close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

bd000102368

код для вставкиСкачать
Ляпохов Геннадий Васильевич
Эффективность использования препаратов пербаксан,
пербаксан-арома и бактерицид в птицеводстве.
16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,
микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учёной
степени кандидата ветеринарных наук
Ставрополь-2005
Работа выполнена в Государственном научном учреждении
Ставропольский научно-исследовательский институт
животноводства и кормопроизводства
НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:
доктор ветеринарных наук
Николаенко Василий Павлович
доктор ветеринарных наук,
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ
профессор Дорофеев Виталий Иванович
кандидат ветеринарных наук
Сурмило Алексей Петрович
Донской государственный афарный
университет (Дон ГА У)
ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ
Защита состоится « 02 » декабря 2005 года в 10-оо часов на заседании
диссертационного совета Д 220.062.02 при ФГОУ «ВПО Ставропольский
государственный аграрный университет» по адресу: 355017, г.Ставрополь,
пер. Зоотехнический, 12
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ «ВПО
Ставропольский государственный аграрный университет» (г.Ставрополь,
пер. Зоотехнический, 12)
Автореферат разослан «
Учёный секретарь
диссертационного совета
fc»
[О
2005 года
^^г:^-^-
Квочко А.Н.
2ooi -»
£2^9 Г
111667^
1.Общая характеристика работы
1.1 Актуальность
проблемы.
Важнейшее
значение
в
организации
мероприятий
по
охране
птицефабрик
от
заноса
возбудителей
инфекционных болезней и здоровья птицы приобрели вопросы санитарии
на объектах ветеринарного надзора. Снижение эффективности лечебно профилактических мероприятий в связи с бесконтрольным применением
различных антибиотиков привело к появлению резистентно устойчивых
микроорганизмов, что повышает значение санитарно - гигиенических
методов с использованием экологически безопасных антисептических и
дезинфицирующих средств. (Смирнов A.M., 1999; Миляновский А.Г.,2000,
2002, 2005; Попов Н.И., 2004; Николаенко В.П., 2002, 2004). В настоящее
время основными антисептиками ветеринарного назначения являются
препараты элементарного йода, фенолы, окислители, соли тяжелых
металлов, щелочи, кислоты, способные вызвать как местные, так и общие
токсические реакции в организме. Это является основной причиной того,
что большая часть из них малопригодна для широкого применения в
ветеринарной медицине. Некоторые из них представляют опасность для
людей при попадании в продукты животного происхождения. Между тем,
существует
острая
необходимость
в производстве и
испытании
эффективных, экологически безопасных и доступных по цене антисептиках
и дезинфектантах. В последние годы среди антибактериальных веществ
отечественного производства, а также в составе зарубежных антисептиков
используют
четвертичные
аммониевые
соединения ( Ч А С ) .
Такие
соединения хорошо растворяются, бесцветны, не имеют острого запаха,
обладают выраженным бактерицидным действием, отличаются низкой
токсичностью, отсутствием раздражающего действия. Благодаря своим
уникальным свойствам различные четвертичные аммониевые соединения
нашли применение в бытовой химии, косметологии, перерабатывающей
промышленности, медицине, ветеринарии. (Кочерина Е.Л., 1992, Смирнов
A.M., 1999; Попов Н.И., 2004; Миляновский А.Г., 2004). Обеспеченность
ветеринарной службы антисептиками и дезинфектантами не превышает 40 50% от потребности, при отсутствии ассортимента (Лагунов В.И., 1998). На
птицефабриках для дезинфекции десятки лет традиционно применяют
едкий натр и формальдегид, которые обладают агрессивностью для
оборудования и опасны для человека и окружающей среды. В ветеринарной
практике фактически нет безопасных антисептиков, которые можно
применять для дезинфекции объектов ветнадзора в присутствии
сельскохозяйственных животных и птицы. В связи с изложенным давно
возникла необходимость разработки и внедрения в практику ветеринарной
медицины новых высокоэффективных, экологически безопасных и
сранительно дешевых дезинфицирующих средств.
1.2 Цель и задачи исследования. Цель работы заключалась в разработке на
основе четвертичных аммониевых соединений ( Ч А С ) препаратов нового
поколения, изучении бактерицидного, фунгицидного и токсикологического
действия, количественного определения бактерицида в мясе птиц,
РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ j
БИБЛИОТЕКА
получавших препарат, а также внедрении в практику птицеводства
эффективных
антисептиков,
обладающих
пролонгированным
бактерицидным действием.
Для реализации цели были поставлены следующие задачи:
1. Разработать и изготовить антисептики нового поколения на основе
высококонцентрированной
соли
четырёхзамещенного
аммония
в
галогенидной форме.
2. Изучить их бактерицидное и фунгицидное действие на паспортизированные
и полевые штаммы возбудителей бактериальных инфекций - S. enteritidis,
E.coli, Staph.aureus, Pseudomonas aeruqinosa, Candida albicans, Asperqiilus
niqer.
3. Установить острую токсичность препаратов пербаксан и бактерицид.
Разработать методику количественного определения бактерицида в мясе
птиц.
4. Испьггать препараты нового поколения пербаксан, пербаксан - арома и
бактерицид-70 для обеззараживания племенных инкубационных яиц разных
видов птиц.
5. Разработать способы профилактики инфекционных болезней бройлеров с
применением новых антисептиков и использования их для аэрозольной
дезинфекции птичников.
6. Внедрить антисептики нового поколения на объектах ветеринарного надзора
в промышленном птицеводстве и фермерских хозяйствах.
7. Разработать проекты технических условий и Наставления по применению
новых антисептиков в ветеринарии
и представить для утверждения в
Ветфармсовет Минсельхоза Р Ф .
Диссертационная работа выполнена по
Государственной теме
номер
Госрегистрации 01.2. 00109178.
1.3
Научная
новизна
работы.
Теоретически
обосновано
и
экспериментально доказано выраженное бактерицидное и фунгицидное
действие антисептиков нового поколения пербаксан, пербаксан-арома и
бактерицид-70 на паспортизированные и полевые штаммы E.coli, S. enteritidis.
Staph, aureus, Pseudomonas aeruqinosa A T C C 6538P, Candida albicans A T C C 885653,Asperqillus niqer B K M F-1118.
Впервые установлено, что препараты пербаксан, пербаксан - арома и
бактерицид в минимальных концентрациях проявляют сильное бактерицидное
действие в отношении Pseudomonas aeruqinosa, Staph.aureus, E.coli 50-100
мкг/мл, 25-100 мкг/мл, 12,5-100 мкг/мл соответственно, а также обладают
фунгицидным действием по отношению к Candida albicans в дозе 1,56-6,25
мкг/мл, а по отношению к Asperqiilus niqer в дозе 3,125-12,5 мкг/мл.
Установлено, что препараты обладают пролонгированным бактерицидным
действием, это является их важным отличительным свойством от импортных
средств (септабик, виркон, санифест). Впервые изучена острая токсичность и
аллергенное действие препаратов. На основе этих исследований научно
обоснованы критерии безвредности и безопасности использования препаратов
пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид-70. Впервые разработана методика
количественного определения содержания бактерицида в биологическом
материале и установлено, что препарат не накапливается в мясе птицы.
Совместно с доктором ветеринарных наук Николаенко В.П. разработаны
антисептики нового поколения пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид
которые представляют собой сложное комплексное высококонцентрированное
ЧАС
в галогенидной форме с добавлением веществ, обладающих
бактерицидным действием и обеспечивающих высокую эффективность.
Бактерицидная
эффективность
антисептиков
доказана
при
обеззараживании инкубационных яиц мясных кур, уток и индеек после их
сбора в птичниках и в инкубатории. Разработаны способы обеззараживания
поверхности скорлупы племенных яиц мясных кур препаратами пербаксан,
пербаксан-арома и бактерицид в концентрациях 0,05-0,1%, проект технических
условий и Наставление по применению бактерицида в ветеринарии, которые
утверждены в Ветфармсовете Департамента ветеринарии Минсельхоза Р Ф .
Впервые разработана и внедрена технология применения препарата бактерицид
для аэрозольной дезинфекции птичников с использованием аэрозольного
аппарата «Циклон-!» и АГ-УД-2. Бактерицид на птицефабриках применяют в
виде 0,3% раствора из расчёта 20мл на 1м' вместо канцерогенных паров
формальдегида, что позволяет снизить в 2,8 раза финансовые затраты на
приобретение дезинфектантов.
Разработан способ применения антисептика бактерицид 0 , 1 % концентрации
из расчёта 1,0мл на 1 м^ для санации воздуха помещений в присутствии птицы.
Аэрозольные
обработки
бактерицидом
прюфилактируют
птицу
от
возникновения инфекционных болезней, в том числе и эшерихиоза, снижают
количество общей микрофлоры на 80-95%, повышают сохранность и прирост
живой массы на 3,5-6,5%.
1.4 Практическая значимость работы. Эксперименты по созданию новых
антисептических препаратов пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид - 70
включали:
1) синтез антибактериальной субстанции на основе высококонцентрированной
соли четырёхзамещенного аммония в галогенидной форме;
2) разработку
и
внедрение
методики
количественного
определения
бактерицида в мясе птицы., доказана эффективность практического
применения новых антисептиков для санации объектов ветеринарного
надзора птицеводческих предприятий и профилактики инфекционных
болезней бройлеров;
3) широкие производственные испытания, внедрение новых препаратов и
разработанных технологий в ветеринарную практику птицеводства;
4) разработку проекта технических условий ( Т У ) и Наставления по
применению бактерицида в ветеринарии.
Разработанные антисептические препараты нового поколения пербаксан,
пербаксан-арома и бактерицид обладают экологической чистотой, не имеют
аналогов
в Российской
Федерации
и обладают
пролонгированным
бактерицидным действием до одного месяца по сравнению с импортными
препаратами.
На антисептическое средство бактерицид
разработан проект Т У на
выпуск промышленной партии с учетом критериев его стандартизации и
сертификации. Синтезирована опытная партия субстанции антисептика
бактерицид для изготовления препаратов пербаксан и пербаксан-арома. Для
птицефабрик и инкубаториев Ставропольского края и других регионов Р Ф
приготовлено 3,5 млн. литров рабочих растворов препаратов. Экономическая
эффективность и экологическая безопасность применения антисептиков нового
поколения доказана в производственных условиях;
1.5 Реализация
результатов
исследования.
Научные
положения
диссертационной работы и практические предложения производству вошли:
1) в Наставление по применению препарата бактерицид в ветеринарии,
одобрено
Советом
по
ветеринарным
препаратам
Департамента
ветеринарии Минсельхоза Р Ф в феврале 2004года;
2) Технические условия: антисептическое средство бактерицид Т У 9336-00305324181-04, одобренные Советом по ветеринарным
препаратам
Департамента ветеринарии Минсельхоза Р Ф в феврале 2004года;
3)
Рекомендации по применению антисептика бактерицид для дезинфекции в
ветеринарной медицине, Ставрополь 2005год.;
4)
Методику количестгвенного определения бактерицида в мясе птицы.
Разработанные
антисептические
препараты
нового
поколения
и
технологические приёмы их применения внедрены в инкубаториях,
племрепродукторах, птицехозяйствах различных форм собственности в
Ставропольском крае и других регионах Р Ф .
1.6 Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы
доложены и одобрены на заседаниях учёного Совета отдела ветеринарной
медицины 2002-2005, учёного Совета Г Н У
С Н И И Ж К 2002-2005;
Межреспубликанской конференции по болезням птиц, г. Пятигорск, 2002;
Всероссийской конференции В Н А П , г. Москва,2002; Межрегиональном
координационном совещании В Н И В И П , 2003-2005; Всероссийской
конференции ветеринарных специалистов ОАО «Росптицесоюз», г. Москва,
2002-2004; Всероссийском ветеринарном конгрессе, г. Москва, 2004;
Научно-практической конференции «Актуальные вопросы зоотехнической
и ветеринарной науки и практики в А П К » , Ставрополь, 2005; Первом
Международном ветеринарном конфессе по птицеводству, Москва, 18-22
апреля 2005г.
1.7 Публикации. По теме диссертации опубликовано десять научных работ, в
том числе в журналах «Вестник Р А С Х Н » , «Био», «Птицеводство»,
«Ветеринария», «Ветеринарная служба Ставрополья», научных трудах
С Н И И Ж К , трудах научно-практических конференций, информационных
листках с занесением в базу данных «Российская наука».
1.8 Основные положения, выносимые на защиту
1.Получение
антисептиков
нового
поколения
на
основе
высококонцентрированной соли четырехзамещённого аммония, обладающих
экологической безопасностью и пролонгированным бактерицидным действием.
2.Бактерицидное действие антисептиков пербаксан, пербаксан-арома и
бактерицид-70 на полевые и паспортизированные штаммы возбудителей
бактериальной инфекции и фунгицидное действие в отношении Candida
albicans и Asperqillus niqer. Токсикологическая характеристика препаратов
пербаксан и бактерицид. Методика количественного определения бактерицида
в мясе птицы.
3.Эффективность
использования
антисептических
средств
пербаксан,
пербаксан-арома и бактерицид для дезинфекции инкубационных яиц мясных
кур, уток, индеек и объектов ветеринарного надзора инкубатория.
4.Применение препаратов пербаксан и бактерицид для профилактики
инфекционных болезней бройлеров.
5.Разработка
технологии
применения
бактерицида
для
аэрозольной
дезинфекции птичников.
6.Производственные испыгания и внедрение антисептиков нового поколения в
ветеринарную
практику
промышленного
птицеводстгва
и
разработка
нормативно-технической документации.
1.9 Структура и объём работы. Диссертация изложена на 124 страницах
машинописного текста; содержит 31 таблицу, 4 рисунка, 5 приложений;
состоит из введения, обзора литературы, описания материала, методик и
результатов исследований, выводов и практических предложений. Список
литературы включает 142 источника, из них 24 иностранных авторов.
2. Собственные исследования
2.1 Материал и методы исследований. Работа выполнена в период 2002-2005
годов в лаборатории инфекционных болезней Ставропольского научноисследовательского
института
животноводства
и
кормопроизводства,
птицефабриках, фермерских инкубаториях Ставропольского края и Липецкой
области. Разработана нормативно - техническая документация на субстанцию
препарата нового поколения на основе солей четырехзамещённого аммония в
галогенидной форме - препарат бактерицид. Из синтезированной субстанции
изготовлены 10% концентрации препаратов, из которых готовили рабочие
растворы. Препараты бактерицид, пербаксан, пербаксан-арома, относятся к
фуппе катионных поверхностно-активных веществ. При добавлении к
санирующему раствору ароматизаторов 2-5мл на Юл раствора получали
препарат пербаксан-арома.
В
технические условия на субстанцию бактерицида с учётом
стандартизации включены следующие характеристики: внешний вид и цвет,
массовая доля солей четырехзамещённого аммония, массовая доля влаги не
более 30%, массовая доля механических примесей не более 0,5%, срок
изготовления препарата и условия хранения. Методы контроля указанных выше
параметров субстанции бактерицид изложены в разработанных Т У и
8
утверждённых в установленном порядке. Синтезирована опытная партия
антисептика бактерицид, на которую получен сертификат соответствия
испытательного центра Ф Г У
В Г Н К И с целью проведения широких
производственных испытаний. Научно-технический уровень препаратов
соответствует современным требованиям, предъявляемым к антисептикам.
Препараты хорошо хранятся и транспортируются, экономичны, экологичны,
обладают пролонгированным бактерицидным действием в отличие от
импортных препаратов виркон и септабик. Препараты бактерицид, пербаксан,
пербаксан-арома не имеют аналогов в Российской Федерации и за её
пределами.
Качество дезинфекции объектов ветеринарного надзора определяли
согласно «Правил
проведения дезинфекции
и дезинвазии
объектов
государственного ветеринарного надзора», утверждённых руководителем
Департамента ветеринарии Минсельхоза Р Ф 15 июля 2002 года. Бактерицидное
действие препаратов бактерицид и пербаксан-арома, пербаксан, глюбак изучали
в соответствии с «Методическими указаниями о порядке испытания новых
дезинфицирующих средств для ветеринарной практики», утверждёнными Г У В
Госагропрома СССР 7.01.1987 года.
В качестве тест - культур использовали паспортизированные штаммы
Pseudomonas aeruqinosa, E.coli, S t ^ h аш'еиз, Candida albicans, Asperqillus niqer,
a также полевые изоляты E.coli, S.enteretidis выделенные на различных
птицефабриках.
Контроль санации объектов ветнадзора инкубатория проводили до
обработки, а затем через 7,12,18 суток после влажной обработки и инкубации
яиц. Для обработки инкубационных яиц, лотков, тележек и инкубаторов
применяли
препараты
бактерицид,
пербаксан,
пербаксан-арома
в
концентрациях 0,05%; 0,1; 0,15; 0,2; 0,3% в виде водных растворов. Для
обработки
объектов
ветнадзора инкубатория
применяли
аппараты
американского и немецкого производства, с помощью которых получали
аэрозоль.
Аэрозольную дезинфекцию птичников проводили 0,3% бактерицидом из
расчёта 20 мл на 1 мл ' для чего использовали аэрозольный генератор «Циклон1»,АГ-УД-2.
Влажной обработке подвергали инкубационные яйца кур яичных и
мясных пород, уток, гусей и индеек имеющее овальную форму, чистую,
гладкую скорлупу, без наростов, поясков, трещин и насечек.
Инкубационные яйца, находящиеся в лотках и размещённые в этажерки,
санировали однократно влажным способом путём их орошения растворами
препаратов так, чтобы яйцо со всех сторон было покрыто полимерной
защитной плёнкой, которую образуют препараты. Контрольные партии
инкубационных яиц и объектов ветнадзора инкубатория обрабатывали 4-х
кратно парами формальдегида или препаратом септабик или виркон Санацию
опытных и контрольных партий яиц перед закладкой в инкубатор проводили
одновременно и в аналогичных условиях.
Для профилактики инфекционных болезней бройлерам применяли
бактерицид аэрозольно в течение 3 дней подряд еженедельно из расчёта 1 мл на
1 м^ при экспозиции 30 минут.Бактерицидное действие препаратов бактерицид, пербаксан, пербаксанарома, глюбак изучали методом серийных разведений. Бактериологическому
исследованию качества дезинфекции объектов ветнадзора инкубатория и
птичников подвергнуто более 2800 смывов. Клинико-экспериментальные
исследования и полевые наблюдения проведены на 10 млн. голов птицы,
санировано более ста птичников, 42,0 млн. инкубационных яиц разных видов
птицы, 1518 инкубаторов, 25,0 тыс. лотков, 11500 тележек. Статистический
анализ проведён на 540 тыс. голов птицы, а для лабораторных и
токсикологических исследований использовано 120 лабораторных животных
(крысы, мыши, кролики). С целью профилактики инфекционных болезней на
птицефабриках препаратами пербаксан, пербаксан - ^ о м а и бактерицид
обработано 3 млн. голов птицы и 42,0 млн. инкубационных яиц.
Разработаны технические условия и Наставление по применению
субстанции препарата бактерицид для изготовления лекарственных препаратов
в ветеринарии и утверждены Ветфармсоветом Департамента ветеринарии
Минсельхоза Р Ф 25 февраля 2004 года.
Определение препарата бактерицид в мясе бройлеров проводили по
методу,
разработанному
совместно
с
сотрудниками
Пятигорской
государственной фармацевтической академии.
Кормление птицы, параметры микроклимата и светового режимов
соответствовали рекомендации В Н И Т И П . Содержание бройлеров напольное и
клеточное.
Санацию инкубационных яиц бройлеров проводили в птичнике после
сбора через 0,5-1,5 часа, для чего применяли 0,05 и 0 , 1 % раствор пербаксана
или бактерицида, повторно дезинфекцию яиц проводили в инкубатории после
их сортировки и укладки в лотки, за 2-4 часа до закладки яиц в инкубационные
шкафы.
Экономическую
эффективность
ветеринарных
мероприятий
с
использованием
препаратов
бактерицид,
пербаксан,
пербаксан-арома,
рассчитывали в соответствии с «Методикой определения экономической
эффективности ветеринарных мероприятий» ( М . , 1997).
Достоверность результатов исследований проверяли статистической
обработкой (Конопаткин А.А.,1993) и посредством определения средних
значений с использованием критериев Стьюдента. Расчёты проводили с
помощью программы «Microsoft Excel».
3. Результаты собственных исследований
3.1 Изучение острой токсичности и аллергенного действия препаратов
пербаксан
и
бактерицид.
Разработка
методики
количественного
определения бактерицида. В качестве бактерицидных веществ, используемых
в настоящее время за рубежом и в Р Ф , всё больше применяют четвертичные
аммониевые соединения. Они хорошо растворимы, бесцветны, практически без
запаха, а высокая бактерицидная и поверхностная активность у них сочетается
10
с низкой токсичностью, отсутствием раздражающего действия и иных
побочных эффектов. Благодаря этим уникальным свойствам их применяют в
медицине, ветеринарии, косметологии, бытовой химии, молочной, мясной,
пищевой и других отраслях промышленности.
Разработка и изучение новых четвертичных аммониевых соединений
(ЧАС)
имеет в настоящее время немаловажное значение на фоне
продолжающейся
интервенции
в РФ
различных
антисептических
и
дезинфицирующих препаратов, не всегда отличающихся хорошим качеством и
эффективностью, в то время как стоимость их значительна и не по средствам
многим хозяйствам. Таким образом возникла крайняя необходимость синтеза,
испытания и внедрения новых высокоэффективных антисептических средств на
основе катионных детергентов и углубленного изучения их бактерицидных,
вирулицидных, токсико-биологических и других свойств, чему до настоящего
времени не придавалось должного внимания.
Для токсикологического
исследования
препаратов
пербаксан
и
бактерицид использовали белых крыс-самцов и самок линии «Вистар» живой
массой 180-200г. При изучении острой токсичности препараты вводили с
помощью зонда в желудок в виде 5 % растворов Обработку полученных
результатов по определению ЛДм препаратов пербаксан и бактерицид
проводили по методу Кербера. Ежедневно фиксировали общее состояние
животных, особенности их поведения, тонус скелетных мышц, реакцию на
тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину
дыхательных движений, ритм сердечных сокращений, состояние волосяного и
кожного покрова, окраску слизистых оболочек, размер зрачка, количество и
консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания и окраску мочи,
потребления корма и воды, изменения массы тела. Результаты по исследованию
острой токсичности препарата пербаксан представлены в таблице 1.
Таблица 1
Определение острой токсичности пербаксана на крысах-самках.
(п=30)
Доза мг/кг
Исследуемые показатели
3000
3500
4000
4500
5000
6
6
6
6
6
Количество выживших животных
6
5
4
1
0
Количество погибших животных
0
1
2
5
6
0
16,7
33,7
83,3
100,0
Общее количество животных
% погибших животных
Z
D
DZ
0,5
500
500
250
1,5
500
1250
3,5
55
500
500
1750
2750
11
ЛДзо пербаксана для самок крыс составила 4083,3 ± 153,3 мг/кг массы
животного. По классификации токсичности Сидорова К.К пербаксан относится
к I Y классу соединений, т е. малотоксичным соединениям.
ЛДзо пербаксана для крыс-самцов составила 4666,7 ± 153,3 мг/кг массы
животного. По классификации токсичности Сидорова К.К. пербаксан относится
к I Y классу малотоксичных соединений.
ЛДзо бактерицида для самок крыс составила 1033,0±343 мг/кг массы животных
и по классификации Сидорова К.К. относится к малотоксичным соединениям.
По Г О С Т 12.1.07.-76 препараты бактерицид и пербаксан относятся
к I I I и I Y классу опасности и токсичности соответственно. Различий в
зависимости от пола не установлено, т.е. токсическое воздействие, как
на самцов, так и на самок было одинаковым
Впервые изучена возможность использования экстракционнофотометрического метода с целью определения фармакологически
активной части молекулы препарата бактерицид. Экспериментально
были выбраны оптимальные условия анализа и построен калибровочный
график.
В
пределах
прямолинейной
зависимости
концентрации
бактерицида от оптической плотности определены границы подчинения
основному закону светопоглощения. В ы б р а н ы условия образования и
экстракции продукта реакциями типа «препарат-краситель». В процессе
эксперимента установили время экстракции, порядок прибавления
компонентов,
рН-среды,
концентрацию
препарата
и
красителя,
кратность экстракции.
Выбранные нами оптимальные условия позволили разработать
методику
количественного
определения
бактерицида
методом
экстракционной фотометрии. Данная методика использована для
определения содержания бактерицида в мясе птицы. Результаты
количественного определения бактерицида в биологическом материале
представлены в таблице 2
Таблица 2
Результаты количественного определения ба!(терицнда в образцах мяса
цыплят (D„.-0358).
№п/п
1.
D.
0,0200
4
2.
0,0496
3.
4
0,0133
0,0114
5
0,0121
6.
0,0026
С,мг/кг
11,71
Примечание
На 1-е сутки после 5 дневной дачи 0 , 0 1 % раствора
бактерицида
27,70
На 1-е сутки после 5 дневной дачи 0 , 1 % раствора
бактерицида
7,43 1 Контроль на 1-е сутки
6,36
На 5-е сутки после 5 дневной дачи 0 , 0 1 % раствора
бактерицида
6,16
На 5-е сутки после 5 дневной дачи 0 , 1 % раствора
бактерицида
1,45
Контроль на 5-е сутки
12
Дх-оптическая плотность испытуемого раствора;
С-концентрация бактерицида в мясе птицы мг/кг;
Исследованием остаточного количества бактерицида в мясе птицы
установлено, что данный препарат после пятидневного курса применения в
виде 0,1 и 0 , 0 1 % водных растворов в организме птицы не накапливается и не
обладает свойством кумуляции. Также необходимо отметить, что в организме
контрольной птицы присутствуют различные амины, которые не могут быть
полностью удалены в ходе пробоподготовки, и их фоновое поглощение
отмечается при анализе контрольных образцов.
3.2 Изучение антимикробного и фунгицидного действия препаратов
пербаксан, пербаксан-арома и бакгерицид. Изучение антимикробного и
фунгицидного действия препаратов пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид
проводили методом серийных разведений, для чего предварительно определяли
минимальную
ингибирующую концентрацию ( М И К )
и
минимальную
биоцидную концентрацию ( М Б К ) по отношению к выбранным штаммам
бактерий и грибов.
Таблица 3
Бактерицидное и фунгицидное действие новых препаратов.
Препа­
раты
Брокар-
Концент­
рация,
мкг/мл
10'
септ-50
10^
Брокар-
10'
септ-70
Бактери
10'
ю'
10'
10'
ЦЦД
10^
Пербак­
10'
10'
сан
10'
Пербак­
санарома
и?
10'
10'
10'
Ps aeragino
sa
МИ
МБ
К
К
100
200
50
100
25
50
100
200
50
100
25
50
100
50
12,5
100
50
25
100
50
25
100
50
Наименование тест-штаммов
Candida
Е coll
Staph
aureus
25
МБ
К
200
100
50
200
100
50
50
25
100
МИ
К
50
25
МБ
К
МИ
К
50
12,5
25
50
25
100
200
100
50
25
100
50
50
25
50
25
100
100
50
100
50
25
12,5
25
12,5
200
100
50
200
50
50
12,5
25
100
200
50
100
25
50
12,5
25
100
50
200
100
50
25
50
100
100
25
25
12,5
50
50
albicans
МИ
К
МБ
К
6,25
Asp niger
МИ
К
6,25
3,125
1,56
0,78
3,125
1,56
3 125
1,56
3,125
6,25
"бДЛ
1,56
3,125
3,125
6,25
3,125
1,56
1,56
6,25
3,125
1,56
6,25
3.125
1,56
6,25
3,125
1,56
6,25
3,125
6,25
3 125
1,56
0,78
1,56
0,78
3,125
1,56
0,78
3,125
1,56
0,78
1,56
1.56
3 125
МБК
12,5
6,25
3,125
12,5
6,25
3,125
12,5
6,25
3,125
12,5 ,
6,25
3,125
12,5
6,25
3,125
В качестве тест-культур использовали паспортизированные штаммы
патогенных микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa А Т С С 9027, Staph, aureus
13
А Т С С 6538 Р; Е. соИ; Candida albicans А Т С С 885-653 и Aspergillus niger
ВКМР-1П9.
При изучении ( М И К ) и ( М Б К ) в отношении возбудителей, указанных
выше, использовали пробирки с 2 мл стерильной питательной среды №8. В
первую пробирку помещали 2,0 мл 0 , 1 % водного раствора препарата, после
чего делали серию двукратных разведений. Пробирки инкубировали при t 35 С
в течение суток и из пробирок, где визуально было отмечено отсутствие роста,
проводили пересевы на твёрдую питательную среду № 1 для установления
М Б К . Концентрация препарата менялась от 100 до 0,195 мкг/мл. Величина
посевной дозы составляла 10^, 10 и 10 КОЕ/мл. Результаты определения
( М И К ) и ( М Б К ) препаратов пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид
представлены в таблице 3.
Как видно из данных, представленных в таблице 3 препараты,
изготовленные из субстанции высококонцентрированной бромистой соли
четырёхзамещённого аммония в композиции с другими химическими
веществами (перекись водорода, ароматизатор, красители) в минимальных
дозах, обладают ярко выраженным бактерицидным действием в отношении
Pseudomonas aeruginosa. Staph, aureus, В. coli 50-100 мкг/мл, 25-100 мкг/мл,
12,5-100 мкг/мл соответственно, а также фунгицидным действием по
отношению к Candida albicans в дозе 1,56-6,25 мкг/мл, а к Aspergillus niger
3,125-12,5 мкг/мл.
Результаты
проведённых
исследований
по
бактерицидному
и
фунгицидному действию новых препаратов открывают перспективу широкого
их использования в практике ветеринарной медицины.
3.3
Применение
препаратов
пербаксан
и
пербаксан-арома
для
дезинфекции инкубационных яиц разных видов птицы.
Таблица 4
Бактериальная обсеменённость утиных яиц и инкубаторов до и после
об работки пре п а р а т о м i1ербаксан - арома.
Пербаксан-арома,%
Период
исследования
0,1
1
0,15
1
0,2
Кишечная палочка
До обработки
в
1-й в
3-х
в 2-х
пробах
пробе
пробах
Сальмонелла
(n=z40)
Формальдегид
(пары)
контроль
в 2-х пробах
I
в 1-й пробе
в
2-х в 1-й пробе
пробах
Возбудителей
бактериальной кишечная палочка в 3-х пробах,
инфекции не выделено
сальмонелла в 2-х пробах
—
После
обработки
через 13 суток
Через 25 суток
Вывод утят %
Сохранность
в 30 дней, %
Возбудителей
бактериальной кишечная палочка в 4-х пробах,
инфекции не выделено
сальмонелла в 3-х пробах
84,2"
83,4"
83,9"
80,6
97,9"
98,3"
98,6"
96,2
14
Примечание: х-результаты статистически достоверны при р<0,01.
Для санации объектов ветеринарного надзора инкубатория в том числе и
племенных инкубационных яиц разных видов птицы (кур, уток, индеек)
применяли препараты нового поколения пербаксан, пербаксан-арома и
бактерицид в виде водных растворов 0,05; 0,1 и 0,2% концентраций. Для
влажной обработки объектов ветнадзора применяли импортные аппараты
американского и немецкого производства, бьгговые опрыскиватели типа
«Автофакс», краскопульт, подсоединенный к компрессору, а также бытовые
опрыскиватели объёмом 0,5л. Обработку яиц проводили в лотках, размещённых
в этажерках, добиваясь того, чтобы яйцо со всех сторон было покрыто влажной
полимерной плёнкой, образуемой препаратами.
Результаты бактериологических исследований смывов с
инкубаториев до и после дезинфекции представлены в таблицах 4-5.
объектов
Таблица 5
Бактериальная контаминация утиных яиц до н после обработки
пербаксаном.
(п=240)
Формальдегид
Период
Пербаксан,?<
исследования
(пары)
0,1
1
0,15
контроль
ол
До обработки
Кишечная палочка
в 2-х
в 1-й пробе в 2-х пробах
в 1-й пробе
пробах
Сальмонелла
в 1-й пробе в 2-х
в 1-й пробе
в 2-х пробах
пробах
Возбудителей
бактериальной кишечная палочка в 5-ти пробах,
После
инфекции не выделено
сальмонелла в 2-х пробах
обработки
через 13 суток
Возбудителей
бактфиальной кишечная палочка в 6-ти пробах,
25 суток
инфекции не выделено
сальмонелла в 4-х пробах
Вывод
83,2"
молодняка утят,
82,2"
83,3"
79,6
%
Сохранность в
30 дней, %
97,4"
97,5"
98,6"
95,4
Примечание; разница статистически достоверна при р<0,01.
Результаты исследований, показывают, что до обработки объектов
ветеринарного надзора из смывов выделяли возбудителей бактериальной
инфекции. После дезинфекции пербаксаном, пербаксан-арома и бактерицидом
в опьггных партиях яиц разных видов птицы возбудителей бактериальных
инфекций
не
выделяли
весь
период
инкубации, что
говорит о
пролонгированном действии препаратов. В контроле, где обработку проводили
септабиком или парами формальдегида выделяли сальмонеллу и кишечную
15
палочку от двух - трёх проб перед обработкой и до пяти - семи проб в конце
срока инкубации. Таким образом, в контроле происходит накопление
патогенной микрофлоры.
Вывод молодняка птицы в опыте, где санацию проводили препаратами
пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид 0,05-0,2% концентрации был выше
по сравнению с контролем на 1,5-2,6%
за счёт полного отсутствия
возбудителей колибактериоза и сальмонеллёза весь период инкубации, в то
время как в контроле происходило накопление патогенной микрофлоры.
Экономическая эффективность применения препаратов нового поколения на 1
млн. проинкубированных яиц составляет до 300 тысяч рублей в ценах 2005 года
по сравнению с обработкой парами формальдегида или препаратом септабик.
3.4 Применение препаратов пербаксрч и бактерицид для профилактики
инфекционных болезней бройлеров. Учитывая выраженное бактерицидное
действие препаратов пербаксан и бактерицид провели испытание по
применению их в системе ветеринарно-профилактических мероприятий,
направленных на профилактику эшерихиоза и сальмонеллёза у бройлеров
Таблица 6
Показатели бактериальной обсеменённости воздуха
птичников при выращивании бройлеров
(п=22500)
Возраст
птицы,дни
8-10
20-22
32-35
Кратность
исследования
до обработки
погибло
после
обработки
до обработки
погибло
после
обработки
до обработки
погибло
после
обработки
Общая микрофлора,
тыс./м''
Кишечная палочка,
тыс/м'
опыт
25,2
19,7"
контроль
26,3
10,9
опыт
20,7
17,4"
контроль
22,9
9,7
36,1
32,7"
50,6
24,3
41,4
35,7"
49,1
17,7
85,7
78,Г
115,2
34,7
62,8
49,7"
78,5
26,3
Примечание: х - результаты статистически достоверны р<0,001
Для проведения опыта готовили маточный раствор препаратов пербаксан
и бактерицид, из которого делали 0 , 1 % рабочий раствор. В опытном и
контрольном птичниках было посажено 22500 бройлеров суточного возраста.
Цыплят в опыте обрабатывали аэрозольно препаратами пербаксан и
бактерицидом 0 , 1 % концентрации из расчёта 1,0мл на 1м^ в указанном возрасте
(таблица 6) в течение 3-х дней подряд. Птицу контрольной группы
16
обрабатывали в аналогичном возрасте молочной кислотой из расчёта 20мл на
1м'. Пробы воздуха брали до распыления препаратов, а затем через один час
спустя. Результаты бактериальной обсеменённости воздуха птичников до и
после дезинфекции представлены в таблицах 6-8.
Таблица 7
Хозяйственные показатели бройлеров, обработанных
аэрозольно препаратом бактерицид
Показатели
Посажено бройлеров, гол.
Срок выращивания, (дн.)
Среднесуточный прирост, (г)
Живая масса одной головы на конец
опыта, (г)
Сохранность, (%)
Опыт
22500
Группы
42
Контроль
22500
42
44,4
1970"
42,4
1904
96,8"
93,6
Примечание: х - результаты статистически достоверны р<0,01
Таблица 8
Бактериальная обсеменённость воздуха птичников до и после
дезинфекции препаратом пербакса
Возраст,
птицы.
дни
15-17
28-30
Группы
Опыт
до обработки
погибло после
обработки
Контроль
до обработки
погибло после
обработки
Опыт
до обработки
погибло после
обработки
Контроль
до обработки
погибло после
обработки
Общая
микрофлора.
тыс/м'
Осталось
после
обработки
13,8
11,2"
2,6"
6,1
16,2
4,3"
15,2
7,5
32,7
4.4"
30,2
16,7
Осталось
после
обработки
22,7
22,7
18,3"
палочка.
тыс/м'
20,5
14,5
8,4
Кишечная
26,8
5,9"
43,4
12,5
28,2
Примечание: х - результаты статистически достоверны р<0,01
15,2
17
Данные таблиц 6-8 свидетельствуют, что аэрозольная дезинфекция
воздушного бассейна и оборудования птичников 0 , 1 % раствором препаратов
пербаксан
и
бактерицид
в
присутствии
бройлеров
способствовала
значительному снижению микрофлоры, в том числе кишечной палочки.
Снижение количества микроорганизмов на 75-95% в опыте положительно
сказалось на клиническом состоянии птицы, приросте живой массы и
повышении сохранности. Аэрозольное применение 0 , 1 % раствора пербаксана и
бактерицида при расходе 1мл на 1м^ в течение 3-х дней подряд еженедельно
способствует недопущению инфекционных болезней бройлеров.
3.5 Использование препарата бактерицид для аэрозольной дезинфекции
птичников. Аэрозольную дезинфекцию птичников проводили с помощью
аэрозольного генератора «Циклон-1» и АГ-УД-2. Применяли 0,3-0,5%-ные
водные растворы бактерицида из расчёта 20 мл на 1м^. Контроль качества
профилактической аэрозольной дезинфекции птичников для содержания
бройлеров проводили через 18-24 часа после дезинфекции.
При проведении бактериологических исследований делали смывы с
объектов дезинфекции в количестве 20 проб (кормушки, поилки, стены и др.).
Из 150 птичников, обработанных аэрозольно препаратом бактерицид
0,3% концентрации из расчёта 20мл на 1м' роста санитарно - показательных
микроорганизмов в исследованных пробах не установлено. Рост и развитие
бройлеров в птичниках, продезинфицированных бактерицидом, было в
пределах физиологической нормы. Необходимо отметить, что при аэрозольном
применении бактерицида отсутствуют неприятные запахи, операторы в
птичниках находятся в более комфортных условиях, чем при аэрозольной
дезинфекции парами формальдегида. Разработанная технология аэрозольной
дезинфекции птичников препаратом бактерицид 0,3 %-ной концентрации при
норме расхода 20мл на 1 м технически проста, экономна, экологична и
успешно может заменить формальдегид, который до пяти суток оказывает
отрицательное действие на организм людей и птиц.
Аэрозольная дезинфекция одного птичника бактерицидом обходится в
300 рублей, а парами формальдегида - 840 рублей, т.е. в 2,8 раза дешевле.
Применение бактерицида позволяет при однократной дезинфекции 300
птичников иметь экономию за счёт приобретения более дешевого препарата до
160 тысяч рублей.
3.6 Производственные испытания и внедрение препаратов нового
поколения в птицеводство. При проведении производственных испытаний
антисептических средств пербаксан, пербаксан - арома и бактерицид для
санации инкубационных яиц разных видов птицы, объектов ветеринарного
надзора инкубатория, воздуха и оборудования в присутствии бройлеров,
аэрозольной дезинфекции птичников осложнений и противопоказаний по их
применению не отмечено.
При обработке препаратами инкубаториев и птичников создаётся
комфортная обстановка для работы операторов, так как в этом случае
полностью отсутствуют вредные и стойкие запахи, в отличие от использования
паров формальдегида. Вывод молодняка и сохранность цыплят, полученных из
Ig
яиц, обработанных препаратами пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид,
была на 2,1 - 3,5% выше по сравнению с контрольными партиями. Результаты
исследований представлены в таблице 9.
Таблица 9
Результаты производственного испытания антисептиков
пербаксан, пербаксан - арома и бактерицид.
п/п
1
2
3
4
5.
6
7
Наименование
хозяйств
П/р «Лебедянс­
кий»
П/р
«Рамонский»
Инкубаторий
«Лебедянский»
Инкубаторий
«Рамонский»
Инкубатории
фермеров
Липецкой
области
Инкубатории
фермеров
(Ставропольский
край)
Итого
Обработано яиц, млн.
Препараты
Перба­ Перба­ Бакте­
ксан
ксан- рицид
арома
2,5
0,5
0,3
Количество
баканализов,
(единиц)
Эффективность
качества
дезинфекции,
(%)
Вывод
молодня
кя
птицы,
285
100
82,3
%
0,5
0,2
3,1
496
100
82,6
0,5
0,3
2,5
355
100
82,3
0,4
0,2
3,2
720
100
82,6
0,7
0,2
1,5
156
100
82,4
1Д
0,3
7,2
270
100
81,9
3,8
1,5
20,0
2282
100
В
производственных условиях доказана высокая эффективность
применения препаратов пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид-70 для
профилактики инфекционных заболеваний. Установлено повышение вывода
молодняка птицы на 1,5-2,6%, увеличение сохранности и живой массы на 2,43,6%, а также экономия финансовых средств на приобретение дезинфектантов.
Бактерицидом обработано более 150 птичников при 100% эффективности
качества дезинфекции.
Аэрозольная дезинфекция птичников бактерицидом дешевле, чем парами
формальдегида в 2,8 раза. Применение указанных выше препаратов в
птицеводстве расширяет арсенал антибактериальных и дезинфицирующих
средств,
что
способствует
снижению
заболеваемости,
повышению
продуктивности и экономической эффективности отрасли птицеводства.
19
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
5.Выводы
Впервые получены, испытаны и внедрены в производство антисептики
нового
поколения
пербаксан
и
пербаксан-арома,
оказывающие
пролонгированное бактерицидное действие на грамположительные и
грамотрицательные микроорганизмы.
Установлено выраженное фунгицидное действие препаратов пербаксан,
пербаксан-арома и бактерицид в отношении Candida albicans АТСС 885-653
в дозе 1,56-6,25 мкг/ мл и Asperqillus niqer В К М F-118 в дозах 3,125-12,5
м кг/мл.
Бактерицидное действие препаратов пербаксан, пербаксан-арома и
бактерицид проявляется в минимальных биоцидных дозах (МБД) в
отношении Pseudomonas aeruqinosa А Т С С 6538Р 50-100 мкг/мл. Staph, aureus
25-100 мкг/мл; Е. coli 12,5-100 мкг/мл.
Пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид - 70 по ГОСТу 12.1.07.76 и ГОСТ
17.4 1.02-83 являются малотоксичными соединениями, относятся к III и IV
классу опасности, не обладают кумулятивным и аллергенным действием.
Разработанная
нами
методика
экстракционно-фотометрического
количественного определения бактерицида в биологическом материале,
позволила установить, что препарат не накапливается в мясе птиц
Разработаны технологические режимы санации инкубационных яиц и
объектов ветеринарного надзора инкубатория препаратами бактерицид,
пербаксан и пербаксан-арома в 0,05-0,2% концентрациях. Однократная
санация инкубационных яиц через 30-60 минут после их сбора и перед
закладкой в инкубатор повышает вывод молодняка птицы на 1,5-2,6% по
сравнению с четырёхкратной дезинфекцией парами формальдегида.
Применение препаратов пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид -70 для
обеззараживания оборудования и инкубационных яиц, мясных кур, уток и
индеек
в хозяйствах
различных форм собственности полностью
обеззараживает их поверхность и объекты ветеринарного надзора от
возбудителей сальмонеллёза, стафилококкоза, псевдомоноза и эшерихиоза,
способствует повышению вывода молодняка и увеличению его сохранности
в первый месяц жизни на 1,5-3,8%.
8. Использование препаратов пербаксан и бактерицид - 70 в 0 , 1 %
концентрации при норме расхода 1мл/м^ профилактирует инфекционные
болезни у бройлеров, способствует повышению живой массы и сохранности
на 2,2-4,5%.
9. Разработана технология и режимы применения препарата бактерицид 0,3%
концентрации в целях аэрозольной дезинфекции птичников, для чего
применяют генераторы «Циклон-1» и АГ-УД-2 при расходе препарата 20мл
на 1м^ и экспозиции 18-24 часа. Эффективность качества аэрозольной
дезинфекции бактерицидом составляет 100%.
10.Экономическая эффективность применения препаратов нового поколения
пербаксан,
пербаксан-арома
и
бактерицид
для
обеззараживания
инкубационных яиц разных видов птицы и объектов ветеринарного надзора
на 1 млн. яиц составляет более 200 тысяч рублей в ценах 2005года по
20
сравнению с обработкой парами формальдегида или препаратом септабик.
Внедрение бактерицида -70 для аэрозольной дезинфекции птичников на
птицефабриках позволило снизить финансовые затраты на приобретение
дезинфектантов в 2,8 раза.
6. Практические предложения
1. Для применения в ветеринарии рекомендуются препараты нового поколения
пербаксан, пербаксан-арома и бактерицид, оказывающие фунгицидное на
Candida albicans и Asperqillus niqer и пролонгированное бактерицидное
действие
в отношении
грамположительных
и
грамотрицательных
микроорганизмов. Вышеуказанные препараты применяют для дезинфекции
инкубационных яиц разных видов птицы (кур, уток, индеек), объектов
ветеринарного надзора инкубатория, санации воздуха в присутствии птицы
и аэрозольной дезинфекции птичников, в соответствии с Наставлением по
применению бактерицида в ветеринарии, одобренные Советом по
ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии от 25 февраля
2004года и Рекомендации по применению бактерицида в ветеринарной
медицине (одобрены Учёным Советом Г Н У С Н И И Ж К в мае 2005года).
2. Для стандартизации и сертификации новых препаратов и контроля их по
активнодействующему веществу использовать Н Г Д , утверждённую в
установленном порядке и согласованную Департаментом ветеринарии
Минсельхоза Р Ф , на препарат бактерицид Г У 9336-05324181-04.
3. Аэрозольную дезинфекцию воздуха в присутствии птицы с целью
профилактики инфекционных болезней проводить препаратами пербаксан и
бактерицид 0 , 1 % концентрации из расчёта 1мл на 1м^ в течение трёх дней
подряд и экспозиции 30 минут.
4. Профилактическую аэрозольную дезинфекцию птичников проводить 0,3%
раствором бактерицида при норме расхода 20мл на м^ и экспозиции 18-24
часа. Для получения аэрозоля использовать аэрозольные генераторы
«Циклон-1» или АГ-УД-2.
б.Список опубликованных работ по теме диссертации:
1.Николаенко, В.П. Получение препарата «Брок^септ» и его использование.
/В.П. Николаенко, Р.В. Гурченко, Г.В. Ляпохов, А.Н Богачёв// Информ. листок
№63-003-04 /ЦНГИ. — Ставрополь, 2004. — С. 3.
2.Николаенко, В.П. Опыт использования антисептика «Пербаксан» для санации
инкубационных яиц индеек / В.П. Николаенко, Г.В. Ляпохов //Ветеринарная
служба Ставрополья.-2005.->Г22.-С.18-20.
З.Николаенко, В.П. Применение препаратов пербаксан и пербаксан-арома для
дезинфекции утиных яиц и инкубаторов /В.П. Николаенко, И.Н. Щедрое, Г.В.
Ляпохов //Ветеринарная служба Ставрополья.-2005.-№2.-С.20-22.
4.Николаенко, В.П. Бактерицид для обеззараживания объектов ветнадзора /В.П.
Николаенко, Г.В. Ляпохов //Ветеринарная служба Ставрополья.-2005.-№3.-С.ЗО35.
21
5.Николаенко, В П. Изучение антимикробного и фунгицидного действия
препаратов нового поколения /В.П. Николаенко, Г.В. Ляпохов //Ветеринарная
служба Ставрополья.-2005.-№3.-С.20-25.
б.Николаенко, В П Применение антисептика бактерицид в ветеринарной
медицине: Рекомендации /В.П Николаенко, Г.В. Ляпохов //Ставрополь- 2005 С.24.
7 Николаенко, В.П. «Бактерицид» - антисептик нового поколения для
ветеринарной медицины /В.П.Николаенко, И И. Щедров, Г.В. Ляпохов //БИО.2005.-№5-С.12-14.
8.Николаенко, В.П. «Бактерицид» - высокоэффективное антисептическое
средство нового поколения /В.П. Николаенко, И.Н. Щедров, Г.В. Ляпохов
//Вестник РАСХН.-2005.-№3-С.72-74.
9. Николаенко, В.П. «Бактерицид» - антисептик нового поколения для
ветеринарной медицины /В.П. Николаенко, И.Н. Щедров, Г.В. Ляпохов //БИО.2005.-№6-С.14-16.
10. Николаенко, В.П Антимикробное и фунгицидное действие препаратов
нового поколения / В.П. Николаенко, Г.В. Ляпохов //Птицеводство. - 2005. № 6 . - С . 30-31.
Ляпохов Геннадий Васильевич
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учёной
степени кандидата ветеринарных наук
Подп к печати 18 10 05 Заказ№74 Формат 60x84 Г16 Бумага офсетная
Уел изд л 1,5 Тираж 100 ък%
Отдел оперативной полиграфии СНИИЖК
г Ставрополь, пер Зоотехнический 15
4
н
^20651
РНБ Русский фонд
2006-4
22295
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
1 019 Кб
Теги
bd000102368
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа