0,2 N. La solution obtenue (4,2 1) est ajoutee
en 16 heures sous agitation et sous nitrogen a pH = 6,9 a une solution
ayant la composition suivante: 1,5 1 d'water, 950 g de potassium
ferricyanide et 3750 g d'ammonium acetate. Le pll est maintenu a 6,9
par addition d'une solution d t ammoniaquammonia pendant 2 heures. On
laisse ensuite 2 heures sous agitation puis on amene la solution u pll
5 par l'acetic acid concentre. On dessale par passage sur resinc
Biorad Ag 3x4 puis fixation sur resine Biorex 70, ces dcw; resines
etant sous forme acide. On lave puis on elue par de l'acetic acid a 50
percent.
Apres evaporation a sec, on reprend par l'ether, on essore le
precipite puis on sublime l'exces d'ammonium acetate. On obtient 1,46
g de produit brut.
La purification est effectuee d'abord sur
Sephadex G 25 (tamisage moleculaire) puis par chromatographie de
partition sur Sephadex G 25, eluant: butanol (4), acetic acid (1),
water (5). On obtient 194,7 mg de produit pur;CCM/BPEW1 Rf: 0,21; [
and alpha]25= ~ 32 (C = 1, acetic acid a 590).
EXEMPLE 2: Preparation de CM 14.461
Schema reactionnel
Preparation de (A)
1). Z-Tau-Phe-Phe-O CH3
75 g de Boc-Phe-Phe-OMe sont dissous dans 300 ml d'une solution
d'hydrochloric acid 2,5 N dans l'acetate ethyl. Apres 15 minutes il se
forme un precipte, on additionnne de l'ethyl ether, on filtre et on
seche.
On obtient ainsi 60,24 g de H-Phe-Phe-OMe soit un rende- ment de 9850.
Ce produit est repris dans un melange volume pour volume water et
TIIF. On neutralise par 15 g de carbonate acidde sodium, apres 20
minutes de reaction, on evapore a sec puis on reprend par du TIF, on
ajoute 21,1 g do
Z-Tau-Cl. La reaction est legerement exothermique, il se forme un
precipite blanc.
Apres une nuit a temperature ambiante on filtre, evapore a sec puis
reprend le residu par de l'ethyl acetate. On lave par une solution de
sulfate acidde potassium, une solution de potassium sulfate puis une
solution de chloride do sodium. On seche, evapore a sec puis reprend
le residu par du pentane.
On obtient ainsi 37,37 g de 1, soit un rondement de 89 percent;
CCM/Truth Rf: 0,5.
2). Z -Tau-Phe-Phe-OH
37 g de Z-Tau-Phe-Phe-OMe en solution dans 370 ml de dioxane sont
deproteges dans 148 ml de soude normale.
Apres 30 minutes a temperature ambiante, on evapore a sec, le residu
est repris par de l'water puis acidifie par une solution d'acetic
acid. Il se forme une gomme qui est extraite par dc l'ethyl acetate
puis sechee sur magnesium sulfate. On evapore a sec sous vide, reprend
le residu par du pentane puis evapore a sec sous vide.
On obtient 31 g de produit 2, soit un rendement de 86 percent;
CCM/Truth Rf: 0,31.
3). HBR, H-Tau-Phe-Phe-OH est obtenu a partir do 2 selon le procede
decrit pour le compose 2 de l'exemple l.
Il se forme 27,55 g de 3, soit un rendement de 98,6 percent
CCM/BEW1 Rf: 0,30; CCM/BPEW1 Rf: 0,60.
5g du compose 3 decrit precedemment sont dissous dans une solution
comprenant 40 ml de dimethylformamide et 6,5 ml d'water a laquelle on
ajoute 5,7 g de et 1,5 g de OIIBT. Le PH est amene a une valeur
comprise entre 6 et 7 par addition d'une quantite suffisante do N
ethyl-morpholine. Apres 4 heures de reaction, on evapore sous vide
saris chaufrer jusqu'a obtention d'une huile. On diluc daiis un volume
egal d'water puis on amene a pll 4,5.
On extrait par l'ethyl acetate puis on lave la phase organiquc par une
solution de sulfate acidde potassium, une solution de potassium
sulfate, on seche sur magnesium sulfate puis mi evapore a sec, on
reprend le residu par du pentane puis on evapore a sec a nouveau.
On obtient 8,05 g soit un rendement de 100 percent
CCM/BEW1 Rf: 0,67.
8 g de ce produit sont prepares a partir de 8 g de 4 selon le procede
decrit pour le compose 9 de l'exemple 1. Le rendement est de 98
percent; CCM/BEW1 Rf: 0,26.
7 g de ce produit sont prepares a partir de 8,2-g de 5 selon le
procede decrit pour le compose 10 de l'exemple 1. Rendement 71
percent; CCM/BEW1 Rf: 0,57.
6,36 g de ce produit sont prepares a partir de 7 g de 6 selon le
procede decrit pour le compose 11 de l'exemple 1.
Ce compose est le (A) du schema reactionnel.
5,36 g de 7 soiit dissous dans 30 ml de DE1F et 4 mi d'water.
On ajoute 2,52 g de Boc-Ala-Gly-O-Tcp et 0,86 g de
hydroxybenzotriazole puis une quantite suffisante de N ethylmorpholine
pour amener le pil du milieu entre 6 et 7.
Apres 4 heures de reaction, on evapore a sec sous vide puis on reprend
par de l'ethyl ether acidifie.
On obtient un solido que l'on seche apres essorage poids 5,98 g;
rendement 100 percent; CCM/BEW1 Rf: 0,49.
Preparation de (B).
La preparation de ce compose est decrite dan l'exemple 1.
Preparation de (C).
9). 2 g de (A) sont dissous dans 30 mi de DMP, on ajoute 2,9 g de (D)
puis on neutralise par addition de N ethylmorpholine. On ajoute a la
solution 0,92 g de
BOP et 0,26 ml de N ethylmorpholine; apres 2 heures, 011 ajoute a
nouveau 0,2 g de BOP et 0,05 mi de N ethylmorpholine. Apres wle nuit a
temperature ambiante on filtre puis on precipite par l'acetate
dssethylo. Apres essorage, le precipite est lave a l'ether, a l'water
puis a l'ether.
On obtient 2,42 g de 9, soit un rendement de 54,1 percent.
Preparation de (D).
2,19 g dc ce produit sont obtenus a partir de (C) selon le procede
decrit daus l'exemple 1 pour la preparation de 16; rendement de 99
percent. l,48 g de ce produit sont obtenus a partir do 2 g de 10 selon
le procede decrit dans l'exemple 1 pour la preparation de 17;
rendement 100 percent.
12). CM 14.461 = (D)
Ce compose est prepare selon le procede decrit pour la derniere etape
do l'exemple 1.
A partir de 1,48 g de 11 mi obtient 0,670 g de
CM 14.461, soit un rendement de 52 percent; CCM/BPEW1 Rf: O,53; [ and
alpha]25: - 32 (C = 1, acetic acid a 5 percent).
EXEMPLE 3: CM 14.462.
Schema reactionnel.
(D) = CM 14.462
Preparation de (A).
On prepare tout d'abord le compose 3 de l'exemple 2: HBR,
H-Tau-Phe-Phe-OH. 20 g de ce produit sont dissous dans 160 ml de
dimethylformamide ot 26 ml d'water. On ajoute a la solution 19 g de
Boc-Cys-ONp, 6 g de hydroxybenzotriazole et une quantite suffisan- te
de N ethylmorpholine pour que le pH soit compris entre 6 ct 7. Apres 3
a 4 heures de reaction, on evapore a sec sous vicie puis on acidifie
jusqu'a pll = 3,5.On reprend ensuite par l'ethyl acetate, la phase
liquide est layee par de l'water, par une solution de sulfate acidde
potassium, une solution do potassium sulfate et une solution de sodium
chloride. Ou seche sur du sulfate de magnsulfate- sium puis on evapore
a sec et on reprend le residu par de l'ethyl ether.
On obtiunt ainsi 21,84 g de 1, soit un rendement de 78,6 percent;
CCM/BEW1 Rf: 0,77.
Preparation de (B).
2). Preparation de
Ce compose est identique au compose 24 decrit dans l'exemple 1.
6 g de CE 14.335 sont dissous dans 61 ml de dimethylformamide.
On ajoute 1,16 ml de N ethylmorpholine, 2,34 g de Boc (D) Trp-ONp et
1,22 g de hydroxybenzotriazole. Le pH est ajuste entre 6 et 7 par
addition de N ethylmorpholine. Apres 3 heures et demi de reaction, 011
evapore de moitie sous vide, puis on rait precipiter par addition dc 3
volumes d'water froide. Apres essorage, on lave le solide
successivement par de l'water, une solution de sulfate acidde
potassium, une solution dc potassium sulfate, do l'water, une solution
de carbonate acidde sodium et de l'water.
Apres sechage, 011 lave a nouveau ave 75 mi dtiso- propanol, de
l'ethyl ether, 50 ml d'ethanol, de l'ethyl ether, 40 m7 d'acetone et a
nouveau de l'ethyl ether.
On obtient ainsi 4,86; de 3, soit un rendement de 72 percent; CCM/BEW1
Rf: 0,68.
3,4 g de 3 sont dissous dans une solution de 14 ml de TFA, 13 ml
d'anisole et 1,4 ml d'ethanedithiol. Apres 20 minutes a temperature
ambiante, on precipite par de l'isopropanol
On obtient 3,59 9 de 4 soit un rendement de 100 percent;
CCM/BEW1 Rf: 0,48.
Preparation de (C)
(C) est obtenu par addition de (A) et (B) selon le mode operatoire
decrit dans l'exemple 2 pour la preparation du compose 9.
On obtient 3,10 g de (C), soit un rendement de 64 percent;
CCM/BEW Rf: 0,61.
Preparation de (D).
Ce produit est obtenu a partir de (C) en suivant le mode operatoire
decrit dans l'exemple 1 pour la preparation du compose (C).
A partir cie 3,8 g de (C) on obtient 3,63 de 5, soit un rendement de
94,8 percent; CCM/BEW1 Rf: 0,76.
La deprotection dc la lysine pour obtenir 6 a partir de 5 s'effectue
selon le mode operatoire decrit dans l'exemple 1 pour la prepration du
compose 6.0n obtient 3,07 g de 6 a partir de 3,6 g de 5. Le rendement
est de 100 percent; CCM/BEW1; Rf: 0,36.
7). (D) = CM 14.462
La cyclisation du peptide 6 et sa purification s'effectuent selon le
mode operatoire decrit pour la derniere etape de l'exemple l
(preparation de D)
CCM/BPEW1 Rf: 0,59; [ and alpha]25= - 48 (C = 1, acetic acid 5
percent).
EXEMPLE 4: CM 14.468.
Schema reactionnel.
(D) = CM 14.468
Preparation do (A).
1). Ce produit est celui qui est decrit en 1 dans l'exemple 3.
Preparation de (B).
35 ml de DES auxquels on ajoute 2,57 g de Boc-Phe-ONp et 1,05 g de
hydroxybenzotriazole et une quantite suffisante de N ethyl-morpholine
pour amener le pli entre 6 et 7. Apres 4 heures de reaction a
temperature ambiante, on evapore a sec puis on precipite par 5 volumes
dbau glacee et on lave par une solution dc sulfate acidde potassium,
tino solution de potassium sulfate, une solution de carbonate acidde
sodium, une solution de potassium sulfate, une solution do sulfate
acidde potassium, de l'water et du pentane acidifie par l'acetic acid
a 1 percent.
Apres sechage, on obtient 4,18 g do produit, soit un rendement do 97
percent; CCM(N butanol 96, acide acetic acid 1, water l) Rf: 0,77.
Les 4,18 g dc 2 obtenus precedemment sont dissous dans 21 ml de TPA.
Apres 20 minutes a temperature ambiante, on evapore a scc puis on
reprend le residu par du pentane et on seche; Poids 4,18 g; rendement
99',u'; CCM/ methyltrichlo- rure dc methylc 90, alcohol 20, acide
acetic acid 03) Rf: 0,09.
Cc compose est obtenu a partir de 3 en suivant le mode operatoire
decrit pour la preparation do 2.
On obtient 3,69 g de i, soit un rendement de 78 percent.
CCM/ (trichlorure demethylmethyle 90, alcohol 20, acide acetic acid
trichloride 03) Rf: 0,61.
4,3 g de 5 sont obtenus a partir de 4,3 g de 4 par dissolution dans 19
nil dc TFA puis evaporation a soc apres 20 minutes a temperature
ambiante, le residu etant repris par do l'ethyl ether. Rendement 98,4
percent
CCM/ (trichlorure demethylmethyle 90, alcohol 20, acide acetic acid
trichloride 03) Rf: 0,18.
Ce compose est obtenu a partir de 5 par addition de Boc-Thr-ONSu en
suivant le mode operatoire decrit pour la preparation de 2.
En partant de 3,2 g de 5, on obtient 2,91 g de 6, soit un rendement de
83 percent; CCM/ butyl alcohol 96, acide acetic acid 01, water 03) Rf:
0,83.
3,8 g de ce compose sont obtenus a partir de 6 (3,7 g) en operant de
la meme maniere que pour la preparation de 5. Rendement 99,8 percent;
CCM/(melange de solvants cite pour 3) Rf: 0,43.
4,16 g de ce produit sont obtenus a partir dc 3,7 g dc 7 par addition
de selon le procede decrit pour la preparation de 2; rendement 88,7
percent; CCM/ (melange de solvants cite pour 3) Rf: 0,87.
4 g de 9 sont obtenus a partir de 8 (4 g) selon lie mode operatoire
decrit pour la preparation de 5 rendement 98,9 percent; CCM/ (melange
de solvants cite pour 3)
Rf: 0,14.
10 est obtenu a partir de 9 par addition de
Boc-(D) Trp-ONp selon le mode operatoire decrit pour preparation de 2.
4 g de 9 donnent 4,1 g de 10; rendement 90 percent;
CCM/ (melange de solvants cite pour 3) Rf: 0,82.
A 4 g cle 10 en suspeiision dans 20 ml de methylene chloride, on
ajoute 2 ml d'anisol, 2 ml d'ethanedithiol et 20 ml do TFA. Apres 20
minutes a temperature ambiante, 011 evapore, on reprend par de l'water
puis on lave et on seche pour obtenir 4 g de ll; rendement 98 percent
CCM/ (dans le solvant decrit pour 3) Rf: 0,30.
Preparation do -(C).
12). Cc produit est obtenu par addition de (A) et (B) selon le procede
decrit pour la preparation du compose (C) de l'exemple 2.
On obtiellt 3,75 g dc 12 a partir do 2,12 g de (A) et 3,5 g de 11,
soit un rendement de 77,9 percent; CCM/ (dans le melange de solvants
decrit pour 3). Rf: 0,66.
Preparation de (D).
13 est obtenu avec un rendement de 100 percent selon le procede decrit
pour le compose 16 de l'exemple 1.
CCM/BPEW1 Rf: 0,72.
1,3 g de 14 sont obtenus a partir de 2 g do 13 en suivant le procede
decrit pour le compose 17 de l'exemple 1. 011 obticnt 1,3 g dc
produit; CCM/BPEW1
Rf: 0,51.
15). (D) = CM 14.468.
Ce produit est prepare a partir de 14 selon le mode operatoirc decrit
dans 1 t exemple 1 pour l'etape finale de la preparation de (D).
On obtient 0,843 g de CM 14.468; CCM/BPEW1
Rf: 0,77; [ and alpha]25= - 54,4 (C = 1, acetic acid a 5 percent)
EXEMPLE 5: CM 14.470
Schema reactionnel.
(D) = CM 14.470
Le compose (A) est identique a ccliii decrit dans l'exemple 3.
Le compose (B) est prepare a partir de TFA, H-Phe
Cys-OPse par additions successives d'aminoacides proteges
Acin selon le procede decrit dans l'exemple 4.
011 prepare ensuite (C) puis (D) en suivant les modes operatoires
decrits precedemment.
(D) = CM 14.470; CCM/BPEW1 Rf: 0,74 [ and alpha]25= - - 76 (C = li
acetic acid
EXEMPLE 6: CM 14.471
Schema reactionllel.
(D) = CI 14.471
Le compose (A) est identique a celui decrit dans l'exemple 3.
Par addition de (B) prepare suivant les methodes decrites
precedemment, on obtient (C), puis (D).
(D) = CM 14.471; CMM/BPEW1 Rf: 0.62.
EXEMPLE 7: CM 14.473
Schema reactionnel.
(D) = CM 14.473
(A) est prepare par additions successives d'amino aci(lcs cn partant
de TFA, H-Phe-Phe-OMe.
(B) est identique ai (B) de l'exemple 5.
Par addition de (A) et (B) et en operant selon les methodes decrites
precedemment, on obtient (C), puis (D);
CCM/BPEW1 Rf: 0,58.
EXEMPLE 8: CM 14.500
Schema reactionnel.
(D) = CM 18.500
(A) est obtenu a partir de Boc-Phe-Tau-Phe-OH en operant selon les
methodes decrites precedemment.
(ss) est identique a cclui de l'exemple 6.
Par addition de (A) et (B) on obticnt ensuite (C), puis (D) en suivant
les modes operatoires decrits precedemment: [ and alpha]20= + 19,2 (C
= 0,5, acetic acid).
Les peptides de la preseiite invention ainsi que leurs salts
pharmacologiquement acceptables interviennent activement sur le
controle de la secretion d'hormone de croissance tant chez 1' animal
que chez l'homme (Therapeutique de l'acromegalie).
L'action inhibitrice differentielle de ces produits sur la production
d'insuline et dc glucagon et dans la regulation glycerique les rend
utiles dans le controle du diabete sugar insuline dependant ou non
insuline dependant.
Ces molecules ont peu ou pas d'action sur les secretioiis digestives,
autre facteur de differentiation par rapport au profil dc la
somatostatin native.
Les produits selon l'invention ont une toxicite faible; dans aucun
cas, lors des essais, les animaux traites n'ont montre de signes
alarmants.
La gamme posologique utilisation clinique de ces substances varie avec
les effets therapeutiques recherches ot avec chaque paticnt, elle est
generalement comprise entre 0,1 et 10 mg de principe actif.
Les peptides de la presente invention pourront etre administres par
voic intraveineusc, sous-cutanee ou intra- musculaire en solution dans
un solvant tel que le serum physiologique (solution saline isotonique)
ou dans un tampon phosphate ct toujours dans des conditions
rigoureuses de sterilite; les solutions salines comportent
generalement de 1 a 5 percent en poids do produit selon l'invention.
Les produits selon l'invention ont ete examines en ce qui concerne
leur activite biologique.
Essais biologiques.
L'inhibition de la secretion des hormones pancreatiques et de
l'hormone de croissance (growth hormone) a ete determinee in vivo chez
des rats males Sprague Dawley d'origine
Charles River de 200-a 220 g. Les dosages d'insuline, glucagon et
d'hormone de croissance sont effectues par les techniques
radioimmunologiques.
L'inhibition de la secretion gastrique acide in vitro a ete exploree a
partir de muqueuses gastriqueacid isolees de cobaye.
On determine dans chaque cas la concentration du peptide inhibant 50
percent dc la secretion hormonale ou de la secretion gastrique. Dans
le tableau suivant les resultats soiit exlirimes par rapport a la
somatostatin utilisee comme produit de reference. L'somatostatin ayant
ete dais chaque cas consideree comme egale a 100, les chifres relatifs
aux peptides de l'invention expriment le rapport de l'activite du
peptide considere a l'somatostatin.
Inhibition de la secretion des hormones pancreatiques de la growth
hormone et de la secretion gastrique acidpar quatre derives de la
somatostatin en comparaison avec la somatostatin native
Insuline Glucagon growth hormone Secretion gastrique
Somatostatin 100 100 100 100
CM 14.461 inactif 20 162 #0
CM 14.462 30 44 174 11
CM 14.470 24 63 136
CM 14.471 72 157 -
Claims
_________________________________________________________________
R E V E N D I C A T I O N S
1. Analogues de la soiiatostatiiic caracterises en ce qui ils
repondent a la formule generaledans laquelle R R designe un il, un
amino acid, un di-peptido comme Ala-Gly par exemple. X1 = (L)-Lys ou
liaison simple. X2 = (L)-Asn, Tau ou liaison simple. X3 = (L)-Phe ou
(L)-Asn;. X4 = (L)-Phe, Tau ou liaison simple l'un des deux groupemens
X2 ou X4 est obligatoirementTau. X5= (L)-Thr, (L)-Phe ou liaison
simple;, X6 = (L)-Scr ou liaison simple, (L)-Trp = (L)-Trp ou (D)-Trp.
(L)-Cys = (L)-Cys ou (D)-Cys, et les addition salts dc ces produits
avec des acidspharmaceutiquement acceptables.2. Produits selon la
revendication 1, caracterises eii ce que l'analogue do la somatostatin
a pour formule3. Produits selon la revendication 1, caracterises en ce
que l'analogue dc la somatostatin a pour formule4. Produits selon la
revendication 1, caracterises en ce, que l'analogue de la somatostatin
a pour formuleS. Produits scloii la revondication 1, caracterises en
ce que l'analogue de la somatostatin a pour formule6. Produits selon
la revendication 1, caracterise en ce que l'analogue de la
somatostatin a pour formule7.Produits selon la revendication 1,
caracterises en ce que 1 t analogue de la somatostatin a pour
formule8. Produits scloii la revendication 1, caracterises en ce que
l'analogue de la somatostatin a pour formule9. Produits selon la
revendication 1, caracterise en ce que l'analogue de la somatostatin a
pour formule10. Medicaments utiles notamment pour Se traitement do
maladies resultrnit d'un dereglement de la secretion d'hormone dc
croissance, d'insuline ou de glucagon, caracterises on ce qu'ils
contiennent au moins un produit selon l'une des revendications l a
9.11. Medicaments selon la revendication 10, caracterises en ce qu'ils
sont administres par injections intraveineuse, sous cutanee ou
intramusculaire.
? ?
Display vertical position markers.<br/><br/>This option will display
the relative positions of currently selected key terms within the full
document length.<br/><br/>You can then click the markers to jump to
general locations within the document, or to specific discoveries if
you know whereabouts in the document they occur. [458][_]
Open a preview window.<br/><br/>This window will provide a preview of
any discovery (or vertical marker) when you mouse over
it.<br/><br/>The preview window is draggable so you may place it
wherever you like on the page. [459][_]
[static.png]
[close.png]
Discovery Preview
(Mouse over discovery items)
[textmine.svg] textmine Discovery
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Multiple Definitions ()
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TextMine: Publication Composition
FR2522656
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1. Welcome to TextMine.
The TextMine service has been carefully designed to help you
investigate, understand, assess and make discoveries within patent
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Please use the "Next" button in each case to move to the next step
of the tour (or you can use [Esc] to quit early if you don't want
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2. The main menu (on the left) contains features that will help you
delve into the patent and better understand the publication.
The main feature being the list of found items (seperated into
colour coded categories).
3. Click the Minesoft logo at any time to reset TextMine to it's
initial (start) state.
4. You can select which part of the document you'd like to view by
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You can select "Full Text" to view the entire document.
5. For non-latin languages, (in most cases) full text translations
are available, you can toggle them on and off here.
You can also toggle the inline discovery translations between
English and their original language.
6. The pie chart icon will open a basic statistical breakdown of the
publication.
7. The sort icon allows you to sort the listed categories based on
the number of instances found.
Click to toggle between ascending and descending.
8. You can use the refine box to refine the discovered items in the
sections below.
Simply type what you are looking for, any items that do not match
will be temporarily hidden.
9. The publication has been analysed and we have identified items
within it that fit into these categories.
The specific items found are listed within the category headings.
Click the section header to open that section and view all the
identitfied items in that section.
If you click the checkbox all items in that section will be
highlighted in the publication (to the right).
The best thing to do is to experiment by opening the sections and
selecting and unselecting checkboxes.
10. The main output window contains the publication full text (or part
thereof if selected).
11. The Tools section contains tools to help you navigate the
"discovered" (highlighted) items of interest.
The arrows and counter let you move through the highlighted items
in order.
12. Other tools include a "Preview" option [ [preview.png] ] and the
ability to mark the relative locations of highlighted items by
using the "Marker" option [ [marker.png] ].
Try these out to best understand how they work, and to discover if
they are of use to you.
13. Items selected from the menu on the left will be highlighted in
the main publication section (here in the middle of the screen).
Click them for further information and insights (including
chemical structure diagrams where available).
14. Please experiment with TextMine - you cannot make any permanent
changes or break anything and once your session is closed (you've
log out) all your activity is destroyed.
Please contact Minesoft Customer Support if you have any questions
or queries at: [email protected]
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