close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

bd000102034

код для вставкиСкачать
На правах рукописи
СИДОРОВ
Сергей Павлович
НЕЙГОМЕДИАТОРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ И НЕЙРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРОЯВЛЕНИЯ СУДОРОЖНОГО СИНДРОМА ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ
НОРБОРНАНОМ
14.00.20 - токсикология
03.00.25 - гистология, цитолоптя, клеточная биология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
1И61Ц
Санкт-Петербург
2005
1'аоота выполнена в Военно-мелицинской академии имени С М Кирова
I )а> чные руководители
доктор биаюгических на\'к профессор Новожилова Александра Петровка,
к-андидат медицинских на\'к Иванов Максим Борисович
Официальные оппоненты
доктор медицинских наук, профессор Головко Александр Иванович,
доктор медицинских на\'к, профессор Обухов Дмитрий Константинович
Ведущее учреждение' ГОУ ДПО Санкт-Петербургская медицинская академия
последипломного образования
Зашита диссертации состоится « /5>, ноября 2005 г.
в
'^
часов на
заседании диссертационного совета Д 215.002 I I при Военно-медицинской
академии (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, дом 6)
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военномедицинской академии им. С М Кирова.
Автореферат разослан «_^» 01аября 2005 г
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук про<1)ессор
Ищенко Борис Ионович
ЗШ^
instil
Актуальность нсслелования. Экзо-иис-5,6-дихлор-2,2-диииан - 3,3-бис (трифторметил) бицикло /2.2.1 гептан (норборнан) характеризуется наличием жесткого
гетероцикла в своей структуре и способностью необратимо блокировать хлорионофор ГАМКд-реиепторного комплекса (Головко А.И. с соав!., 1996; Hamon А. et
al., 1998; Moody Е.А. et al., 1991; Rauh J . J . et a!., 1997). Интоксикации необратимыми
ГАМК-литиками, в том числе норборнаном, в отличие от обратимых блокаторов ха­
рактеризуются выраженным полиморфизмом клинических проявлений, большей
опасностью острых и хронических отравлений, низкой эффективностью медикамен­
тозной терапии судорожного синдрома (Гладких В.Д с соавт., 2001).
Очевидно, что разработка средств профилактики и терапии отравлений ГАМКлитиками, и в частности норборнаном, возможна не только на основе знания меха­
низмов токсического действия и процессов детоксикации, но и на понимании вклада
различных нейромедиаторных систем и их взаимодействия при формировании су­
дорожного синдрома. В настоящее время достигнут значительный прогресс в изуче­
нии нейрохимических и нейрорецепторных механизмов судорожной активности,
вызванной блокаторами хлор-ионных каналов ГАМКл-рецепторов (Астров В.В.,
Куценко С.А., 1990; Гладких В.Д. с соавт., 2003; Гладких В.Д. с соавт., 2004; Глад­
ких В.Д., Колосова Н.А., 2000; Головко А.И. с соавт., 1996; Иванов М.Б., 1998; Космачев А.Б. с соавт., 1999; Свидерский О.А., 1996; Федонюк В.П. с соавт. 2001). Од­
нако информация об этих механизмах неполная, в ряде случаев противоречивая. Ос­
тается невыясненной роль различных рецепторов медиаторных систем головного
мозга в формировании судорожного синдрома. Знание нейрорецепторых механиз­
мов развития судорожньпс состояний при интоксикации ГАМК-литиками, в том
числе норборнаном, позволит осуществлять целенаправленную медикаментозную
коррекцию средствами с заданным нейрохимическим профилем.
Нейроморфологическим исследованиям интоксикации норборнаном посвящено
ограниченное количество работ. Исследователей при проведении морфологического
анализа привлекают преимущественно судорожные состояния, вызванные леталь­
ными дозами конвупьсантов (Гладких В.Д. с соавт., 2004; Головко А.И. с соавт., 1996;
Плужников Н.Н. с соавт., 2004; Семенов Е.В. с соавт., 2001). Однако, следует учиты­
вать, что развитие судорожного синдрома вне зависимости от химической природы
конвульсантов характеризуется сходными структурными изменениями в головном
мозге (Плужников Н.Н. с соавт., 2004). Очевидно, что сходство проявлений в данных
случаях обусловлено типовыми неспецифическими процессами (гипоксией, асфик­
сией и нарушениями церебральной гемодинамики и др.), неизменно сопровождаю­
щими генерализованные судороги (Гладких В.Д. с соавт., 2004). Изучение нейроморфологических изменений, вызванных интоксикациями в дозах, близких к мини­
мально-судорожным (0,7-0,8 DLso), возможно, позволит выявить специфические
процессы, связанные с особенностями действия норборнана.
Целью иастояшей работы явилось изучение нейрорецепторых механизмов
формирования судорожного синдрома, морфофункциональных изменений головного
мозга при интоксикации норборнаном и определение на основании полученных ре­
зультатов перспективных подходов к эксп
и_1ерашци:удорожного состояния.
РОС. НАЦИОНАЛ
И!Ал>t ( \>
СПетч»*»г ,7.1X4
■II
I
——м—^^^ifcjii»
л
-2Задачи исследования:
1. На экспериментальной модели норборнан-пикротоксинового киндлинга
провести фармакологический анализ участия NMDA-, М-холино-, ГАМК|,- и дофа­
миновых рецепторов в формировании судорожного синдрома.
2. Оценить противосудорожиую активность препаратов различных фармако­
логических групп на модели норборнан-пикротоксинового киндлинга
3. По результатам тестирования на модели норборнан-пикротоксинового
киндлинга выявить наиболее эффективные средства и использовать их в качестве
препаратов экспериментальной терапии интоксикации норбораном тяжелой и край­
не тяжелой степени у крыс.
4. Выявить структурные изменения в гиппокампе и височной области коры
головного мозга крыс при интоксикации норборнаном в минимально-судорожных
дозах.
Положения, выносимые на защиту:
1. В формирование судорожного синдрома, вызванного норборнанпикротоксиновым киндлингом, наряду с рецепторами ГАМК-ергической, в различ­
ной степени вовлечены рецепторы дофамин-, холин- и глутаматергической нейромедиаторных систем.
2. При экспериментальной комплексной медикаментозной терапии судорожно­
го синдрома, вызванного интоксикацией норборнаном, целесообразно применение
средств, вызывающих снижение активности NMDA-, холино- и дофаминовых ре­
цепторов, усиление активности ГАМКв-рецепторов, а также применение антиоксидантов, антигипоксантов и блокаторов кальциевых каналов.
3. Интоксикация норборнаном в минимально-судорожных дозах сопровождает­
ся выраженными патологическими изменениями в структурах головного мозга. В
связи с этим отравления в минимально-судорожных и близких к ним дозах также
требуют активной медикаментозной терапии, как и судорожные состояния, вызван­
ные токсикантом в летальных дозах. Целью терапии в данном случае является уси­
ление резистентности и жизнеспособности нервных клеток, изменения которых но­
сят обратимый характер.
Научная новизна. Обнаружена различная степень участия NMDA-, М-холино-,
ГАМКв- и дофаминовых рецепторов в формировании судорожного синдрома при
норборнан-пнкротоксиновом киндлинге. Проведен скрининг препаратов различных
фармакологических групп с целью выявления антиконвульсивного эффекта на судо­
рожную активность, вызванную норборнан-пикротоксиновым киндлингом. Впервые
описаны морфологические изменения в гиппокампе и височной области коры го­
ловного мозга крыс при интоксикации норборнаном в минимально-судорожных до­
зах, выявленные методами светооптической и электронной микроскопии. Определе­
ны перспективные подходы к экспериментальной терапии судорожного состояния,
возникающего при интоксикации норборнаном.
Реализация результатов исследования. Материалы диссертационного иссле­
дования использованы при проведении научных исследований и экспериментов в
учебном и научном процессах на профильных кафедрах ВМедА, Г И У В МО РФ и
Военно-медицинских институтах.
Апробация работы. Основные материалы доложены на 1-ом съезде военных
врачей медико-биологического профиля ВС РФ «Военная профилактическая меди-
-3цина Прюблемы и перспективы); (СПб.. 2002), научно-практической конференции.
посвященной 40-летию НИИГПЭЧ. «Медико-гигиенические аспекты обеспечения
работ с особо опасными химическими веществами» (СПб., 2002), международно.м
симпозиуме «Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением
химического оружия» (Волгоград, 2003), конференции «Медико-биологические
проблемы противолучевой и противохимической защиты» (СПб., 2004), конферен­
ции «Особенности медицинского обеспечения вооруженных сил в современных ус­
ловиях» (Ереван, 2004) и на межкафедральных совещаниях ВМедА (2003 г, 2004
г.).
Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 22 науч­
ные работы.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 162 страницах маши­
нописного текста, содержит 20 рисунков и 10 таблиц. Работа состоит из введения, 4
глав, включающих обзор литературы, описание методик исследования, результаты
собственных наблюдений, об<у5кпение полученных результатов, выводов и списка
литературы. Список литературы содержит 283 литературных источника, из которых:
84 - оггечественные и 199 - иностранные.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты были выполнены на 388 мышах и 180 крысах. Фармакологиче­
ский анализ судорожной активности проводили на белых половозрелых мышахсамцах массой 20-25 г на модели норборнаи-пикротоксинового киндлинга (НПК).
Утром в день эксперимента животные интраперитонеально получали норборнан
(НБ) в дозе 0,8 D L » , затем через 6 часов вводили пикротоксин (ПТ) в дозе 4 мг/кг
При оценке участия различных нейромедиаторных систем в формировании
судорожного синдрома, вызванного норборнан-пикротоксиновым киндлингом,
использовали антагонисты NMDA-рецепторов: МК-801 (Sigma, США; 2 мг/кг за 30
мин до ПТ), мемантин (Sigma, США; 20 мг/кг за 30 мин до ПТ), сульфат магния
(АЙ-СИ-ЭН 0!сгябрь, Россия; 50 и 100 мг/кг за 10 мин до ПТ); агонисты Мхолинорецепторов: ареколин (Sigma, США; 15 мг/кг за 5 мин и через 5 мин после
ПТ), оксотреморин (Sigma, США; 1 мг/кг за 5 мин и через 5 мин после ПТ);
антагонист М-холинорецепторов - атропина сульфат (Верофарм, Россия; 0,1 и 1
мг/кг за 10 мин до ПТ); агонист дофаминовых рецепторов -апоморфииа
гидрохлорид (Sigma, США; 0,5 и 5 мг/кг за 15 мин до ПТ); антагонист дофаминовых
рецепторов - галоперидол (Гедеон Рихтер, Венгрия; 0,25, 1 и 3 мг/кг за 45 мин до
ПТ); агонисты ГАМКв-рецепторов: баклофен (Sigma, С Ш А ; 5 мг/кг за 10 мин до
ПТ), фенибуг (Sigma, США; 100 мг/кг за 10 мин до ПТ).
На модели НПК также проводили оценку влияния на параметры судорожной
активности следующих фармакологических препаратов- этилового спирта (0,4 и 2
г/кг за 10 мин до ПТ), антиоксидаята - мексидола (Фармасофт, Россия; 50 и 200
мг/кг за 30 мин до ПТ), блокатора кальциевых каналов - нимодипина (в составе
препарата «Ннмотоп», Bayer AG, Германия); 4 мг/кг за 10 мин до ПТ), блокатора
Ка*-каналов - лидокаииа (EGIS, Венгрия; 5 мг/кг за 10 мин до ПТ), ингибитора моноаминоксидазы А - пиразндола (Дальхимфарм ОАО, Россия; 4,4 мг/кг за 10 мин
до ПТ). антиконвульсанта широкого спектра - вальпроата натрия (Sanofi-Winthrop
Industrie, Франция; 100 мг/кг за 30 мин до ПТ). церебролизина ( E B E W E Pharma, Ав-
-4стрня. I мл/кг за 30 мин до ПТ), дельта-сон индуцирующего пептида (НИЦ «Ком­
кон)^ 0,3 мг /кг за 30 мин до ПТ), агониста бензодиазепиновых рецепторов - диазепама (в составе препарата "Седуксен", Gedeon Richier, Венгрия. 0,5 мг/кг за 10 мин
до ПТ), гидроксибутирата натрия (Дальхимфарм ОАО, Россия; 500 мг/кг за 10 мин
ДоПТ).
Экспериментальную терапию интоксикации норборнаном тяжелой и крайне тя­
желой степени и нейроморфологические исследования проводили на белых крысахсамцах массой 150-200 г В качестве средств экспериментальной терапии отравле­
ния НБ тяжелой и крайне тяжелой степени были выбранные наиболее эффективные
по результатам тестирования на модели НПК: гидроксибутират натрия в дозе 500
мг/кг за 30 мин до НБ (0,2 мг/кг; 2 DLjo), а также в дозе 300 мг/кг при первых судо­
рогах, вызванных инъекцией НБ (0,3 мг/кг, 3 DL<o); диазепам в дозе 5 мг/кг за 10
мин до НБ (0,2 мг/кг; 2 DLjo), а таже при первых судорогах, вызванных токсикантом;
феназепам в дозе 5 мг/кг за 10 мин до НБ (0,2 мг/кг: 2 DL»), а также при первых су­
дорогах, вызванных токсикантом.
Судорожную активность оценивали по методу Г.Н. Крыжановского и соавторов
(1985). Фиксировали следующие показатели- время развития судорог 1-2 и 3-4 сте­
пени. Для облегчения регистрации показателей в наших экспериментах паттерны су­
дорожной активности в 1 и 2 балла объединяли и обозначали как "судороги 1-ой
степени". Соответственно, судорожную активность в 3-4 балла обозначали как "су­
дороги 2-ой степени". Регистрировали время развития судорог 1-ой и 2-ой степени,
гибель животных. Также регистрировали гибель животных и учитывали поведенче­
ские изменения в период после введения используемых веществ, особенности про­
текания предсуцорожного периода и судорожного синдрома.
Гистологическое и электронно-микроскопическое исследования были выполне­
ны на белых крысах-самцах. Для проведения исследования экспериментальные жи­
вотные были распределены на три группы (по 3 крысы в каждой): 1) получали норборнан в дозе 0,1 мг/кг (0,7-0,8 DLso) в растворе диметилсульфоксида (ДМСО; 0,1
г/кг); 2) получали ДМСО в дозе 0,1 г/кг; 3) контрольная группа, которой вводили фи­
зиологический раствор NaCl. Введение 2-ой группы было обусловлено отсутствием
нейроморфологических исследований, посвященных влиянию ДМСО на головной
мозг.
Крыс декапитировали под воздушно-эфирным наркозом спустя 6 часов после
инъекции НБ (животные групп №2 и ЛГгЗ - спустя 6 часов после введения раствора
диметилсульфоксида (ДМСО) и физиологического раствора NaCl, соответственно),
быстро извлекали головной мозг и разрезали на фронтальные срезы толщиной 1-1,5
мм и фиксировали в 2,5 % растворе глутаральдегида на 0,1 М какодилатном буфере
(рН = 7,4) при температуре 4° С. Через 20 мин из правого полушария мозга выделя­
ли блоки гиппокампа и височной коры, которые дополнительно фиксировали в све­
жем растворе глутаральдегида в течение 1,5-2 часов. Затем биоптаты промывали
трехкратно в какодилатном буфере по 10 минут в каждой порции. Дофиксацию про­
водили в 1 % растворе четырехокиси осмия в течение 1,5-2 часов Промыв трех­
кратно какодилатным буфером, осуществляли проводк>' в охлажденных растворах
этилового спирта восходящей концентрации при комнатной температуре В даль­
нейшем биоптаты подвергали дегидратации в абсолютном ацетоне в течение 30 мин
и проводили заливку образцов ткани головного мозга эпоксидной смолой После
-э-
проведения дегидратации кусочки ткани пропитывали смесью эпоксидных смол,
разбавленных ацетоном Затем оиоптаты пропитывали чистой эпоксидной смолой в
течение 4 часов при комнатной температуре и заливали в новую порцию смолы. По­
лимеризацию проводили при температуре 37 ° С в течение 24 часов, затем при тем­
пературе 60 " С в течение последующих 2 суток. Из полученных блоков изготавлива­
ли полутонкие (1 мкм) срезы на ультратоме L K B V (Швеция). Для предварительной
оценки срезы фиксировали на предметных стеклах и окрашивали метиленовым си­
ним. Морфологический анализ ткани гиппокампа и височной коры с микрофото­
съемкой выполняли на фотомикроскопе фирмы «OPTON» (ФРГ). Ультратонкие сре­
зы толщиной 60-75 нм на сеточках контрастировали последовательно в растворах
уранилацетата и цитрата свинца (Миронов А.А с соавт., 1994). Фотосъемку проюводилн на электронных микроскопах J E M ЮОСХ и Hitachi-300. Для морфологиче­
ского анализа использовали фотографические отпечатки электронограмм с конеч­
ным увеличением от 4 000 до 50 000 раз.
Достоверность различий количественных признаков с соответствующей
контрольной группой оценивали по U-критерию Манна-Уитни при уровне
статистической значимости р<0,05. Достоверность различий летальности с
соответствующей контрольной группой оценивали с помощью двустороннего
точного критерия Фишера.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты фармакологического анализа судорожной активности, вызванной
норборнан-пикротоксиновым киндлингом.
Участие NMDA-рецепторов в судорожной активности, вызванной НПК.
NMDA-рецепторы обеспечивают усиленную и длительную активацию нейронов, в
связи этим им отводится особая роль в патогенезе судорожных состояний. Резуль­
таты экспериментов по оценке участия NMDA-рецепторов в судорожной активно­
сти, вызванной Н П К , представлены в таблице I. Нами обнаружено, что в дозах 50 и
100 мг/кг MgS04 не изменял параметры судорожной активности, что, вероятно, свя­
зано с выраженной активацией постсинаптических АМРА- и каинатных рецепторов
в участках рецепции птутамата, приводящей к деполяризации постсинаптической
мембраны и полному удалению ионов Mg^* из соответствующих центров на NMDAрецепторах (Wong Е.Н. et al., 1986).
При оценке влияния на судороги селективного блокатора каналов NMDAрецепторов - МК-801 (2 мг/кг за 30 мин до ПТ) и низкоаффинного неконкурентного
блокатора - мемантина (20 мг/кг за 30 мин до ПТ) у экспериментальных животных
после введения веществ наблюдались гиперкинезы, гиперактивность, атаксия, сте­
реотипия и миорелаксация. Оба препарата оказывали практически одинаковое влия­
ние на судорожную активность: не влияя на время развития судорог 1 и 2 степени,
устраняли тонический компонент судорог, клонические судороги при этом длились
более 3 ч после введения веществ.
Оценка влияния мемантина и МК-801 на показатели летальности с помощью
двустороннего точного критерия Фишера не показала достоверных различий в срав­
нении с контрольными группами (р=0,17) и (р=0,1), соответственно. Однако обра­
щала на себя внимание выраженная тенденция к уменьшению уровня оцениваемого
показателя
Z*
-6Таблица )
Результаты влияния вешеств, тропных к NMDA-рецепторам,
на судорожную активность, вызванную НПК
Исследуемые
Время
Время
Время
1 Летальность
вещества
наступления су- наступления су- | наступления 1
' дорог 1 степени дорог 2 степени |
смерти
1
1
(мин)
(мин)
1
(мин)
1
Магния сульфат
8,61±2,42
6/6
9,92±2,29
22Д5=2,85
(50 мг/кг) за 10 мин
(8Д1±5,11)
(1339±4,10)
(5/6)
(24,98±5.92)
доПТ
Магния сульфат
8,14±4,07
5/6
6.78±3,12
21,15i8,6
(100 мг/кг) за 10
(7,97±1,99)
(6/6)
(24,1Ь7,57)
(5,75±122)
миндоПТ
МК-801 (2 мг/кг) за
0/6
10,15£U2
1430±437
(8,43±338)
(9,16±2,19)
(20,26*11,07)
30 мин доПТ
(5/6)
1/7
Мемантин
731±2,41
83±2,52
23,43
(7/7)
(20 мг/кг) за 30 мин
(7,56±1,38)
(18,05x335)
(73aiU7)
доПТ
Примечание. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
Кроме того, наблюдалось резкое укорочение и меньшая выраженность рефрак­
терного периода между пароксизмами судорог. Полученные нами результаты позво­
ляют предположить, что при НПК, развивается гиперактивация NMDA-рецепторов,
которая вызывает формирование преимущественно тонической фазы судорог. С дру­
гой стороны, именно гиперактивация NMDA-рецепторов через формирование тони­
ческого компонента судорог запускает последовательность событий, которые приво­
дят к прекращению судорожной активности и развитию ПОСТКОНЕ^ЛЬСИВНОЙ депрес­
сии.
Участие М-холинорецепторов в судорожной активности, вызванной НПК. При
использовании в качестве фармакологического зонда ареколина в дозе 15 мг/кг было
обнаружено неоднозначное влияние вещества на оцениваемые параметры, завися­
щее от времени введения. При предварительной (за 5 мин до ПТ) инъекции регист­
рировалось достоверное увеличение времени развития судорог 1-ой (р<0,01) и 2-ой
(р<0,05) степени без изменения показателей летальности, однако при введении через
5 мин после ПТ подобного эффекта не наблюдалось (таблица 2).
Использование оксотреморина в дозе 1 мг/кг показало отсутствие различий ме­
жду исследуемыми показателями в опытной и контрольной группах, как при пред­
варительном введении, так и через 5 мин после ПТ. В связи с выраженным тремо­
ром, наблюдаемым у животных, получавших М-холиномиметики (кроме предвари­
тельного введения ареколина), время латентного периода судорог не оценивали. При
оценке влияния атропина было обнаружено статистически значимое увеличение
времени развития судорог 1-ой (р<0,05) и 2-ой (р<0,05) степени, снижение леталь-
-7ности в доте 0,1 мг/кг: в дозе 1 мг/кг атропин не оказывал влияния на исследуемые
показатели.
Учитывая непродолжительное действие ареколина (специфический тр)еморогенный эффект длился приблизительно 10 мин и прекрашаелся до развития судо­
рог), защитный эффект при предварительной инъекции, вероятно, развивается как
результат десенситизации М-холинорецепторов, реализуемый по принципу отрица­
тельной обратной связи. При введении ареколина через 5 мин после П Т , а также оксотреморина (треморогенный эффект сохранялся более 20 мин), когда конвульсии
возникали на фоне действия вешеств, данный механизм маловероятен. Полученные
результаты позволяют предположить, что активация М-холинорецепторов играет
определенную роль в реализации судорожной активности при Н П К .
Таблица 2
Результаты влияния веществ, тропных к М-холинорецепторам,
на судорожную активность, вызванную Н 1 Ж
Время
Время
Время
Исследуемые
Леталь­
наступления су­
вешеспа
наступления
наступления
ность
дорог 1 степени судорог 2 сте­
смерти
(мин)
Ареколии
(15мгЛ(г)за5 мин
аоГТГ
Арекояин
(15 мхЛсг) через 5
мин после ТТГ
Оксслреморин
(1 MiVkr) за S мин
доПТ
Оксслреморин
(1 мг/кг) через 5
мин после П Т
Атропина сульфат
(0,1 мг/кг) за 10
миндоПТ
Атропина сульфат
(1 мг/кг) за 10 мин
ДоПТ
пени (мин)
(мин)
23,05±6,51»*
(9,05±3,09)
2534±6ДЗ*
(12,58±4,15)
30,46± 17,43
(24,03i9^7)
4/6
(4/6)
не оценивали
(12,02±1,45)
9,47±1,46
(12Д4±1,45)
26,11±2,08
(30,46±4,44)
(5/6)
не оценивали
(9^8±2,16)
15,13±132
(1233±3,47)
(4132±12,22)
42,10*14,04
5/6
(6/7)
не оценивали
(12,02±1,45)
1238±03
(12,24±1,45)
273±1Д
(30,46±4,44)
7/7
(5/6)
10,51 ±037*
(8,02±0,51)
13,44±1,02*
(9,01dk2,04)
18,07±10,43
(20,13±11,46)
5/10
(5/6)
7,47±2,22
833±2,16
(9,40*2,08)
33,05± 18,42
(38,17*25,57)
5/6
(4/6)
(7,404037)
7/7
Примечание. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в грутте.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
*р<0,05; **р<0,01 в сравнении с контролем.
Участие дофаминовых рецепторов в судогюжной активности, вызванной Н П К .
Изч-чение роли рецепторов дофамина в формировании судорог на модели Н П К по­
казало следующие результаты представленью в таблице 3.
-8Апоморфина гилрохлорид в дозах 0,5 и 5 мг/кг, введенный за 15 мин до П Т , не
оказывал достоверного эффекта на регистрируемые параметры судорожной актив­
ности и летальность в группах
Таблица 3
Результаты влияния веществ, тройных к дофаминовым рецепторам,
на судорожную активность, вызванную Н П К
Исследуемые
Время
Время
Время
Леталь­
вещества
наступления
судорог 1 сте­
пени (мин)
11,17±ЗД2
наступления
судорог 2 сте­
пени (мин)
15,16±5,04
ность
пифохлорид
( 0 ^ мг/кг) за 15
(11,16±332)
(12,57±4,П)
наступле­
ния смерти
(мин)
39,47±16,14
(30,55±3J25)
гидрохлорнд
1232±1,43
(П,16±332)
1425±U7
(12,57±4,11)
(30,55±3^5)
(3/6)
8,69±3,13
(7,(»±1,07)
(8,lfttl,12)
10,01±3,П
27,1W6,89
23,54±6,02
(12'12)
Аломорфина
миндоПТ
Апоморфина
(5
мг/кг) за 15 мин до
ГШоперидол
(0Д5 мг/кг) за 45
мин до П Т
Галоперидол
(1 мг/кг) за 45 мин
доПТ
Галоперидол
(3 мг/кг) за 45 мин
доПТ
1038±2,10
27Д6± 16,05
4/6
(3/6)
5/6
6/6
6/6
10,59±2^7
(8,45±3,15)
(9,1^2,45)
28,]4±935
(30,03*6,32)
(6/6)
12,17±2,46*
17,4(Ш,50
(13;28±4,46)
49,51
(49,40)
(2/6)
(8,00±3,17)
ИЬ
Примечание. В фафе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
*р<0,05 в сравнении с контролем.
Использование галоперидола в дозах 0,25 и 1 мг/кг за 45 мин до П Т также не
оказывало влияния на оцениваемые параметры. Однако в дозе 3 мг/кг галоперидол
достоверно (р<0,05) увеличивал время развития судорог I степени и нормализовал
поведенческие расстройства в предсудорожный период, не влияя на остальные пока­
затели. На основании данных литературы и собственных результатов можно пред­
положить существование гиперактивности дофаминергической системы при инток­
сикации блокаторами Х И К , связанной преимущественно с рецепторами 2-го подти­
па. Гиперактивность системы дофамина возникает вследствие устранения тониче­
ского тормозного контроля дофаминергических нейронов ГАМК-ергической систе­
мой и приводит к развитию симптомокомплекса, определяющего, по крайней мере,
частично, клиник>' интоксикаций субконвульсивными дозами, а также начальный
•9период н характер первичных судорожных реакций при интоксикациях конвульсив­
ными дозами.
Участие ГАМК{.-реиепторов в судорожной активности, вызванной НПК Полу­
ченные результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4
Результаты влияния веществ, тропных к ГАМКв-рецепторам,
на судорожную активность, вызванную НПК
Время
Время
I
Время
Исследуемые
Летальнаступления
наступления | наступления
вещества
судорог 1 сте- судорог 2 сте-1
смерти
пени (мин)
пени (мин) I
(мин)
13^2±2Д5*
Бакпофен (5 мг/кг) за
19,4fttl^9**
42,10±4,37»
ЪП
(9,02±038)
(1032i2.49)
ЮминдоПТ
(28,44±4Д5)
(5/7)
3\7
15,45±2,42**
Фенибуг (100 мгУкг)
32,!9±8,03
19,03±4^5*
(28.44±4Л5)
за ЮминдоПТ
(9.02±038)
(1032±2.49)
J^HL
Примечание. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в фуппе.
В скобках представлены показатели контрольной фуппы.
•р<0,05; **р<0,01 в сравнении с контролем.
Предварительное введение баклофена (5 мг/кг) и фенибута (100 мг/кг) оказыва­
ло практически одинаковое влияние на параметры судорожной активности. Обна­
ружено статистически значимое увеличение времени развития судорог 1 и 2 степени
(для баклофена также времени гибели), уменьшение летальности.
Полученные результаты подтверждают мнение, что наиболее важный эффект
ГАМК - снижение нейрональной активности опосредуется через оба подтипа
ГАМК-рецепторов (ГАМКд и Г А М К Б ) . Данный феномен следует рассматривать
биологически целесообразным, т.к. при снижении в результате тех или иных влия­
ний ГАМКА-опосредованного торможения усиление активности ГАМКв-рецепторов
способно до некоторой степени компенсировать вызванный дисбаланс, что увели­
чивает степень надежности функционирования ГАМК-ергической системы в целом.
Оценка противосудорожной активности препаратов различных Фармакологаческих групп на модели НПК. Результаты тестирования на модели НПК показали, что
этанол в дозе 0,4 г/кг не оказывает влияния на судорожную активность, однако в до­
зе 2 г/кг замедляет развитие судорог 1-ой (р<0,01) и 2-ой (р<0,01) степени, а также
несколько уменьшает летальность в экспериментальной группе. Полученные ре­
зультаты представлены в таблице 5.
Учитывая важную роль усиления процессов свободно-радикального окисления
(Бурякова Л.В., Пшёнкина Н.Н., 2001; Гладких В.Д. и соавт., 2004) в патогенезе от­
равления антагонистами ГАМК, была проведена оценка эффективности мексидола
на модели НПК. Полученные результаты представлены в таблице 6 При введении
мексидола в дозе 50 мг/кг за 30 мин до ПТ обнаружена тенденция к уменьшению ле­
тальности (5/7) в сравнении с контрольной группой (7/7), статистически значимое
увеличение времени развития судорог 1-ой (р<0.01) и 2-ой степени (р<0.05), а также
J*
- JO-
меньшая выраженность поведенческих проявлениГ{ сулорожнон активности.
Таблица 5
Резл'льтаты влияния этилового спирта
на судорожную активность, вызванную НПК
Время
Исследуемые
Время
Время
I Летальнаступления су­
препараты
наступления
наступле- \ носгь
дорог 1 степени судорог 2 сте- ния смерти
(мин)
пени (мин)
(мин)
U
Этанол (0,4 г/кг) j
9,55±1,05
6/6
26,47±2Л4
10,42±1,05
за 10 мин до ПТ ! (8Л^1Д5)
(25,51 ±2.49)
(6/6)
(8.56±0J9)
Этанол (2 г/кг) за I 13,41±1,01**
14,18±1,04**
4/6
36,1 ±6,24
ЮминдоГГГ
\ (8.1fal^5)
(8,56±0,39)
(6/6)
(25.51±2.49)
Примечание. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
**р<0,01 в сравнении с контролем.
Применение мексидола в дозе 2(Ю мг/кг также показало статистически значимое
увеличение времени развития судорог 1-ой (р<0,05) и 2-ой степени (р<0,05). однако
при этом обращает на себя внимание выраженное, но статистически незначимое ус­
корение развития летальных исходов (р=Ю,1) в сравнении с контролем, что, вероятно,
связано с проявлением токсических свойств самого препарата в данной концентра­
ции.
Таблица 6
Результаты влияния мексидола на судорожную активность,
вызванную Н П К
Время
Летальность
Исследуемые
Время
Время
претщряпл
наступления
наступления
наступле­
судорог 1 сте­ судорог 2
ния смерти
степени
пени (мин)
(мин)
(мин)
Мексидол (50 мг/кг) 13,08±0,49**
14,34±1Д2*
36,49±6.50
5П
за 30 мин до ПТ
(8,58±0,46)
(10ДЗ±0,49) (34,54±5.42)
(7/7)
Мексидол
(200
11,53±0,45»
14,46±1^И
22Д0±737
5\6
мг/кг) за 30 мин до
(848±0,46)
(10,23iO,49) (34,54±5.42)
(7/7)
ПТ
Примечание. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
*р<0,05; •♦р<0,01 в сравнении с контролем.
С целью оценки противосудорожной эффективности пептидных препаратов при
судорогах, вызванных НПК. нами были использованы церебролизин н ДСИП (таб­
лица 7). Полученные результаты показали отсутствие влияния церобролнзина (1
мл/кг) и ДСИП (300 мкг/кг) на судорожную активность на модели НПК при предва-
- IIрительном ввсдеини за 30 мин до ПТ.
Таблица 7
Результаты влияния пептидных препаратов на судорожную активность,
вызванную НПК
Исследуемые
препараты
Время
наступления
сущюг 1 сте­
пени (мин)
10,53±4Д4
Церебролизин
(10 мл/кг) за 30 мин (10,45±1,56)
доГГГ
9,42±4,24
ДСИП (0,3 мг/кг) за
30 мин до ПТ
(9,46tl,75)
ДСИП (0,6 мтУкг) за
11,55±3,58
30 мин до ПТ
(8,43±3,38)
Время
Время
наступления су­ наступления
дами 2 степени
смерти
(мин)
(мин)
14,24±4,7
43,48±30^4
(П,54±3,17)
(27,48±14,58)
9,5±5Д5
(11,84±4,46)
14±5,44
(9,16t6,19)
21,17±7,02
(24.92±8,84)
33,11± 10,93
(20Д6±11,07)
Леталь­
ность
4/6
(5/6)
5/6
(7/10)
3/6
(4/6)
Примечание. В фафе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной фуппы.
В отдельной серии экспериментов оценивалось влияние диазепама на судороги,
вызванные НПК. Ряд исследователей рассматривает препараты из группы бензодиазепинов в качестве базисной терапии токсического судорожного синдрома, в том
числе вызванного ГАМК-литиками (Плужников Н.Н. с соавт., 2002; Семенов Е.В. с
соавт., 2004).
Использование диазепама в дозе 0,5 мг/кг на модели НПК показало высокую
противосудорожную активность препарата: высокодостоверное увеличение времени
развития судорог 1-ой (р<0,01) и 2-ой (р<0,01) степени, меньшая выраженность су­
дорожного синдрома. Полученные результаты представлены в таблице 8. При оценке
летальности с помощью двустороннего точного критерия Фишера достоверных раз­
личий в сравнении с контрольной фуппой не обнаружено, однако обращала на себя
внимание выраженная тенденция к уменьшению уровня оцениваемого показателя
(Р=0,1).
При введении у-гидроксибутирата в дозе 500 мг/кг обнаружено статистически
значимое влияние на все исследуемые показатели, что свидетельствует о высокой
противосудорочсной эффективности данного соединения. Полученные результаты
представлены в таблице 8. Хотя при оценке летальности с помощью двустороннего
точного критерия Фишера достоверных различий в сравнении с контрольной фуп­
пой не обнаружено, однако имеется выраженная тенденция к уменьшению уровня
оцениваемого показателя (р=0.1). Очевидно, что значимый противосудорожный эф­
фект, по-крайней мере частично, связан с активацией ГАМКв-рецепторов, не исклю­
чается также и влияние, опосредуемое через систему специфических для угидроксибутирата рецепторов. Кроме того, следует принимать во внимание и немедиаторные, метаболические эффекты I I Ь
-12Пиразидол (пирлиндол) - антилепрессант. приводит к усилению активности норадренергической и серотонинершческой медиации. При введении пиразидола в до­
зе 4,4 мг/кг за 10 мин до ПТ обнаружено умеренное защитное алияние в отношении
летальных исходов (2/6) в сравнении с контролем (5/7) без влияния на другие пара­
метры судорожной активности (таблица 8). Имеются основания полагать, что наблю­
даемый эффект может быть связан с усилением норадренергической медиации.
Результаты использования блокатора кальциевых каналов (БКК) - нимодипина
представлены в таблице 8. Нами обнаружено, что при введении препарата в дозе 4
мг/кг за 10 мин до ПТ достоверно увеличивался латентный период судорог (р<0,05)
без влияния на другие параметры. Приведенные факты указывают на возможную
целесообразность применения БКК наряду с противосудорожными препаратами в
комплексной терапии интоксикации ГАМК-литиками.
Таблица 8
Результаты влияния препаратов различных фармакологических фупп
на судорожную аиивность, вызванную НПК
Исследуемые
Время
Время
Время
Леталь­
препараты
наступления
наступления су­
наступления
ность
судорог 1 сте­ дорог 2 степени
смерти
пени (мин)
(мин)
(мин)
Диазепам (0,5 мг/кг) 19,45±ЗДЗ**
24,95±2,22**
0/6
за 10 мин до ПТ
(7,81±1,58)
(14,09±4,59)
(30,71±2,22)
(5/6)
Гидроксибутират
20,lftt3,00***
26,53±3,57**
0/6
натрия (500 мг/кг) за
(9,05±3,09)
(24,03*9,27)
(4/5)
(12,58±4,15)
10 мин до ПТ
2/6
Пиразидол
(4,4
8,56±2,55
10,36±2,59
29,45
мг/кг) за 10 мин до (10,57±3,04)
(12,55±3,24)
(5/7)
(25,08±7ДЗ)
ПТ
12,55±U6*
5/6
Нимодипин (4 мг/кг)
12,37±132
2439±5,19
за 10 мин до ПТ
(10,13±0Д8)
(12,19±1,31)
(24,43±2,58)
(6/7)
9/10
Вальпроат натрия
10Д4±1,02
11,43±1,06
27,58±1,41
(30,13±3,34)
(100 мг/кг) за 30 ми­
(11,32±1,20)
(10/10)
(9,56±1,1)
нут до ПТ
3/6
10Д0±2,45
27,19± 14,50
Лкдокаин (5 мг/кг)
12,17±4,37
за 10 мин до ПТ
(8,86±2,27)
(27,06±13,06)
(3/6)
(8,06±233)
Примечание. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
*р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001 в сравнении с контролем.
При тестировании вальпроата натрия (100 мг/кг за 30 мин до П Т ) и лидокаина
(5 мг/кг за 10 мин) до П Т на модели Н П К не обнаружено влияния на оцениваемые
параметры судорожной активности (таблица 8).
-13Результаты экспериментальной терапии интоксикации норборнаном тяжелой и
крайне тяжелой степени.
Выраженные защитные свойства 7-гидроксибутирата ( Г Т Б ) и диазепама, полу­
ченные по результатам тестирования на модели Н П К , послужили основанием для
проведения ряда экспериментов, в которых оценивалась эффективность профилак­
тического и лечебного введения Г Т Б , диазепама и феназепама при интоксикации Н Б
тяжелой и крайне тяжелой степени.
Применение Г Т Б в качестве средства экспериментальной терапии интоксикации
Н Б тяжелой и крайне тяжелой степени показало, что препарат в дозе 500 мг/кг при
профилактическом введении до инъекции 0,2 мг/кг (2 DLjo) Н Б вызывал статистиче­
ски значимое увеличение времени развития судорог I ч>й и 2-ой степени, не влияя на
летальность в период наблюдения за экспериментальными животными (в течение 2
суток) (таблица 9). В период действия (примерно 60-90 мин) препарат выражено
уменьшал судорожнзоо активность.
Однократное введение исследуемого вещества в дозе 300 мг/кг при первых су­
дорогах, вызванных введением Н Б в дозе 0,3 мг/кг (3 DL50). не изменяло времени
развития судорог 2-ой степени, однако пяти-, шестикратное введение при возобнов­
ляющихся судорогах примерно в 2 раза увеличивало время наступления гибели ж и ­
вотных. При обоих режимах введения уровень летальности не отличался от кон­
трольных показателей.
Таблица 9
Результаты влияния профилактического и лечебного введения
гидроксибутирата натрия при интоксикации Н Б (2-3 D L w )
Время
Время
Время
Исследуемое
Леталь­
вещество
Г Г Б (500 мг/кг) за 30
мин до Н Б (ОД м1Укг)
Г Т Б (300 мг/кг) при
первых
судорогах
однократно на фоне
введения Н Б
(03
мг/кг)
Г Т Б (300 мг/кг) многокартное введение
при повторных
судорогах на
введения Н Б
мг/кг)
наступления су­
дорог 1 степени
(мин)
70410,5**
(394±4,52)
25,58±2Д5
(21±3,52)
наступления
судорог 2 сте­
пени (мин)
31,42*431
(30,5±8,3)
199*5633
(150*61,48)
10/10
(10/10)
24,42*3,56
28,43*6,31
282,4&*6637**
(150*61,48)
10/10
(10/10)
(21±3,52)
101±203*
(652±10,5)
(30,5*83)
наступления
смерти
(мин)
не
оценивали
ность
10/10'
(10/10)'
фоне
(03
Примечание. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
♦р<0,05; ••р<0,01 в сравнении с контролем.
' - летальность на 2-ые сутки
-14ГГБ в дозе 500 мг/кг при профилактическом введении до инъекции 0.2 мг/кг {2
DLjo) НБ вызывал статистически значимое увеличение времени развития судорог 1ой и 2-ой степени, не влияя на летальность в период наблюдения за эксперименталь­
ными животными (в течение 2 суток). В период действия (примерно 60-90 мин) пре­
парат выражено уменьшал суаоражиую активность. Однократное введение иссле­
дуемого вещества в дозе 300 мг/кг при первых судорогах, вызванных введением НБ
в дозе 0,3 мг/кг (3 DLjo). не изменяло времени развития судорог 2-ой степени, однако
пяти-, шестикратное введение при возобновляющихся судорогах примерно в 2 раза
увеличивало время наступления гибели животных При обоих режимах введения
уровень летальности не отличался от контрольных показателей.
Высокая профилактическая и лечебная эффективность l i b при интоксикации
НБ тяжелой и крайне тяжелой степени позволяют рассматривать данное соединение
в качестве препарата выбора в экспериментальной терапии отравления НБ Однако
его использование требует поддержания терапевтически эффективных концентраций
в организме, достигаемое многократным введением.
Применение диазепама с профилактической целью за 10 мин до НБ не влияло
на Время начала судорожных реакций, однако приводило к модификации клиниче­
ской картины интоксикации, проявляющейся в снижении интенсивности судорог у
животных {единичные клонические судороги конечностей), развитии «коматозного»
состояния и гибели животных в более ранние сроки по сравнению с контролем на
17,1 ±0,8 мин (р<0,05). В контроле гибель животных отмечалась на 30,71±2Д2 мин с
момента введения токсиканта. Введение диазепама с лечебной целью, при первых
судорожных паттернах, также приводило к резкому снижению интенсивности судо­
рожных проявлений, но провоцировало быстрое развитие «комы» и гибели живот­
ных на 25,5±3,6 мин (р<0,05). Результаты представлены в таблице 10.
Профилактическое введение феназепама за 10 мин до НБ удлиняло время нача­
ла судорожных реакций у экспериментальных животных, однако сопровождалось
развитием «коматозного» состояния и гибелью животных в более ранние сроки по
сравнению с контролем на 28±1,6 мин (р<0,05). Происходила модификация клиниче­
ской картины интоксикации проявляющаяся в снижении интенсивности судорог у
животных (единичные клонические судороги конечностей), отмечались фасцикуляции. В контрольной группе гибель животных регистрировалась на 71,43±14,5 мин с
момента введения токсиканта. Введение феназепама с лечебной целью, при первых
судорожных паттернах, также приводило к резкому снижению интенсивности судо­
рожных проявлений, но провоцировало быстрое развитие «комы» и гибель живот­
ных на 20,7±1,3 мин (р<0,05).
Полученные результаты, вероятно, связаны со способностью бензодиазепинов
модулировать рецепцию лигандов хлор-ионного канала, что приводит к увеличению
вероятности и скорости взаимодействия молекулы токсиканта с участком связыва­
ния. Эффективность бензодиазепинов в модели норборнан-пикротоксинового киндлинга, видимо, связана со способностью диазепама и феназепама снижать повышен­
ную судорожную готовность у животных к пикротоксину, формирующуюся на фоне
интоксикации норборнаном в дозе 0.8 DLso- Результаты, полученные нами при ис­
пользовании диазепама и феназепама с целью экспериментальной коррекции судо­
рожного синдрома при интоксикации НБ. заставляют пересмотреть сложившиеся
- 15представления о бензодиазепинах как препаратах выбора и требуют дальнейшего
поиска средств, которые могли бы составить основу комплексной терапии.
Таблица 10
Результаты влияния профилактического и лечебного введения
диазепама и феназепама при интоксикации ИБ в дозе 0.2 мг/кг (2 DLs»)
Леталь­
Время
Исследуемые
|
Время
Время
ность,
препараты
| наступления
наступления
наступления
1 судорог 1 сте- судорог 2 сте­
смерти
1 сух
1 пени (мин)
пени (мин)
(мин)
Диазепам (5 мг/кг)
5,6t0,8
10/10
17.1±0.8*
(10/10)
(7,81±1,58)
(I4,09t4,59)
{30,71±2.22)
за 10 мин до НБ
Диазепам при пер­
25,5£5.6»
10/10
7Д2±2,1
(69.0t5,4)
вых судорогах
(9,52±3,4)
(10/10)
(17.1±1,1)
(5 мг/кг)
Фенаэепам (5 мг/кг)
28±1,6*
10/10
18Д±2.2»
2031.9
за 10 мин до НБ
(23,6±434)
(71,43±14.5)
(10/10)
а^ш^)
Фенаэепам при пер­
6,4±2Д
10/10
20,7±13*
вых судорогах
(8,4±U)
(25.2i3.6)
(873±17.7)
(10/10)
(5 мг/кг)
Примечания. В графе летальность в числители указано число погибших живот­
ных, в знаменателе - общее количество животных в группе.
В скобках представлены показатели контрольной группы.
*р<0,05 в сравнении с контролем.
При этом предпочтение следует отдавать препаратам, имеющим широкий
спектр фармакологической активности и влияющим на ключевые звенья патогенеза
интоксикации. К таковым, например, относится гидроксибутират натрия, показав­
ший выраженную эффективность при интоксикации НБ. Данный препарат помимо
влияния на рецепторные механизмы, сочетает в себе свойства нейромодулятора, антигипоксанта и антиоксиданта, что подчеркивает некоторые преимущества его ис­
пользования при интоксикации НБ в сравнении с традиционно применяемыми противосудорожными средствами (бензодиазепинами, барб'итуратами).
Результаты нейроморфологического исследования головного мозга крыс.
Результаты нейроморфологического исследования височной коры и гиппокампа
крыс контрольных ГРУПП. При световой микроскопии в височной коре эксперимен­
тальных животных, получавших ДМСО интраперитонеально в дозе 0,1 г/кг (фуппа
№ 2), в сравнении с контрольной группой (№ 3), которым вводили физиологический
раствор NaCl, обращают на себя внимание изменения со стороны микрососудистого
русла. У всех крыс данной группы обнаружен периваскулярный отек. В височной
коре процент отёчных капилляров в среднем на 40 % больше, чем в контрольной
группой № 3. Степень выраженности отека в разных участках коры и даже в преде­
лах одного поля зрения варьировала от умеренной до значительной. В гилпокампе
также наблюдается периваск)'лярнын отек, однако, менее выраженный. Около ка­
пилляров чаше, чем в норме, располагаются тела нейронов и глиальных клеток.
-16При электронно-микроскопическом исследовании обнар%'жено, что отечность мик­
рососудов обеспечивается за счет навчтсания и увеличения в объеме и числе перикапиллярных астроцитарных отростков Данные изменения, вероятно, обуслоазены
высокой мембранной проницаемостью ДМСО (Иванов О Л и др., 1983; Kolb К.Н et
а!.. 1967), воздействием на проницаемость липидных слоев биологических мембран
путем увеличения числа компонентов в жидкокристаллической области мембраны и
образования донорно-акцепторного комплекса с компонентами мембран (Жданов
А.Ю., 1983), а также способностью растворителя транспортировать вещества через
неповрежденные мембраны (Jacob S W., Hershler R.S., 1986).
В большинстве гпиальных отростков, примыкающих к базальной мембране,
присутствуют мелкие и средней величины единичные вакуоли Базальная мембрана
капилляра равномерна по ширине и плотности. В эндотелиоцитах часть митохонд­
рий увеличена в размере, в цитоплазме просматриваются свободные рибосомы и
мелкие везикулы.
В височной области во всех слоях коры встречаются нейроны с умеренно на­
бухшими митохондриями. Их матрикс имеет очаговые просветления, но целостность
наружной мембраны сохраняется. Соотношение нормохромных и гиперхомных ней­
ронов в новой коре и в гиппокампе остается таким же, как и в группе живсггаьгх,
которым вводили физиологический раствор NaCl. В перикарионах как пирамидных,
так и непирамидных корковых нейронов наблюдается расширение цистерн фанулярной эндоплазматической сети и комплекса Гольджи. В некоторых клетках отме­
чено появление так называемых «парных мембран», которые образованы двумя цис­
тернами гранулярной эндоплазматической сети с тесно соприкасающимися мембра­
нами, сбросившими рибосомы. Протяженность соприкосновения цистерн варьирует
и не зависит от их длины. Цистерны с парными мембранами чаще всего неравно­
мерно расширены и, установив контакт, расходятся и даже могут ветвиться. По мне­
нию ряда исследователей такие образования являются результатом обратимой моди­
фикации синтезирующей структуры.
Изменения нервных элементов в исследованных полях гиппокампа выражены в
меньшей степени, чем в височной области новой коры. Большинство нейронов ос­
таются интактными. Между дендритами, принадлежащими разным нейронам, обна­
руживаются специализированные дендро-дендритические контакты, имеющие не­
большую протяженность и напоминающие по своей структуре десмосомы. В кле­
точных отростках (дендритах и аксонах) элементы цитоскелета, в частности, микро­
трубочки, сохраняют нормальную плотность расположения и ориентированы вдоль
по ходу клеточного отростка. Известно, что нарушение именно этих параметров яв­
ляется одним из самых ранних признаков патологических сдвигов в деятельности
нейрона.
При электронно-микроскопическом исследовании височной коры и гиппокампа
крыс после введения ДМСО в нейронах и гпиальных клетках обращает на себя вни­
мание увеличение числа и шпертрофия митохондрий с сохранением наружной и
внутренней мембран. При этом кристы органелл плотно упакованы, количество их
больше в сравнении с митохондриями крыс группы № 1 Данные изменения, вероят­
но, связаны со способностью ДМСО интенсифицировать тканевое дыхание Так. в
экспериментах in vitro показано, что при ннзких концентрациях ДМСО (0.1
ммоль/л), приблизительно соответствующих выбранной нами дозе, наблюдается по-
-17вышение транспортных возможностей для электронов на НАДН-депщрогеназном
участке дыхательной цепи (Иощенко С.Е., Войтенок B.C., 1990).
Результаты нейроморфологического исследования височной коры и гиппокампа
крыс при интоксикации норборнаном в минимально-судорожных дозах. В височной
коре и гилпокампе крыс экспериментальной группы (S« 1) на фоне интоксикации НБ
выявлена гиперхромия нейронов и гпиальных элементов, преимущественно олигодендроцитов. Гиперхромные нейроны характеризуются интенсивной диффузной ок­
раской цитоплазмы и ядра. Клетки имеют вид темного гомогенного образования с
четко очерченным контуром. В височной коре гиперхромные нейроны составляют в
среднем 65% от общего количества нейронов, тогда как в контрольной фуппе и
группе животных, получавших ДМСО, показатель составил 5% и 1,5%, соответст­
венно. Гиперхромные глиальные элементы в экспериментальной группе составляют
в среднем 30%, в группах Na2 и №3 - 0,5% и 2 % , соответственно. Гиперхромные
клетки в височной коре присутствуют во всех слоях, но распределены они в толще
коры неодинаиово. На вертикальных срезах, сделанных в плоскости, перпендику­
лярной поверхности коры, темные клетки в слое Ш равномерно распределены среди
нормохромных нейронов. Но иногда они образуют группы из 5-6 клеток, что наибо­
лее характерно для нижних корковых слоев.
При гистологическом анализе обращает внимание выраженный полиморфизм
наблюдаемых изменений, прежде всего в отношении нейронов. Наряду с неизменен­
ными и гиперхромными клетками, выявляются нейроны с промежуточной интен­
сивностью окраски. Для темных клеток характерна меньшая величина, угловатая и
сдавленная форма, наличие отечных астроцитарных отростков на телах нейронов,
что отчетливо наблюдается при электронно-микроскопическом исследовании. Периваскулярныб отёк, наблюдаемый в ткани мозга крыс экспериментальной фуппы, ве­
роятно, обусловлен действием ДМСО.
Степень выраженности гиперхроматоза разных клеточных элементов в пределах
одного поля зрения варьирует. По-видимому, это вызвано полиморфизмом патологи­
ческих изменений в нервной ткани. В тех слоях, где формируются пучки апикальных
дендритов, и в более глубоких корковых слоях, где локализуются клеточные тела,
наряду с неизмененными и гиперхромными нейронами и их отростками, просматри­
ваются клетки с промежуточной интенсивностью окраски. Контуры клеточных тел
темных нейронов извилистые, ядро расположено эксцентрично и тоже имеет неров­
ные очертания. Значительная электронно-оптическая плотность этих клеток обу­
словлена высокой степенью осмиофильности гиалоплазмы и нуклеоплазмы. В особо
темных нейронах обнаруживаются признаки деструктивных, и, по-видимому, необ­
ратимых изменений. Набухшие митохондрии частично или полностью лишены
крист, цистерны фанулярной эндоплазматической сети и комплекса Гольджи расши­
рены. В перикарионе присутствуют разнообразные по величине вакуоли. Большая
часть периметра клеточного тела занята отечными астроцитарными отростками. С
перикароном и отростками темных нейронов контактируют также клеточные отро­
стки других нейронов и
пресинаптическне терминали, образующие аксосоматические синапсы. Повышение степени осмиофилии в ряде случаев отмечалось
также и в саттелитной гпии.
В гиппокампе гиперхромные нейроны имеют отчетливый паттерн распределе­
ния с>'бфанулярная зона fascia dentata и поле CAi_i. Характер распределения обна-
-18руженных нами изменений, очевидно, отражает особенности синаптической органи­
зации анализируемых областей Г М В височной коре гиперхромные нейроны рас­
пределены в целом диффузно во всех слоях, тогда как в гиппокампе только в опреде­
ленных участках. Причем в области субгранулярного слоя fascia dentate активность
этих предположительно тормозных клеток направлена на ограничение синаптического возб>'ждения, поступающего в fascia dentata из энторинальной коры через перфорантный тракт В то же время гиперхромность пирамид поля CAj.». вероятно, от­
ражает недостаточность механизмов торможения в fascia dentata
Таким образом, в контрольной группе № 3 через 6 часов после в/м введения жи­
вотным физиологического раствора NaCl при полной сохранности ультраструктуры
нервных и глиальных элементов в височной области коры и в гиппокампе отмечает­
ся умеренный периваскулярный отек. Более выраженные изменения микрогемоциркулярного русла регистрируются в контрольной группе животных № 2. После введе­
ния ДМСО в дозе 0,1 г/кг выявлены признаки повышения проницаемости гематоэнцефалического барьера. Данные изменения ультраструктуры кровеносных капилля­
ров носят реактивный характер. Структурные изменения нервных элементов в гип­
покампе и в височной коре через 6 часов после введения ДМСО также являются ре­
активными (адаптационными). Набухание митохондрий и изменение конфигурации
цистерн гранулярной эндоплазматической сети происходит в результате перестройки
энергетического аппарата клетки и изменения интенсивности протеинового синтеза
в нейроне. Реактивные изменения глиальных элементов при этом направлены на
поддержание обратимости процесса. Специфичность реагирования нервной ткани
на интоксикацию норборнаном выявить не удалось Обнаруженные в настоящей ра­
боте изменения структуры были сходны с теми, которые, согласно литературным
данным (Майоров В.Н. и др., 1989; Новожилова А.П., 1993), наблюдаются при дру­
гих воздействиях на организм (гипоксия, гиподинамия и др. экстремальные факто­
ры). Процессы, наблюдаемые при интоксикации НБ, являются следствием высокой
интенсивности и глубоких перестроек внутриклеточного метаболизма и могут при­
водить к необратимым деструктивным изменениям. Учитывая высокую значимость
височной коры и гиппокампа в реализации мнестических и когнитивных функций,
вероятно, что выявленные изменения могут служить морфологическим субстратом
нарушений процессов ВНД и памяти, наблюдаемых при интоксикации НБ.
ВЫВОДЫ
1. NMDA-, М-Х0ЛИНО-, Г А М К Б - и дофаминовые рецепторы играют различ­
ную роль в судорожном синдроме, формируемом при норборнан-пикротоксиновом
киндлинге. Гиперактивация NMDA-рецепторов вызывает формирование преиму­
щественно тонической фазы судорог и финального опистотонуса, приводящих к не­
обратимым нарушениям витальных функций (асфиксии, аноксии, нарушению це­
ребральной гемодинамики и др.) и летальному исход>'. Гиперактивацня дофамино­
вых рецепторов приводит к развитию симптомокомплекса, определяющего, по
крайней мере, частично, клинику предсудорожного периода и характер первичных
судорожных реакций. М-холино- и ГАМКь-рецепторы участвуют в реализации су­
дорожной активности на всех этапах ее формирования
2. При оценке влияния препаратов различных фармакологических групп на
судороги, вызванные норборнан-пикротоксиновым киндлингом. наибольшей проти-
-19восудорожной активностью обладают гидроксиб\тират натрия и диазепам. Показа­
на также противосудорожная эффективность мексидола, этилового спирта, нимоднпина.
3. Гидроксибутират натрия в качестве средства экспериментальной терапии
интоксикации норборнаиом у крыс тяжелой и крайне тяжелой степени замедляет
развитие судорог и уменьшает их интенсивность, при этом двукратно увеличивают­
ся сроки жизни животных опытной фуппы. Диазепам и феназепам при экспери­
ментальной терапии судорожного синдрома на фоне интоксикации норборнаиом
тяжелой степени у крыс замедляют развитие судорог и уменьшают интенсивность
их проявлений, однако ускоряют гибель животных.
4. Интоксикация норборнаиом в минимально-судорожных дозах сопровожда­
ется выраженными структурными изменениями в височной коре и гиппокампе
крыс. №менения носят компенсаторно-приспособительный xapairrep и являются
следствием высокой интенсивности и глубоких перестроек внутриклеточного мета­
болизма. Межнейртнные синаптические контакты имеют признаки функционально­
го напряжения.
5. Обнаруженные при интоксикации норборнаиом в минимальносудорожных дозах патоморфологические изменения в височной коре и гиппокампе
крыс, являясь структурным выражением перестроек синтетической и синалтической активности, которые при сохранении патологического процесса приведут к не­
обратимым деструктивным изменениям, требуют медикаментозной коррекции на­
правленной на усиление резистентности и жизнеспособности нервных клеток.
СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ,
ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО Т Е М Е ДИССЕРТАЦИИ
1. Феномен формирования повышенной судорожной готовности при интоксика­
ции ГАМК-литиками // Медицинские и биологические проблемы, связанные с унич­
тожением химического оружия: Тез. докл. международного симпозиума). - Волго­
град: 2003. - С. 173. (Соавт. Иванов М.Б., Башарин В.А., Куценко С.А., авторский
вклад 40%).
2. Поиск противосудорожных средств на модели норборнан-пикротоксино-вого
киндлинга // Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением
химического оружия: Тез. докл. международного симпозиума). - Волгоград: 2003. С. 212. (Соавт. Иванов М.Б., Башарин В.А., Куценко С.А., авторский вклад 40%).
3. Участие NMDA-, дофаминовых, М- холинорецепторов в судорожном синдро­
ме, вызванном норборнан- пикротоксиновым киндлингом // Медико- биологические
проблемы противолучевой и противохимической защиты: Тез. докл. науч. конф.). СПб.: ООО «Издательство Фолиант», 2004. - С. 151-152 (Соавт Иванов М.Б., автор­
ский вклад 70%).
4. Влияние бензодиазепинов на течение и исход интоксикации норборнаиом у
крыс // Медико- биолошческие проблемы противолучевой и противохимической
зашиты: Тез. докл. науч. конф. - СПб.: ООО «Издательство Фолиант», 2004 - С.
344-345 (Соавт. Иванов М.Б., Шилов Ю.В., Зяблицева О.А., авторский вклад 30%).
5. Перспективы использования норборнана в биологии и медицине // Актуальные
проблемы неврологии: Сб. статей. Апматьг 2002. - С. 130-131. (Соавт. Иванов М.Б.,
Башарин В.А.. Носов А.В., Юдин В.И., авторский вклад 40%).
-206 Реиепторные
механизмы
судорожной
активности
при норборнанпикротоксиново.м киндлинге // Medline ru - 2004. - Т 5 (ст 4) - С 15-18 (Соавт
Иванов М.Б., авторский вклад 70%).
7 Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на действие противосудорожных
препаратов при интоксикации антагонистами ГАМК // Медико-биологические про­
блемы противолучевой и противохимической зашиты: Тез докл. науч конф. - СПб.:
0 0 0 «Издательство Фолиант», 2004. - С. 345-346 (Соавт Иванов М.Б., Башарин
В.А., Бонитенко Е.Ю., авторский вклад 60%).
8 Изменения в височной коре крыс при интоксикации норборнаном в минималь­
но-судорожной дозе // Особенности медицинского обеспечения вооруженных сил в
современных условиях: Тез. докл. науч конф - Ереван: 2004 - С. 230. (Соавт. Но­
вожилова А П., Иванов М.Б., Парамонова Н.М.. авторский вклад 60%).
9. Токсикокинетические особенности интоксикации норборнаном у крыс // Medline.ra. - 2004. - Т. 5 (ст. 29) - С. 111-120 (Соавт. Иванов М.Б.. Гладких В.Д., Наза­
ров В.Б., Головко A.M., Шилов Ю.В., авторский вклад 30%).
Ю.Нарушение физиологических функций при интоксикации норборнаном // Medline.ru. - 2004. - Т. 6 (ст. 10). - С. 46-50. (Соавт Иванов М.Б., Свидерский О.А., Го­
ловко А.И., Шилов Ю.В., Носов А.В., авторский вклад 30%).
Подписано в печать iOMOS
Формат 60x84 '/,^.
Объем
1 п.л.
Тираж
то экз.
Заказ № ibi
Типография ВМедА,
194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6
w
и
*'t941?
РНБ Русский фонд
2006-4
21731
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
1 152 Кб
Теги
bd000102034
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа