close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Чвала

код для вставкиСкачать
Организация и проведение
сличительных испытаний
(грипп птиц, болезнь
Ньюкасла), обзор результатов
2012-2013 гг.
Чвала Илья Александрович,
зав. реф. лаб. вирусных болезней птиц,
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Нормативные документы
• ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 Общие требования к
компетентности испытательных и калибровочных
лабораторий
• ISO/IEC 17043:2010 “Conformity assessment—General
requirements for proficiency testing,” «Оценка соответствия.
Общие требования к проверке квалификации»,
• Межлабораторные сравнительные испытания при
аккредитации и инспекционном контроле испытательных
лабораторий. Методика и порядок проведения. Р 50.4.0062002
• Правила организации проведения межлабораторных
сличительных испытаний и профессионального
тестирования специалистов учреждений, осуществляющих
лабораторные исследования в области ветеринарии (утв.
Федеральной службой по ветеринарному и
фитосанитарному надзору 25 января 2010 г.)
Участие Референтной лаборатории
вирусных болезней птиц в
международных МСИ
• Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie,
Падуя, Италия (FAO/OIE референтная
лаборатория),
• DEFRA, Animal Health and Veterinary
Laboratories Agency, Вэйбридж, Великобритания
(OIE референтная лаборатория),
• GD Animal Health Service, Дэвентер, Голландия,
С учетом Laboratory Proficiency Testing (OIE)
http://www.oie.int/en/our-scientific-expertise/reference
-laboratories/proficiency-testing/
Задачи МСИ
Laboratory Proficiency Testing (OIE)
• Оценка способности лабораторий проводить
исследования с использованием конкретного
метода/тест-системы,
• Оценка достоверности исследований конкретного
специалиста,
• Проверка точности калибровки оборудования,
• Оптимизация используемого или аппробация
нового метода,
• Приведение количественных результатов в
соответствие (устранение межлабораторных
отличий)
Программа МСИ
• Стандартные условия исследования (в т.ч. методы,
оборудование, диагностические тест-системы, и
др.),
• Количество проб для каждого из методов
исследования (раундов),
• Выбор штаммов для изготовления шифрованных
проб,
• Гарантия качества: однородность, активность и
специфичность, стабильность, надлежащая
маркировка и условия хранения/транспортировки,
• Сбор и анализ результатов,
• Оценка результатов (статистические методы?),
• Корректирующие меры
Стандартные методы?
•Перечень нормативной документации, разрешенной для
использования в государственных ветеринарных лабораториях при
диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля
безопасности сырья животного и растительного происхождения от
30 июля 2009 г. N 02-03-48/563
•ГОСТ 25581-91 Птица сельскохозяйственная, синантропная, дикая
и экзотическая. Методы лабораторной диагностики гриппа
•ГОСТ 25587-83: Птица сельскохозяйственная. Методы
лабораторной диагностики болезни Ньюкасла
•Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц
(Приказ Минсельхоза России от 3 апреля 2006 года N 105)
•Методические указания по лабораторной диагностике болезни
Ньюкасла и классической чумы птиц (гриппа птиц) ГУВ МСХ СССР
1972 год
•МУ по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни
в реакции торможения гемагглютинации Департамент ветеринарии
N 13-7-2/988 от 23.06.1997
Полимеразная цепная реакция
• Тест-система для обнаружения вируса гриппа А методом ПЦР,
НПО «Нарвак»,
• Тест-система для обнаружения и дифференциации вируса
гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом ПЦР, НПО «Нарвак»,
• Тест-система для выявления и дифференциации вируса гриппа
птиц методом полимеразной цепной реакции «ГРИПП», вариант
EPh, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва,
• Тест-система для выявления и дифференциации вируса гриппа
птиц методом полимеразной цепной реакции «ГРИПП» вариант
FRT, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва,
• Тест-система для обнаружения вируса гриппа А методом ПЦР,
ООО «Ветбиохим», г. Москва,
• Тест-система для обнаружения и дифференциации вируса
гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом ПЦР, ООО «Ветбиохим», г.
Москва,
в отдельных случаях наименования тест-систем приводились
недостаточно полно, или без указания варианта проведения
исследований (в режиме «реального времени» или ОТ-ПЦР).
Реакция торможения гемагглютинации
• Набор для выявления антител к вирусу гриппа птиц
подтипа Н5 в РТГА, ФГБУ «ВНИИЗЖ»,
• Набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской
болезни в РТГА, ФГБУ «ВНИИЗЖ»,
• Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа
птиц в РТГА, ОАО «Покровский завод биопрепаратов»,
• Набор компонентов для выявления антител к вирусу
ньюкаслской болезни птиц в РТГА, ООО «Кронвет»,
• Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа
птиц в РТГА, ООО «Щелковский завод фармацевтических
и ветеринарных препаратов».
не все участники испытаний предоставили сведения по
наименованиям и сериям использованных наборов
Оборудование
Laboratory Proficiency Testing (OIE):
количество проб не менее 3/раунд
2013 год:
ПЦР – 5 проб (антиген вируса гриппа
различных подтипов, «нормальный»
(отрицательный) антиген),
РТГА – 4 сыворотки крови кур
(гипериммунные сыворотки к вирусам
гриппа и ньюкаслской болезни,
нормальная (отрицательная) сыворотка)
H5
100 A/tern/South Africa/61(H5N3)
100
H5N3 Antigen
100
CY015081 A/chicken/Scotland/1959 H5N1
M18450 A/duck/Ireland/113/1983 H5N8
CY120776 A/duck/Moscow/4182/2010 H5N
A/ostrich/S Africa/AI2114/2011H5N2
100
JQ737221 A/mallard/Czech/14602/11 H5N2
AB677936 A/duck/Mongolia/194/2011 H5N3
CY049756 A/gadwall/Altai/1202/2007 H5N2
100
GU228593 A/mallard/Crimea/224/2008 H5N2
AB241624 A/duck/Hokkaido/101/04 H5N3
99
100
AB558479 A/duck/Tsukuba/189/08 H5N2
74
AB241621 A/duck/Mongolia/500/01 H5N3
GQ162786 A/duck/Primorie/2621/2001 H5N2
100
GQ227604 A/duck/Primorie/2633/2001 H5N3
100
FJ654295 A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1
HQ630838 A/grebe/Tyva/2/2010 H5N1
A/chicken/Magelang/662-763/2007H5N1
CY105894 A/chicken/Ukraine/AV453/08 H5N1
100
FJ445017 A/chicken/Iran/53-3/08 H5N1
100
0.01
82
98
DQ864719 A/chicken/Volgograd/236/06 H5N1
DQ864711 A/duck/Novosibirsk/02/05 H5N1
A/chicken/Netherlands/1/03(N7)
73
A/turkey/Italy/9289/2002 H7N3
A/mallard/Italy/199/01(N3)
83 A/turkey/Italy/251/2003(N3)
A/duck/Italy/4609/2003(N2)
H7
A/turkey/Italy/4372/2004(N3)
A/duck/Italy/4692-9/2004(H7)
A/mallard/Georgia/2/2010 H7N7
A/mute swan/Hungary/5973/2007(N7)
A/mallard/Georgia/3/2010 H7N3
A/garganey/Crimea/2027/2008(N8)
79 A/Anas crecca/Spain/1460/2008(N9)
A/turkey/Italy/2984/2000(N1)
90 A/turkey/Italy/4580/1999 H7N1
A/swan/Shimane/42/99(N8)
96
A/ch/Zhejiang/DTID-ZJU01/2013(N9)
67
A/duck/Korea/A117/2010(N6)
A/chicken/Pakistan/1/2004(N3)
A/chicken/Japan/1925(H7N7)
A/chicken/FPV/Rostock/1934 H7N1
86
A/FPV/Dutch/27(H7N7)
H7N7 Antigen
99
81
0.02
A/FPV/Dutch/1927(H7N7)
A/fowl/Dobson/1927(H7N7)
A/chicken/Brescia/1902(H7N7)
A/fowl/Weybridge 1934 H7N3
87 A/FPV/Weybridge(H7N7)
Вирус ньюкаслской болезни
Результаты РТГА (Н5) с
использованием референтных
сывороток и антигенов,
отечественных наборов
Положительная
сыворотка
АГ Н5N3
Производител
ь2
АГ Н5N1
«Новосибирск
ий»
ФГБУ
«ВНИИЗЖ»
АГ Н5N2
Приморский
ФГБУ
«ВНИИЗЖ»
1:1024
1:1024
1:256
1:512
1:1024
1:512
1:512
1:128
1: 256
1:1024
1:1024
1:512
1:512
1:256
1:256
1:1024
1:512
1:1024
1:256
1:512
1:128
1:256
1:32
1:32
1:16
1:32
1:64
1:128
1:8
1:16
1:16
1:16
1:8
1:16
1:64
1:64
1:8
1:8
1:1024
1:1024
1:512
1:1024
1:1024
1:512
1:512
1:256
АГ
Н5N1
IZSVe
АГ
Н5N2
IZSVe
АГ
Н5N3
IZSVe
АГ
Н5N9
IZSVe
Н5N1, IZSVe
1:2048
1:1024
1:1024
1:1024
Н5N2, IZSVe
1:1024
1:2048
1:1024
Н5N3, IZSVe
1:1024
1:1024
Н5N9, IZSVe
1:1024
Н5N3, Производитель
1
Н5N3, Производитель
2
Н5N1,
«Новосибирский»
ФГБУ «ВНИИЗЖ»
АГ Н5N3
Производит
ель 1
•
•
•
•
A/mallard/Italy/3401/2005 H5N1
A/turkey/Italy/1980 H5N2
A/duck/Italy/775/2004 H5N3
A/chicken/Italy/22A/1998 H5N9
• A/chicken/Italy/1067/1999 H7N1
• A/turkey/Italy/9289/2002 H7N3
• A/macaw/England/628/1980 H7N7
THE 2011-2012 WHO INFLUENZA REAGENT KIT
FOR IDENTIFICATION OF INFLUENZA ISOLATES
Produced and distributed by:
WHO COLLABORATING CENTER FOR
SURVEILLANCE,
EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF INFLUENZA
Located at:
Centers for Disease Control and Prevention
Influenza Division
Virus Surveillance and Diagnosis Branch, G-16
1600 Clifton Road, NE
Atlanta, Georgia 30333, U.S.A.
Telephone: 404-639-3591
Fax: 404-639-0080
In Collaboration with
Influenza Reagent Resource (IRR) and American
Type Culture Collection (ATCC)
http://www.influenzareagentresource.org
Технология изготовления
шифрованных проб
• Изученные штаммы, свободные от
контаминации,
• Получение высокоактивных, специфичных и
стабильных образцов,
• Проверка показателей с использованием
различных методов и тест-систем на всех
этапах производства, сроках хранения
• Объем проб: антигены по 1мл, сыворотки по
0,5мл, т.е. в количестве, достаточном для
тестирования испытуемым методом, возможно
исследование дополнительными методами
Анализ результатов - качественный
Статистическая обработка данных не проводится
ввиду:
• использования тест-систем различных
производителей (особенности наборов и
реагентов),
• особенностей методов РТГА и ПЦР (ОТ- или
ОТ-реального времени),
• уровень оснащенности лабораторий
(использование оборудования различных
производителей).
Результат МСИ (для каждого образца):
удовлетворительный, неудовлетворительный,
сомнительный
Корректирующие меры
• Стажировка специалистов лаборатории –
участника МСИ в профильных
лабораториях,
• Расширение перечня применяемых тестсистем и методов,
• Совместный анализ и устранение ошибок
(организатор и участник)
Наиболее распространенные ошибки
МСИ-2012
• ПЦР - техническая ошибка?, контаминация?
• РТГА (идентификация антигена и выявление
антител) – низкая активность положительных
сывороток (от 1:16-1:32), использование
единственного набора (без последующего
подтверждения), неспецифическая реакция.
Рекомендации Участникам МСИ
• Использование тест-систем нескольких
производителей,
• Использование дополнительных методов
(РДП, ИФА, варианты ПЦР),
• Проведение исследований параллельно
несколькими специалистами,
• Анализ полученных результатов до отправки
организатору,
• Подробный отчет о результатах
исследований, с комментариями
специалистов
Спасибо за внимание!
e-mail: [email protected]
Документ
Категория
Презентации
Просмотров
26
Размер файла
4 690 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа